recomBlot BorreliaNB IgG e IgM - Mikrogen

10. Riassunto della procedura del test
GIRBBB015IT.DOC - 9 -
Istruzioni per l’uso recomBlot BorreliaNB IgG/IgM
Incubazione over night Incubazione per 2 ore
1. portare tutti i reagenti a temperatura ambiente
2. depositare le strisce in 2 ml di tampone di lavaggio B pronto all’uso e verificare che siano
completamente immerse nello stesso
3.
aggiungere il campione del paziente / siero di controllo
IgG: 10 µl IgM: 20 µl IgG: 25 µl IgM: 50 µl
4. incubare a temperatura ambiente sotto lieve agitazione
Overnight 2 ore
5. lavaggio in agitazione con 2 ml di tampone di lavaggio B pronto all’uso (5 minuti ogni lavaggio)
quattro volte tre volte
6. aggiungere 2 ml di soluzione di coniugato opportunamente preparata
7. incubare a temperatura ambiente sotto lieve agitazione
1 ora 45 minuti
8. lavaggio in agitazione con 2 ml di tampone di lavaggio B pronto all’uso (5 minuti ogni lavaggio)
quattro volte tre volte
9. aggiungere 1,5 ml di soluzione di substrato, incubare sotto lieve agitazione a temperatura
ambiente (per le bande si veda 9.6)
3-5 minuti 5-15 minuti
10. lavare le strisce almeno tre volte con acqua deionizzata
11. asciugare le strisce tra 2 fogli di carta assorbente per 2 ore e leggere il risultato
11. Valutazione
11.1. Valutazione dell’intensità delle bande
1. In ogni test deve essere incluso un controllo debole positivo, indipendentemente dal numero di
campioni. La reattività del controllo debole positivo serve come valore soglia e come discriminante
rispetto alla reattività del fondo.
2. Riportare la data, il lotto, il numero di provetta e la classe anticorpale rilevata sul modulo di
valutazione allegato.
3. Riportare il numero di identificazione del campione sul modulo di valutazione.
4. Incollare le strisce di test mediante colla a stick sui campi corrispondenti del modulo di valutazione.
A tale scopo, posizionare le strisce di test con la banda di controllo della reazione all’altezza delle
linee segnate. Utilizzare quindi un nastro adesivo trasparente per fissare le strisce a sinistra rispetto
alla linea segnata. L’adesione completa della striscia di test con colla o con nastro adesivo può
comportare aberrazioni della colorazione.
5. Posizionare la striscia di test di controllo pre-sviluppata con le bande di antigene segnate sulle
strisce di test fissate, in modo che le bande di controllo della reazione siano allineate. La striscia di
test pre-sviluppata è specifica per il kit e ha origine dallo stesso foglio di nitrocellulosa delle strisce di
test presenti nel kit. Sono riportati i pesi molecolari e le indicazioni delle bande degli antigeni.
6. Le intensità delle bande vengono valutate per confronto con la reattività del controllo debole positivo
in modo indipendente per ciascuna classe di immunoglobuline (si confrontino il paragrafo 11.2 e la
tabella 3). Riportare sul modulo di valutazione i valori ottenuti.