Capitolo 11 - Omero

Le analisi constano di due fasi fondamentali:
l’immobilizzazione del ligando sul sensor chip, e lo studio
vero e proprio dell’interazione ligando-analita.
Immobilizzazione del ligando
La fase in cui il LIGANDO viene immobilizzato sulla
superficie del chip viene detta COUPLING.
Le reazioni chimiche coinvolte nel processo di
immobilizzazione del ligando sul chip CM5, che è
rappresentato da tre eventi fondamentali:
‣ 1. ATTIVAZIONE: i gruppi carbossilici vengono attivati
chimicamente tramite N-etil-N’-(3 dimetilaminopropil)
carbodimide cloridrato (EDC) e N-idrossisuccinimmide
(NHS).
‣ 2. COUPLING: il ligando reagisce coi gruppi carbossilici
attivati della matrice. I gruppi funzionali della molecola
di ligando coinvolto in questa reazione possono essere
diversi, nel caso delle proteine si forma un legame
amidico con i gruppi amminici degli amminoacidi basici
(AMINE COUPLING).
‣ 3. INATTIVAZIONE: la succinimmide che non ha reagito
con il ligando viene sostituita con ETANOLAMINA.