Capitolo 6 - Omero

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• Per l’identificazione di frammenti di DNA dallesequenze nucleotidiche in essi presenti si ricorrre allatecnica dell’ibridizzazione con “sonde” marcate(probes).• Si fanno cioè reagire i frammenti di DNA separati perelettroforesi , previa denaturazione e quindi non più adoppia elica, con una sonda oligonucleotidica ,marcata, a sequenza nota, che si legherà alla suasequenza complementare, se presente nel frammentodi DNA.
• Con il termine di sonda (probe) si indica un frammentospecifico di DNA (o RNA) reso radioattivo.Solitamente come sonde vengono utilizzati deglioligonucleotidi, cioè dei brevi (20 o più nucleotidi)filamenti lineari di DNA sintetizzati chimicamente.Questa sintesi viene realizzata automaticamente daisintetizzatori di oligonucleotidi, apparecchi chepossono produrre quantità anche elevatedell'oligonucleotide corrispondente alla sequenza danoi desiderata.• Esistono diversi metodi che possono essere utilizzatiper rendere radioattivi i frammenti di DNA o RNA.Questi metodi permettono di marcare la molecola diacido nucleico o alle due estremità (5' o 3') o in tutta lasua lunghezza.
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