recomBlot BorreliaNB IgG e IgM - Mikrogen

ecomBlot BorreliaNB IgG/IgM Istruzioni per l’uso
9.6. Reazione con il substrato
Aggiungere 1,5 ml di soluzione di substrato in ogni pozzetto e incubare per 3-5 minuti, sotto lieve
agitazione e sotto osservazione, a temperatura ambiente.
Importante!
Osservare il processo di reazione cromatica e lasciare tutte le strisce nella soluzione di
substrato finché le strisce incubate con il siero di controllo debole positivo mostrano le seguenti
bande:
test IgG: p100, VIsE, p41, p18, p41/i da B. garinii e B. afzelii
test IgM: p41, OspC e p41/i da B. garinii e B. afzelii
La reazione cromatica può essere eccessiva con sieri altamente positivi. Raccomandazione:
Interrompere prima la reazione cromatica in queste strisce.
9.7. Arresto della reazione
1. Dopo che la soluzione è stata aspirata, lavare brevemente le strisce per tre volte con acqua
deionizzata.
2. Utilizzare pinzette di plastica per rimuovere attentamente le strisce dall’acqua e porle tra 2 strati di
carta assorbente e lasciarle asciugare per circa 2 ore. Le strisce possono essere attaccate con
adesivo al modulo di valutazione allegato ed i risultati possono essere riportati nel protocollo.
3. Le strisce devono essere conservate al riparo dalla luce.
Incubazione rapida (2 ore)
Il test recomBlot BorreliaNB può essere eseguito in alternativa con un tempo di incubazione del
campione di sole 2 ore.
A tale scopo, i campioni da sottoporre a test ed i sieri di controllo devono essere utilizzati a
concentrazioni superiori.
I seguenti passaggi sono diversi in confronto alla procedura del test descritta al punto 9:
9.2. Incubazione dei campioni, punto 2: Aggiunta dei campioni
Procedura per il test IgG: 25 µl di un campione non diluito (siero o plasma umano) e del
corrispondente controllo debole positivo (eventualmente del controllo negativo e/o del controllo positivo)
vengono pipettati nel pozzetto assegnato (diluizione 1 + 80).
Procedura per il test IgM: 50 µl di un campione non diluito (siero o plasma umano) e del
corrispondente controllo debole positivo (eventualmente del controllo negativo e/o del controllo positivo)
vengono pipettati nel pozzetto assegnato (diluizione 1 + 40).
Il vassoio viene incubato per 2 ore a temperatura ambiente.
9.3. Lavaggio
La fase di lavaggio viene eseguita per un totale di tre volte.
9.4. Incubazione con coniugato
Le strisce devono essere incubate per 45 minuti con la soluzione di coniugato opportunamente
preparata.
9.5. Lavaggio
La fase di lavaggio viene eseguita per un totale di 3 volte.
9.6. Reazione con il substrato
Incubare per 5-15 minuti, sotto lieve agitazione e sotto osservazione, a temperatura ambiente.
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