INICIAÃÃO CIENTÃFICA DO PIBIC/UMC
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PRODUÇÃO DE FORMAS MUTANTES DE CITOCROMO C PARA<br />
INVESTIGAÇÃO DE SÍTIOS DE INTERAÇÃO COM MEMBRANA E<br />
MECANISMOS APOPTÓTICOS<br />
Estudante: Marcella de Freitas Reis (Biomedicina)<br />
Orientadora: Profª Drª Iseli Lourenço Nantes<br />
Co-orientadora: Profª Drª Katia Cristina Ugolini Mugnol<br />
Área de conhecimento: Bioquímica, Biologia Celular e Molecular<br />
Palavras-chave: citocromo c, mutagênese sítio-dirigida, expressão proteica<br />
[INTRODUÇÃO] O citocromo c é uma hemoproteína com peso molecular<br />
de cerca de 12kDa, tendo papel bem definido como carreador de elétrons<br />
na cadeia respiratória e ativador em processos de morte celular. Diferentes sítios<br />
do citocromo c estão envolvidos na interação da proteína com membranas<br />
biológicas e diferentes resíduos lhe conferiram evolutivamente propriedades<br />
apoptóticas. Estudos empregando formas mutantes de citocromo c permitem<br />
elucidar o efeito que diferentes resíduos têm sobre a atividade proteica.<br />
[METO<strong>DO</strong>LOGIA] Para a obtenção de formas mutantes de citocromo c foi<br />
empregada a técnica de mutagênese sítio-dirigida para substituição de aminoácidos<br />
específicos na sequência do plasmídeio PJRhrsN2. A expressão se<br />
deu em Escherichia coli BL21Star DE3 induzida por IPTG em meio Terrific<br />
contendo ampicilina e a purificação final em coluna cromatográfica de troca<br />
iônica. [RESULTA<strong>DO</strong>/DISCUSSÃO] Foram obtidas formas mutantes<br />
de citocromo c H26N/H33N, K22A/H26N/H33N, K25A/H26N/H33N e K79A/<br />
H26N/H33N com rendimento de aproximadamente 8 mg de proteína purificada<br />
por litro de cultivo. As proteínas isoladas foram submetidas a análises<br />
eletroforética, espectroscópica no UV-vis e a dicroísmo circular (CD) e dicroísmo<br />
circular magnético (MCD). [CONCLUSÃO] A técnica empregada para<br />
obtenção de formas mutantes de citocromo c mostrou-se altamente eficiente,<br />
com bom rendimento, produzindo proteínas com estrutura similar à da forma<br />
nativa, permitindo assim sua utilização em estudos relacionados ao papel de<br />
diferentes resíduos de aminoácidos na interação desta proteína com membranas<br />
e no desencadeamento de processos de morte celular.<br />
76 XIII CONGRESSO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA • UNIVERSIDADE DE MOGI DAS CRUZES
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