12 - IRSA - Cnr

A conclusione della sperimentazione volta alla
messa a punto della procedura SPE sono state
effettuate prove di eluizione con volumi crescenti di
acetone (1x10 mL, 2x10 mL e 3x10 mL) e Strata-X
come fase adsorbente per valutare l’effetto del
volume di fase eluente sull’efficienza di recupero
degli analiti. I recuperi più elevati sono stati ottenuti
con 2x10 mL di acetone (dati non mostrati);
quest’ultimo risultato, insieme a quelli descritti in
precedenza, hanno consentito di definire una
procedura ottimizzata (fase adsorbente Strata-X,
acidificazione del campione a pH=3,6, fase eluente
2x10 mL di acetone) che è stata utilizzata nelle
successive prove di validazione su matrici reali.
Notiziario dei Metodi Analitici
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3.3 Validazione del metodo
n.1 (2012)
La precisione e l’accuratezza del metodo sono state
valutate effettuando prove di recupero da campioni
reali contaminati artificialmente con aggiunte note
degli analiti oggetto di studio. I campioni reali erano
costituiti da acqua del fiume Tevere (1000 mL) e da
un refluo in ingresso ed uscita di un impianto
municipale di depurazione (500 mL).
Tab. 3 - Accuratezza e precisione (ripetibilità)) ottenute utilizzando diverse fasi adsorbenti (Strata X, Si-C18) e
procedure di estrazione (1-2-3, come in Tab. 2)
Composto Strata-X
(n=5)
Si-C18
(n=5)
1 2 3 1 2 3
R ± RSD R ± RSD R ± RSD R ± RSD R ± RSD R ± RSD
Carbamazepina 85 ± 8 80 ± 11 93 ± 10 82 ± 5 87 ± 7 86 ± 5
Acido clofibrico 95 ± 6 50 ± 4 91 ± 4 82 ± 8 44 ± 6 88 ± 3
Ketoprofene 100 ± 3 55 ± 7 96 ± 12 69 ± 6 35 ± 3 82 ± 8
Estradiolo 62 ± 6 83 ± 12 91 ± 6 59± 3 81 ± 12 83 ± 10
Naproxene 74± 9 65 ± 6 97 ± 3 65± 3 53 ±10 84 ± 6
Etinilestradiolo 69± 4 66 ± 10 85 ± 8 61± 3 85 ± 9 80 ± 9
Estrone 3 ± 13 78 ± 8 80 ± 10 32 ± 10 86 ± 5 74 ± 13
Fenoprofene 75 ± 9 50 ± 5 100 ± 5 74 ± 13 44 ± 7 81 ± 10
Diclofenac 56± 2 57 ± 8 97 ± 5 10± 3 32 ± 10 73 ± 6
Ibuprofene 80 ± 10 60 ± 12 105 ± 7 63 ± 6 46 ± 11 86 ± 9
Gemfibrozil 75± 4 70 ± 6 92 ± 9 9± 3 51 ± 7 77 ± 5
Fenofibrato 17 ± 6 70 ± 14 88 ±13 35 ± 12 51 ± 14 63 ± 12
R=recupero (%); RSD=deviazione standard relativa
Le concentrazioni scelte per le aggiunte sono state
selezionate in base ai valori riscontrati, per i diversi
analiti, in acque superficiali e di scarico e variavano
nell’intervallo 50-1000 ng/L. Il calcolo delle
percentuali di recupero è stato effettuato tenendo
conto delle concentrazioni presenti nei campioni
senza aggiunta. La precisione, la ripetibilità (RSD) e
il limite di quantificazione (LOQ) sono riportati in
Tab. 4. I valori di recupero ottenuti con campioni di
acqua di fiume sono in buon accordo con i dati
riportati da Santos e collaboratori (2005) per la
stessa matrice, risultando compresi tra 86%
(estradiolo) e 104% (ibuprofene).
Nel caso dei reflui, il recupero più elevato è stato
ottenuto con il ketoprofene (100%) nell’effluente
mentre i recuperi più bassi hanno riguardato acido
clofibrico, etinilestradiolo ed estradiolo (65, 76 e 79%,
rispettivamente) nell’influente. La ripetibilità
complessiva (n=5) della procedura di estrazione si è
rivelata soddisfacente con valori di RSD che vanno
dal 4% al 13% per l’acqua di fiume e dal 5% al 16%
per i reflui. I LOQ per ciascun composto sono stati
calcolati in base al rapporto segnale-rumore
ottenuto analizzando, mediante HPLC-UV-FL,
campioni acquosi contaminati artificialmente,
utilizzando almeno cinque cromatogrammi differenti.