APPUNTI DI ISTOLOGIA aa 2007/2008 Giordano Perin - Istituto ...

Giordano Perin
Microscopia
o Primaria o spontanea.
o Secondaria o indotta.
In ogni caso dipende dal tipo di fluorocromo scelto.
LE SEZIONI: la scelta della appropriata sezione di taglio è estremamente importante per una corretta
osservazione del campione in questione, è inoltre importante tenere presente che una struttura
tridimensionale tissutale può essere sezionata in modi molto diversi fra loro, può quindi risultare
decisamente diversa da campione a campione, una cellula può essere sezionata:
• LATERALMENTE e quindi il nucleo risulta invisibile.
• A META’: e quindi essere completamente visibile.
• SULLA MEMBRANA: e quindi risultare praticamente invisibile.
Quando si ha a che fare con strutture più complesse le combinazioni aumentano molto.
MICROSCOPIO ELETTRONICO: il microscopio elettronico è molto utilizzato in istologia per le sue
capacità di risoluzione praticamente irraggiungibili con altri strumenti di livello simile; un microscopio di
questo tipo deve essere mantenuto in situazioni ottimali per funzionare correttamente.
MICROSCOPIO ELETTRONICO A TRASMISSIONE: un microscopio elettronico a trasmissione funziona grazie
ad una differenza di potenziale estremamente elevata (80.000V) che accelera degli elettroni da un
filamento di tungsteno lungo un tubo; questo flusso va ad attraversare una sezione sottilissima di campione
fissato su un retino estremamente fine, l’immagine è infine ulteriormente ingrandita da un sistema di lenti.
Il funzionamento SFRUTTA LA DIVERSA DENSITA’ DEI TESSUTI e quindi la DIVERSA RISPOSTA ALLA
COLLISIONE CON IL FASCIO DI ELETTRONI ACCELERATI. Per garantire il corretto funzionamento del
meccanismo:
1. È necessario creare delle sezione piccolissime di tessuto: per poterlo fare si utilizza
l’ULTRAMICROTOMO, uno strumento capace di creare sezioni di 80nm, uno spessore sufficiente a
far passare gli elettroni; questo macchinario funziona grazie ad una lama estremamente tagliente e
precisa che va spesso cambiata per garantire la sua efficienza, il campione cade in un pozzetto
d’acqua da quale viene pescato con il retino metallico di sostegno stesso.
2. Non si può utilizzare paraffina, altererebbe l’integrità dell’immagine, uso una resina epossidica
come fissatore.
3. Devo utilizzare un retino metallico di sostegno, non un vetrino.
Velocità e correttezza delle operazioni sono essenziali per ottenere un buon campione.
MICROSCOPIO ELETTRONICO A SCANSIONE: utilizzato per visualizzare parti di tessuto disidratate e
ricoperte d’oro per far emergere dati dettagli.
In generale per la MICROSCOPIA ELETTRONICA qualsiasi errore operativo compromette il campione in
analisi.
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