Candida - SunHope.it

DIMORFISMOCapacità reversibile di Candida di presentarsi in forma diblastocellula, di pseudoifa o di ifa settata in vivo o in vitro inrelazione alle diverse condizioni tissutali o colturaliPARETE CELLULAREStruttura costantePrevalentemente polisaccaridica(circa 75% peso secco)La conversione morfologica siaccompagna a modificazioniquantitative nella composizione delcell wall, associate ad altremodificazioni qualitative nel profilodelle mannoproteine, nella strutturadegli oligosaccaridi e diconseguenza, nella espressione diantigeni specifici.Il passaggio intermittente dalla forma di lievito a quella filamentosadetermina il pleiomorfismo antigenico invalidando la rispostaimmunitaria suscitata nell’ospiteil cell-wall del lievito è indispensabile affinchè ilmicete eserciti con successo la sua virulenza, inquanto stabilisce il contatto tra micete e ospiteMANNOPROTEINEADESIONEVARIABILITA’ANTIGENICAINVASIONEComplesse glicoproteinecontenente polimeri di mannosoRappresentano alcuni dei recettori di superficie che promuovono laADESIONE e quindi la colonizzazione dei tessutiIn particolare le GLUCOMANNOPROTEINE sono differentemente espresse aseconda dello stato dimorfico di Candida e sono quindi responsabili dellaVARIABILITÀ ANTIGENICA tra specie diverse di Candida e tra biotipiappartenenti alla stessa specieAlcune adesine sono differentemente espresse a seconda dello statodimorfico del fungo e quindi variazioni fenotipiche del lievito possonocomportare variazioni nella sua adesività e nelle sue proprietàantigenicheLa risposta dell’ospite, immunità cellulo-mediata e umorale, èestremamente complessa proprio per il susseguirsi di fenomeni diconversione fenotipicaCiò determina INVASIONE dei tessuti dell’ospite

Principali fattori di virulenzaParete cellulareRecettoriper C3b delcomplementoAdesineInvasivitàElusione dellasorveglianzaimmunitariaumoraleSwitching fenotipicoCapacità in vitro di alcuni ceppi di Candida di mutare inmodo reversibile e con elevata frequenza da un fenotipodominante ad uno recessivoProduzione difosfolipasiProdottiextracellulari Produzione diemolisineProduzione diproteinasiRiduzione dellafagocitosi e delkilling itracellulareProduzione disideroforiASPETTI FONDAMENTALI DELLA VARIAZIONE FENOTIPICAFormazione spontanea anche di più fenotipi di colonieReversibilità, ereditarietà e interconvertibilità del processoFrequenza maggiore di quella delle ordinarie mutazioniAumentata frequenza in presenza di basse dosi di UVSignificato non accertato nella patogenesi dell’infezioneSwitching fenotipico bianco – opaco di Candida albicansIn vitro: colonie formate da pseudoifeIn vivo: cellule più adesiveIn vitro: colonie formate da blastocelluleIn vivo: cellule meno adesiveEpitelioRisposta immuneAntigeneCandida albicansAPCFagocitosiPMNMCVariabilità nella secrezione di proteasi acidaDifferenze nell’adesione ed invasioneVariabilità antigenicaModificazioni nella sensibilità ai neutrofiliDiversa sensibilità ad antimicotici (polieni, 5-fluorocitosina, azoli)APCTHProcessazione edesposizioneantigeneTCProduzione di mediatori dell’infiammazioneBProduzione di anticorpi

Patogenesi delle candidosiDIAGNOSIPRELIEVOESAME DIRETTOESAME INDIRETTOPRELIEVONelle infezioni superficiali mucocutanee il prelievo del materialeavviene, di norma, a livello delle sedi coinvolte, a seguitodi raschiamento o mediante tampone sterileNelle infezioni invasive e sistemiche oltre al prelievo di liquidiorganici o di tessuti (biopsia) da sedi profonde clinicamentecompromesse è indispensabile l’emocoltura e raccomandabilel’esame di altri materialiEsame microscopicoRicerca colturaleAntimicogrammaESAME DIRETTOSchema di identificazione di CandidaESAME MICROSCOPICOL’identificazione presuntiva di Candida spp. si basa anche sullaevidenziazione delle specifiche caratteristiche morfologiche dellediverse specie e precisamente:la presenza o meno di pseudo-ife o di ife veregrandezza e forma delle cellule lievitiforminumero di gemme e adese alla cellula madre

Idrato di potassio (KOH) al 20%Serve a chiarificare i preparatidi annessi cutanei dissolvendola cheratinaEsame microscopico a frescoLattofenolo blue cottonAllo stesso tempo chiarificante e colorantel’acido lattico svolge un’azione chiarificante e il blu cotone colora lestrutture fungineEsame microscopico dopo colorazioneColorazione di GRAMColorazione al PASAspetto microscopico: blastospore gemmanti sferiche o leggermenteovali, delle dimensioni di 2,0-7,0 x 3,0-8,5 mm. Pseudoife ed ife vere neitessuti parassitati.Esame colturaleLa prova diagnostica principale resta tuttora la dimostrazionedell’agente etiologico tramite esame colturale, sia perché tale esame puòrisultare positivo anche in caso di negatività della ricerca microscopica,sia perché quest’ultima non fornisce, salvo eccezioni, elementi certi perl’identificazione del micetePer la coltura di primo isolamentoil terreno solidi più utilizzato èl’agar di Sabouraud con l’aggiuntadi cloramfenicolo e cicloeximide econ un pH di 5-6 Altri terreni dicoltura adoperati di frequente inlaboratorio sono il Potato Dextroseagar (PDA) o lo Yeast ExtractPeptone Dextrose (YEPD) in cui èpiù evidente il fenomeno dellavariabilità fenotipicaLe colonie si possono presentarestrutturalmente regolari o irregolari,a margini netti o frangiati, di aspettolucido, cremoso o rugoso, diforma rotondeggiante o conicaCaratteri macroscopici e microscopici di specie CandidaCambiamenti fenotipici si verificano frequentemente in specie diverse diCandida e la somiglianza morfologica delle colonie non rende possibiledifferenziare le due specie nei comuni terreni di colturaL’ utilizzo di terreni cromogeni come ilCHROMagar Candida a reso piùsemplice l’identificazione di specie

Candida dubliniensisE’ sempre più spesso isolata dal cavo orale di pazienti HIV-positivied è spesso implicata in casi di infezione ricorrente a seguito diterapia antimicotica.Test di germinazione in sieroE’ un saggio morfologico microscopico che viene abitualmentepraticato e che consente di porre in evidenza la formazione di tubuligerminativi dopo2-3 ore di incubazione a 37°C di cellule di Candida,provenienti da una colonia, in siero umano o bovinoIn CHROMagar Candida,dopo 48 h di incubazione allatemperatura di 37° C lecolonie di C. albicans uncolore verde chiaro, mentrequelle di C. dubliniensisappaiono verde scuro,C.albicans e C.stellatoidea producono tubigerminativi senza restringimento nel puntod’origine, mentre C.tropicalis può presentare,anche se raramente, tubi germinativi conrestringimento nel punto d’origineProfilo biochimicoLo studio della capacità di fermentare o assimilarecarboidrati diversi rappresenta ancora oggi un mezzoparticolarmente idoneo per l’identificazione di biotipi indiverse specie CandidaMYCOTUBEMediante un contenitore a penna divisoin scomparti, vengono insemenzatisimultaneamente 8 substratiLa lettura avviene dopo 24-48 ore diincubazione a 35 o C mediante decodificadi un codice numericoTest di assimilazionedi composti di carbonioBIOTIPIZZAZIONE MOLECOLAREI caratteri genotipici di numerosi ceppi di Candida sono oggistudiati grazie all’impiego di tecniche di biologia molecolarePulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE)L’impiego della tecnica di elettroforesi a campi elettrici alternati evidenziaesistenza di cariotipi differenti all’interno della stessa specieStudio delle sequenze dei geni 16S e 23S dell’RNA ribosomico.L’rDNA contiene regioni altamente conservate ma anche sequenze variabili il cuitasso di mutazione rimane costante nel tempo e ciò ne permette l’utilizzo a finitassonomici, per la definizione su base genetica di generi e specie.Restriction Fragments Length Polymorphism Analysis (RFLP)Analisi di lunghezza e polimorfismo di frammenti di DNA prodotti da enzimi direstrizioneRandom Amplified Polymorphic DNA (RAPD)Analisi di polimorfismo del DNA amplificato in Polymerase Chain Reaction (PCR)casualmente

ESAME INDIRETTOAntimicogrammaRicerca di anticorpi specificiLa sierodiagnosi si utilizza quasi esclusivamente in caso di micosiprofondeEssa si serve di antigeni somatici o cellulari, di antigeni metabolici edi estratti citoplasmatici, nonchè di antigeni rappresentati da mannanodel cell-wallMETODI DI DETERMINAZIONEImmunoprecipitazioneImmunofluorescenza indirettaEmoagglutinazione passivaSistemi ELISASistemi RIALa resistenza ai farmaci antifungini, molto meno frequente che neibatteri, si può sviluppare come risposta ad una pressione selettivaesercitata dall’uso di farmaci a dosaggi inappropriati.In questi casi si selezionano mutanti che hanno modificato sia lafisiologia che il corredo genetico.Nelle cronicizzazioni e nelle recidive, in cui può rendersi necessaria unaterapia di mantenimento, deve essere sempre preso in considerazioneanche il rischio potenziale della comparsa di fenomeni di resistenza aifarmaci.TERAPIAI farmaci antimicotici comprendono sia agenti topici che sistemici. Lascelta del trattamento dipende da svariati fattori, inclusi tra gli altri, iltrattamento contemporaneo con altri farmaci, la presenza di alterazionidella funzionalità epatica e la tollerabilità del paziente.La scelta dell’ antimicotico da utilizzare per via generale risultaproblematica in relazione alle strette affinità morfologichee funzionali tra le cellule fungine e animali.FARMACI TOPICIDerivati antibiotici polienici: nistatina amfotericina BDerivati imidazolici: econazolo miconazolo clotrimazoloLa loro funzione è di alterare la permeabilità della parete fungina conconseguente perdita di ioni K + e morte cellulareFARMACI SISTEMICIDerivati imidazolici idrosolubili: chetoconazolo fluconazolo itraconazolo