Gustavo Cancela e Penna Alterações moleculares na tumorigênese ...

MATERIAL E MÉTODOS:
Amostras
Foram incluídos no estudo amostras cirúrgicas de tumores tireoidianos
de 16 pacientes submetidos à tireoidectomia total após suspeita diagnóstica de
PTC, baseada em laudo citológico de biopsia aspirativa por agulha fina, guiada
por ultrassonografia. Todos pacientes apresentavam provas de função
tireoidiana dentro da faixa de referência para o método (T4 livre e TSH). O
material cirúrgico obtido foi fixado em formalina neutra tamponada a 10% e
embebidas em parafina (um a cinco blocos por caso).
Preparação dos tecidos e análise histológica
Cortes de 4μm de espessura foram realizados nos blocos obtidos. Tais
cortes, posteriormente, foram fixados em lâminas, desparafinizados e
submetidos à técnica de coloração Hematoxilina & Eosina. A avaliação
histológica de todas as amostras foi realizada por um único patologista do
Serviço de Anatomia Patológica do Hospital das Clínicas da UFMG. Essa
análise foi realizada em microscópio óptico comum, classificando os CPT de
acordo com as recomendações da Organização Mundial da Saúde (OMS)
(1988), sendo 14 CPT de histologia clássica e 2 variantes foliculares. Além
disso, alguns casos apresentavam concomitantemente bócio nodular colóide.
Imunohistoquímica
Seções adicionais de parafina foram submetidas à técnica de
imunohistoquímica para investigação de alterações na expressão da proteína
B-raf, Wwox, p53 e FHIT nas células do CPT.
Para aplicação da técnica, os cortes foram desparafinizados em xilol e
hidratados em série decrescente de etanol. A seguir, foram mergulhados em
solução de EDTA 1mM (pH 8,0), e aquecidos a 96 0 C em vaporizador steamer
por 30 minutos, para a recuperação antigênica. Após resfriamento e lavagem
dos cortes em tampão TRIS, Tris-HCl 0,05M (pH 7,6), os mesmos foram
tratados com solução de H2O2 a 3%, fundamental para o bloqueio da atividade
tecidual da peroxidase endógena. Nova lavagem com TRIS foi feita para que,
em seguida, os cortes fossem incubados com os anticorpos primários: anti-
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