Lezioni di genetica medica, prima parte Triennali ... - Vincenzonigro.it

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TIPICA MISCELA DI REAZIONE 25 o 50μl in una provetta micro Eppendorf (0.2 o 0.5 ml) COMPONENTE VOLUME Concentrazione finale 10 X PCR Buffer 5μl 1X 10 X dNTPs (2mM) 5μl 200μM 200 Forward primer (5 pmols/μl) 5μl 0.5μM 0.5 Reverse primer (5 pmols/μl) 5μl 0.5μM 0.5 M (25pmols/50μl) (25pmols/50 l) DNA genomico stampo 2μl 1μg polimerasi termostabile (5U/μl) 0.2μl 0.2 1 unità unit H2O (a 50μl di volume finale) 27.8μl 27.8
• 30–35 cicli ciascuno comprendente: – denaturazione (95°C), 10-40 sec – annealing (50–65°C), 30-120 sec – polimerizzazione (68-72°C), il tempo dipende dalla lunghezza del frammento I cicli della PCR
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numerazione dei nucleotidi • Il n
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Mutationi osservate T>A or G , C>G
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sindrome di Pfeiffer • alcuni paz
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mutazioni frame-shift • Le mutazi
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Nucleotidi intronici fiancheggianti
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1000 900 800 700 600 500 400 300 20
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Progeria Hutchinson-Gilford • nuo
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