laboratoriniai darbai - Biochemijos ir biofizikos katedra - Vilniaus ...
laboratoriniai darbai - Biochemijos ir biofizikos katedra - Vilniaus ...
laboratoriniai darbai - Biochemijos ir biofizikos katedra - Vilniaus ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
1. 3. Saugaus T<strong>ir</strong>palø pH. darbo Buferiniai biochemijos t<strong>ir</strong>palai laboratorijoje _____________________________________________________<br />
pagrindinës taisyklës ________________________ 29<br />
atveju pH pasikeitimà per 0,15 pH vieneto, atitinkantis ∆ [H + ] sk<strong>ir</strong>iasi net 41%.<br />
Populiariems buferiams nustatyti vadinamieji temperatûros koeficientai. Pvz., TRIS’o<br />
atveju temperatûros koeficientas –0,028 / 0 C. Jei gaminate 0,05 M TRIS–HCl pH 7,4<br />
buferá kambario (23°C) temperatûros sàlygomis, o naudosite já 4 0 C, praktiðkai reikia<br />
ruoðti 6,86 pH t<strong>ir</strong>palà. Esant 40 0 C temperatûrai, ðio t<strong>ir</strong>palo pH bus 7,4. Aiðku, daugumos<br />
buferiniø t<strong>ir</strong>palø temperatûros koeficientas daug maþesnis <strong>ir</strong> didelës átakos ðiø t<strong>ir</strong>palø<br />
pH neturi.<br />
3.5. Buferiniø t<strong>ir</strong>palø ruoðimas<br />
Buferiniai t<strong>ir</strong>palai ruoðiami dvejopai:<br />
• sumaiðant silpnà rûgðtá <strong>ir</strong> jos druskà (rûgðtiniams buferiams) arba silpnà bazæ<br />
<strong>ir</strong> jos druskà (baziniams buferiams) tam tikru santykiu. Þinant pK a arba pK b<br />
galima paruoðti norimo pH t<strong>ir</strong>palà. Sudedamøjø daliø santyká nesunkiai<br />
galima apskaièiuoti ið Hendersono <strong>ir</strong> Haselbacho lygties.<br />
• t<strong>ir</strong>palai ruoðiami ið silpnos rûgðties ar silpnos bazës, palengva pridedama<br />
ðarmo ar stiprios rûgðties iki norimo pH (t<strong>ir</strong>palo pH pokyèiai stebimi pHmetru).<br />
Pavyzdys. Kaip paruoðti litrà 0,05 M TRIS-HCl pH 8,2 t<strong>ir</strong>palo?<br />
M r (TRIS)=121,1. Litre 0,05 M t<strong>ir</strong>palo yra 50 mmol, t. y. 6,055 g TRIS’o<br />
bazës. Pasvëræ ðá medþiagos kieká, iðt<strong>ir</strong>piname maþesniame nei galutinis<br />
dejonizuoto vandens tûryje (pvz., ≅ 600 ml). Maþomis porcijomis ádedame á<br />
t<strong>ir</strong>palà HCl, pH-metru stebime pH kitimà iki reikiamos pH – 8,2. Gautà<br />
t<strong>ir</strong>palà (pH = 8,2) atskiedþiame iki 1l.<br />
6 lentelëje (þr. priedas) pateikti daþnai laboratorijoje naudojami buferiai. Parinkdami<br />
buferinæ sistemà atsiþvelgiame:<br />
• á darbinæ , t. y. rekomenduojamà naudoti t<strong>ir</strong>palo pH sritá. Tinkamiausia laikoma<br />
ta buferinë sistema, kurios pK arèiausias t<strong>ir</strong>palo pH. Jei pH = pK, t<strong>ir</strong>palo buferinë<br />
talpa didþiausia.<br />
• ar kitos t<strong>ir</strong>palo sudedamosios dalys nereaguoja su buferiu. Pavyzdþiui, t<strong>ir</strong>iant<br />
Zn 2+ <strong>ir</strong> Pb + átakà tam tikram medþiagø apykaitos procesui, nepatartina naudoti<br />
karbonatinio buferio.
Change language