Manuel Francisco da Costa Vitor - Estudo Geral - Universidade de ...

1.1.1. Fluorescência
1. Introdução
Uma das principais razões do uso da fluorescência em aplicações
médicas deve-se ao facto de ser possível marcar com elevado grau de
sensibilidade e selectividade um determinado analito com recurso a
marcadores de fluorescência não-tóxicos. Noutros casos, utiliza-se a
fluorescência, natural ou exógena, para a simples quantificação da
concentração de substâncias. Juntamente com estas possibilidades, o
desenvolvimento de instrumentação capaz de detectar e quantificar a luz de
fluorescência, tornou a fluorometria uma poderosa técnica de diagnóstico em
oftalmologia. [9]
A luminescência é a emissão de luz ultravioleta, visível ou infravermelha
por espécies electronicamente excitadas. Existem vários tipos de
luminescência, classificados de acordo com o modo de excitação. A
fotoluminescência é a forma de luminescência que engloba a fluorescência e o
modo de excitação que a caracteriza é a absorção de luz [10].
Uma molécula, ao absorver luz de um comprimento de onda na zona do
visível, infravermelho ou ultravioleta, fica num estado de excitação, ou seja, os
seus electrões são promovidos a orbitais mais externas, com mais energia.
Posteriormente dá-se a desexcitação da molécula, acompanhada da libertação
de fotões. Este processo é a base da fotoluminescencia.
Seguindo o famoso diagrama de Jablonski, o processo de fluorescência
pode ser explicado tendo em conta os estados electrónicos de energia dos
fluoróforos: S0, S1 e S2. Em cada estado electrónico de energia do fluoróforo
podem existir vários estados vibracionais (0,1,2) [11].
As transições entre os diferentes estados de energia, que caracterizam o
processo de fluorescência, podem ser classificadas em três fases distintas:
excitação (absorção de fotões), conversão interna e emissão (fluorescência)
[10].
De forma simplificada, o modo como estas transições ocorrem é o
seguinte [11]:
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