laboratoriniai darbai - Biochemijos ir biofizikos katedra - Vilniaus ...
laboratoriniai darbai - Biochemijos ir biofizikos katedra - Vilniaus ...
laboratoriniai darbai - Biochemijos ir biofizikos katedra - Vilniaus ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
1. 4. Saugaus Audiniø <strong>ir</strong> darbo làsteliø biochemijos ardymas <strong>ir</strong> laboratorijoje frakcionavimas pagrindinës __________________________________________<br />
taisyklës ________________________ 35<br />
4.1 lentelë. Audiniø <strong>ir</strong> làsteliø suardymo bûdai<br />
Suardymo<br />
būdas<br />
Priemonės Suardymo apibūdinimas<br />
Mechaninis Lėkštelė <strong>ir</strong> grūstuvėlis Ląstelės ar audiniai (labai dažnai<br />
augalai) sutrinami, dažnai prieš tai<br />
Voringo (Waring)<br />
homogenizatorius<br />
atšaldžius skystu azotu<br />
4.4 Homogenizacijos t<strong>ir</strong>palo sudedamosios dalys<br />
Sukdamiesi peiliai susmulkina <strong>ir</strong><br />
sutrina ląsteles <strong>ir</strong> audinius<br />
(4.4 – C pav.)<br />
Ląstelės ar audiniai, naudojant slėgį,<br />
Daunco (Dounce)<br />
homogenizatorius<br />
sutrinami (4.4 – B pav.)<br />
Potter–Elvehjem<br />
Ląstelės ar audiniai, naudojant slėgį,<br />
homogenizatorius<br />
sutrinami (4.4 – D pav.)<br />
French presas Ląstelės ar audiniai, naudojant slėgį,<br />
perspaudžiant pro siaurą angą ar<br />
plyšį<br />
Ultragarsinio Ultragarso dezintegratorius Aukšto dažnio garsas suardo ląstelių<br />
būdu<br />
sieneles<br />
Atšaldymas/ Šaldiklis, kartais skystas<br />
Susidaro ledo kristalai <strong>ir</strong> kartotini<br />
sušildymas ledas/etanolis<br />
atšaldymo/sušildymo ciklai suardo<br />
ląsteles<br />
Cheminis Organiniai t<strong>ir</strong>pikliai. Dažniausiai T<strong>ir</strong>pinami membranų lipidai <strong>ir</strong><br />
naudojamas fenolis arba chloroformo<br />
<strong>ir</strong> metanolio mišiniai<br />
suardomos membranos<br />
Chaotropiniai junginiai (kalio Destabilizuojami membranų lipidai,<br />
tiocianatas, kalio bromidas, ličio<br />
dijodsalicilatas <strong>ir</strong> kt).<br />
membranos lengviau suardomos<br />
Fermentinis Chitinazės, pektinazės, lipazės, Suardžius fermentais ląstelės sienelę<br />
peptidazės, celiuliazės, lizocimas gaunami protoplastai, kurie lengvai<br />
arba fermentų mišiniai<br />
homogenizuojami<br />
Á homogenizacijos t<strong>ir</strong>palo bûtinieji sandai – buferinis t<strong>ir</strong>palas <strong>ir</strong> druskos, lemianèios<br />
homogenizacijos t<strong>ir</strong>palo osmosines savybes. Làstelës citozolio pH ≈7,5, taigi<br />
homogenizacijos t<strong>ir</strong>palo pH <strong>ir</strong>gi turëtø bûti silpnai ðarminis – pH 7–8 . Audiniams <strong>ir</strong><br />
làstelëms homogenizuoti naudojami fosfato, TRIS, HEPES ar kiti organiniai buferiai,<br />
kuriø pH tarp 7 <strong>ir</strong> 8 (pK = 7– 8). Làsteliø ar audinio rûðis, audinio <strong>ir</strong> homogenizavimo<br />
t<strong>ir</strong>palo santykis lemia buferio koncentracijà. Daþniausiai homogenizacijos t<strong>ir</strong>palo<br />
buferio koncentracija 20–50 mM.<br />
Làsteliø membranø <strong>ir</strong> sieneliø suardymui labai svarbios homogenizacijos t<strong>ir</strong>palo<br />
osmosinës savybës. Làsteliø <strong>ir</strong>imas palengvinamas, vartojant hipotoniná homogenizavimo<br />
t<strong>ir</strong>palà. Tokiu bûdu làsteles iðbriksta, fizikinis ardomasis poveikis sustiprinamas.<br />
Daþniausiai homogenizacijos t<strong>ir</strong>paluose druskø koncentracija 50–150 mM. Joninei<br />
t<strong>ir</strong>palø jëgai palaikyti naudojamos NaCl, KCl, (NH 4 ) 2 SO 4 druskos. Sk<strong>ir</strong>iant þinduoliø
Change language