Centriprep® centrifugfilterenheter - Millipore
Centriprep® centrifugfilterenheter - Millipore
Centriprep® centrifugfilterenheter - Millipore
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Användarhandbok<br />
<strong>Centriprep®</strong><br />
<strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
Enheterna <strong>Centriprep®</strong> 10K och 30K är avsedda<br />
för in vitro-diagnostik<br />
Enheterna <strong>Centriprep®</strong> 3K och 50K är endast avsedda<br />
för forskningsbruk och inte för diagnostiska metoder<br />
Svenska<br />
Introduktion<br />
Centrifugfilterenheterna <strong>Centriprep®</strong> är ultrafiltreringsenheter för engångsbruk och används för<br />
rening, koncentrering, avsaltning och filtrering av biologiska prover med en volym på 2 till 15 ml. Dessa<br />
ultrafiltreringsenheter är bruksfärdiga och avsedda för de flesta centrifuger som rymmer centrifugrör på<br />
50 ml. De är enkla att använda och kan användas för höga flödeshastigheter. <strong>Centriprep®</strong>-enheten består<br />
av en provbehållare med ett förslutande skruvlock, en filtratuppsamlare innehållande ett lågadsorberande<br />
Ultracel®-membran av regenererad cellulosa och ett lufttätt lock för att isolera provet.<br />
<strong>Centriprep®</strong>-enheten är utformad så att filtrering och sedimentering av fina partiklar kan ske samtidigt<br />
utan att täppa igen membranet. Med enheten <strong>Centriprep®</strong> 50K kan 15 ml prov koncentreras till 0,6 ml på<br />
endast 20 minuter och koncentration av mindre volymer går ännu snabbare. Det är tack vare membranets<br />
låga adorptionsförmåga som den ger höga koncentrationer och vanligtvis 90 % utbyte för makromolekylära<br />
lösta ämnen. En inbyggd spärr begränsar koncentratets slutvolym till 0,5–0,6 ml.<br />
Produktfördelar<br />
För biologiska prover erbjuder <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> många fördelar jämfört med<br />
koncentrationsmetoder såsom kemisk fällning, avdunstning, frystorkning och dialys. Förberedelsetiden är<br />
minimal och enheten centrifugeras helt enkelt tills önskad koncentration har uppnåtts. Filtreringsprocessen<br />
är skonsam och man undviker potentiella problem såsom denaturering av provet eller att buffertsalter<br />
koncentreras. Eftersom koncentreringen och avsaltningen sker samtidigt i <strong>Centriprep®</strong>-enheten elimineras<br />
den provförlust som annars inträffar vid materialöverföring. Enheten är perfekt utformad för lösningar med<br />
fina partiklar eftersom filtreringen sker i motsatt riktning jämfört med sedimenteringen och därmed begränsas<br />
tilltäppning av membranet. <strong>Centriprep®</strong>-enheterna är kompletta produkter, vilket ger ökad säkerhet vid arbete<br />
med farliga prover. Eftersom allt materiel är inneslutet i enheten är risken för att användaren utsätts för<br />
biologisk fara minimerad.<br />
<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
1
Avsedd användning<br />
VARNING: Enheterna <strong>Centriprep®</strong> 10K och 30K är avsedda för in vitro-diagnostik. Enheterna<br />
<strong>Centriprep®</strong> 3K och 50K är endast avsedda för forskningsbruk och INTE för diagnostiska<br />
metoder.<br />
Forskningstillämpningar: Centrifugfilterenhet <strong>Centriprep®</strong> 3K kan användas för koncentrering och avsaltning<br />
av oligonukleotider, peptider, tillväxtfaktorer och små proteiner. Tillämpningar för enheterna <strong>Centriprep®</strong><br />
10K, 30K och 50K inkluderar koncentrering och avsaltning av eluat från kolonner och gradientfraktioner<br />
som innehåller proteiner, enzymer och antikroppar, återvinning av biomolekyler från supernatanter från<br />
cellodlingar, lysat, extrakt och andra biologiska prover samt rening av lågmolekylära komponenter (t.ex.<br />
aminosyror och antibiotika) från fysiologiska vätskor, cellodlingsmedia eller jäsningsbuljonger.<br />
Användning inom in vitro-diagnostik: Centrifugfilterenheterna <strong>Centriprep®</strong> 10K och 30K kan användas för<br />
koncentrering av makromolekyler i serum, urin, cerebrospinalvätska och andra kroppsvätskor innan vätskorna<br />
används för analys. Alla andra <strong>Centriprep®</strong>-<strong>centrifugfilterenheter</strong> är endast för forskningsbruk och inte för<br />
diagnostiska metoder.<br />
Gränsvärden för nominell molekylvikt<br />
I produktlinjen <strong>Centriprep®</strong> ingår enheter med följande gränsvärden för nominell molekylvikt (Nominal<br />
Molecular Weight Limits, NMWL):<br />
● Enheten <strong>Centriprep®</strong> 3K – 3 000 NMWL (gult membranstöd)<br />
● Enheten <strong>Centriprep®</strong> 10K – 10 000 NMWL (grönt membranstöd)<br />
● Enheten <strong>Centriprep®</strong> 30K – 30 000 NMWL (genomskinligt membranstöd)<br />
● Enheten <strong>Centriprep®</strong> 50K – 50 000 NMWL (rosa membranstöd)<br />
<strong>Centriprep®</strong>-komponenter<br />
Lufttätt lock<br />
Förslutande skruvlock<br />
Avluftningsskåra<br />
Filtratuppsamlarens skuldra<br />
Filtratuppsamlare<br />
Membranstöd<br />
Provbehållare<br />
Fyllnadslinje<br />
2 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>
Polariseringskontroll<br />
Nödvändig utrustning<br />
<strong>Centriprep®</strong>-enheter kan centrifugeras i en centrifug med variabel hastighet med antingen en ”swingingbucket”-rotor<br />
eller rotor med fast vinkel och hållare som på ett säkert sätt rymmer 50 ml centrifugrör.<br />
Centrifugen måste ha en kapacitet på 500–3 000 × g. För att se en lista på kompatibla centrifuger och<br />
rotorer, gå till www.millipore.com/rotorguide.<br />
Begränsningar<br />
Med rotor med fast vinkel kan polariseringskontrollen försämras vid låg g-kraft (under 2 000 × g).<br />
Filtratflödet kan minska beroende på provets sammansättning och det lösta ämnets koncentration.<br />
Oavsett vilken centrifug som används, överskrid inte följande gränsvärden eftersom alltför stor g-kraft kan<br />
resultera i läckage eller skador på enheten.<br />
Enhet Maximal centrifugalkraft<br />
<strong>Centriprep®</strong> 3K och 10K 3 000 × g<br />
<strong>Centriprep®</strong> 30K och 50K 1 500 × g<br />
Enheternas hållbarhet och förvaring<br />
För bästa resultat förvara <strong>Centriprep®</strong>-enheterna mellan 15 och 30 °C. Prestandan kan försämras om<br />
enheterna förvaras i extrema temperaturer (d.v.s. under 0 °C eller över 40 °C). Hållbarheten är tre år från<br />
tillverkningsdatum. Se utgångsdatum på förpackningens etikett.<br />
Försköljning<br />
Centrifugalkraft<br />
Filtrering<br />
”Swinging-bucket”rotor<br />
Membranen i <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> innehåller spårmängder av glycerin. Om detta interfererar<br />
med analysen fyll enheten med ungefär 15 ml buffert eller avjoniserat vatten och centrifugera tills det<br />
första jämviktsläget har nåtts. Dekantera filtratet och koncentratet. Upprepa vid behov tills det inte längre<br />
finns någon interferens. Våta membran måste förbli våta för att bibehålla sin funktion.<br />
<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
Polariseringsskikt<br />
Filtrering<br />
Rotor med fast<br />
vinkel<br />
3
Membranets och enhetens utseende<br />
● Emellanåt kan en oanvänd <strong>Centriprep®</strong>-enhet ha några droppar vatten i filteruppsamlaren eller<br />
provbehållaren. Detta beror på kondensation av fukt i membranet och påverkar inte prestandan.<br />
● Efter centrifugering kan en liten mängd filtrat (ungefär 0,5 ml) vara kvar i området mellan membranet<br />
och membranstödet i <strong>Centriprep®</strong>-enheten. Detta är normalt och påverkar inte enhetens funktion eller<br />
prestanda.<br />
● Ultracel®-membranet som används i <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> kan se lite veckade ut efter<br />
centrifugering.<br />
Återanvändning av <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
<strong>Centriprep®</strong>-enheter är endast avsedda för engångsbruk. Om man försöker rengöra enheten kan<br />
membranytan eller förseglingen skadas, vilket kan äventyra enhetens integritet och därmed påverka dess<br />
prestanda.<br />
Funktionsprincip<br />
Lossa först på behållarens förslutande skruvlock och avlägsna filtratuppsamlaren. Tillsätt provet, för<br />
försiktigt tillbaka filtratuppsamlaren in i provbehållaren (lösningen trängs undan) och skruva fast locket så<br />
att enheten är försluten. Den ihopsatta centrifugfilterenheten centrifugeras vid 1 000–3 000 × g, beroende<br />
på vilket NMWL membranet har.<br />
Genom att sänka ned filtratuppsamlaren i provlösningen blir det en liten skillnad i hydrostatiskt tryck som<br />
utövar en flytkraft uppåt mot membranet som sitter i botten på filtratuppsamlaren. Det vätsketryck som<br />
orsakas av den undanträngda vätskan är för svag för att på egen hand ge ultrafiltrering. Centrifugering<br />
ökar detta tryck och tvingar lågmolekylära ämnen och lösningsmedlet igenom membranet in i<br />
filtratuppsamlaren. Lösta ämnen med en molekylvikt som är större än membranets NMWL stannar kvar<br />
i provbehållaren och deras koncentration ökar ju längre centrifugeringen pågår. Ultrafiltreringen sker i<br />
motsatt riktning jämfört med centrifugalkraftens vektor.<br />
Tryckskillnaden som orsakas av den förhöjda vätskenivån är viktig för att centrifugfilterenheten ska<br />
fungera. Under centrifugeringen sjunker provlösningens menisk, medan filtratets menisk stiger. Samtidigt<br />
förlorar filtratuppsamlaren sin flytförmåga och sjunker ned till botten av provbehållaren, vilket maximerar<br />
filtratuppsamlingen. Så småningom uppnås en jämvikt där meniskerna ligger på samma nivå. Filtreringen<br />
avstannar då eftersom skillnaden i vätsketryck då är noll.<br />
Om ytterligare koncentrering behövs, dekantera filtratet och centrifugera sedan enheten en gång till.<br />
Dekantering återetablerar tryckskillnaden mellan provets och filtratets menisker så att filtreringen kan<br />
fortgå. Filtreringen fortsätter tills ett nytt jämviktsläge uppnås. Observera att tryckskillnaden hela tiden<br />
förändras under förfarandet då meniskerna stiger och sjunker.<br />
Centrifugfilterenheterna <strong>Centriprep®</strong> är formgivna så att höga flödeshastigheter kan bibehållas genom att<br />
minimera ansamling av lösta ämnen på membranet under förfarandet. Centrifugalkraften gör att kompakta<br />
ämnen sjunker bort från membranet ned till botten på provbehållaren. Eftersom <strong>Centriprep®</strong>-membranet<br />
”flyter” ovanför detta polariseringsskikt används hela membranets yta hela tiden och filtratflödet är<br />
obegränsat. Detta är särskilt fördelaktigt när man arbetar med suspensioner som lätt kan täppa till eller<br />
blockera membran.<br />
4 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>
Hur <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> ska användas<br />
Ta isär enheten och<br />
tillsätt prov upp till<br />
fyllnadslinjen.<br />
Sätt ihop igen och<br />
placera i<br />
centrifugen.<br />
Centrifugera<br />
för att<br />
koncentrera<br />
Centrifugera tills<br />
vätskenivåerna är lika.<br />
1. Vrid det förslutande skruvlocket på provbehållaren moturs och ta ut filtratuppsamlaren med dess lock<br />
och sätt den åt sidan.<br />
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRD: Var försiktig med membranet på botten av filtratuppsamlaren så att det<br />
inte vidrörs, skrapas eller skadas när enheten tas isär, fylls på och sätts ihop.<br />
2. Aillsätt vätska i provbehållaren. Strecket på sidan av behållaren markerar den maximala<br />
fyllnadsvolymen på 15 ml. Överskrid inte denna volym.<br />
OBS! För vätskor som innehåller fina partiklar, såsom cellsuspensioner, kommer en startvolym på över<br />
5 ml att leda till en minskad flödeshastighet. För bästa resultat med prover som innehåller över<br />
10 % fasta ämnen, begränsa den initiala provvolymen till 5 ml eller mindre.<br />
3. Placera det förslutande skruvlocket så att det vilar mot filtratuppsamlarens skuldra. Skjut ned locket<br />
vid behov tills det stannar vid skuldran.<br />
4. För försiktigt ned filtratuppsamlaren med dess lock på in i provbehållaren och tryck försiktigt nedåt<br />
så att filtratuppsamlaren tränger undan lösningen. Vrid det förslutande skruvlocket medurs för att<br />
försluta provbehållaren. Säkerställ slutligen att det lufttäta locket sitter tätt mot det förslutande<br />
skruvlocket.<br />
5. Sätt in den ihopsatta <strong>Centriprep®</strong>-enheten i centrifugen och sätt ned en liknande enhet som motvikt.<br />
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRD: Inspektera ”swinging-bucket”-rotorer och säkerställ att det inte finns<br />
något hinder för centrifugering innan de används. Hinder kan leda till<br />
att <strong>Centriprep®</strong>-enheten skadas och att provet eventuellt går förlorat.<br />
<strong>Centriprep®</strong>-enheten kan användas i adaptrar utan gummistoppning om det<br />
ger bättre säkerhet.<br />
6. Centrifugera <strong>Centriprep®</strong>-enheten med lämplig g-kraft tills vätskenivåerna innanför och utanför<br />
filtratuppsamlaren är lika. För tillämpningar gällande koncentrering, se riktlinjerna för att uppnå olika<br />
koncentrationsvolymer som anges i det följande avsnittet ”Typisk tidsåtgång för koncentrering av<br />
spädda proteinlösningar”.<br />
7. Om ytterligare koncentrering behövs efter att jämvikt uppnåtts, avlägsna enheten från centrifugen<br />
och ta av det lufttäta locket. Vänd avluftningsskåran uppåt och dekantera filtratet. Sätt tillbaka locket<br />
och centrifugera enheten en andra gång. För tillämpningar gällande filtrering, spara filtratet.<br />
8. Efter en andra centrifugering, dekantera det återstående filtratet. Om ytterligare koncentrering<br />
önskas, centrifugera enheten igen. Fortsätt annars med steg 9.<br />
9. Lossa på det förslutande skruvlocket (vrid moturs) och avlägsna filtratuppsamlaren. Ta ut provet med<br />
hjälp av en pipett eller häll koncentratet i en lämplig behållare.<br />
<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
Vänd avluftningsskåran uppåt<br />
och dekantera filtratet.<br />
Centrifugera igen.<br />
Centrifugera<br />
för att<br />
koncentrera<br />
Ta isär enheten och<br />
samla upp<br />
koncentratet.<br />
5
Typisk tidsåtgång för koncentrering av spädda proteinlösningar<br />
Startvolym i enheten<br />
<strong>Centriprep®</strong> 3K Första<br />
centrifugeringen<br />
Centrifugeringstid och koncentratets volym (ml)<br />
Andra<br />
centrifugeringen<br />
Tredje<br />
centrifugeringen<br />
min ml min ml min ml<br />
5 ml 50 1,2 10 0,8 10 0,5<br />
10 ml 65 2,0 10 1,0 10 0,5<br />
15 ml 95 3,1 35 1,2 10 0,6<br />
<strong>Centriprep®</strong> 10K Första<br />
centrifugeringen<br />
Andra<br />
centrifugeringen<br />
Tredje<br />
centrifugeringen<br />
min ml min ml min ml<br />
5 ml 15 1,3 10 0,6 ET<br />
10 ml 30 2,1 10 1,0 5 0,5<br />
15 ml 40 3,2 10 1,2 5 0,5<br />
<strong>Centriprep®</strong> 30K Första<br />
centrifugeringen<br />
Andra<br />
centrifugeringen<br />
Tredje<br />
centrifugeringen<br />
min ml min ml min ml<br />
5 ml 5 1,3 5 0,8 5 0,5<br />
10 ml 10 2,4 5 1,2 5 0,4<br />
15 ml 15 3,2 10 1,1 5 0,5<br />
<strong>Centriprep®</strong> 50K Första<br />
centrifugeringen<br />
Andra<br />
centrifugeringen<br />
Tredje<br />
centrifugeringen<br />
min ml min ml min ml<br />
5 ml 5 1,4 5 1,0 5 0,6<br />
10 ml 10 2,2 5 1,1 5 0,6<br />
15 ml 10 3,4 5 1,3 5 0,6<br />
Centrifugeringsförhållanden och proteiner som användes i studierna av<br />
koncentreringstid<br />
Enheternas<br />
NMWL 3K 10K 30K 50K<br />
Protein Cytokrom c,<br />
0,25 mg/ml<br />
Bovint serumalbumin,<br />
1 mg/ml<br />
Bovint serumalbumin,<br />
1 mg/ml<br />
Bovint serumalbumin,<br />
1 mg/ml<br />
G-kraft 3 000 × g 3 000 × g 1 500 × g 1 500 × g<br />
”Swinging-bucket”-rotor, 25 °C<br />
ET = Ej tillämpligt, tredje centrifugering onödig<br />
6 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>
Prestanda<br />
Flödeshastigheterna och utbytet vid användning av <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> har testats med<br />
flera välkända lösta ämnen. Dessa resultat, som sammanfattas i följande avsnitt, kan användas för att göra<br />
en uppskattning av prestandan med andra lösta ämnen.<br />
Den relativa centrifugalkraften (RCF) mäts vid botten av filtratuppsamlaren och beräknas enligt följande:<br />
RCF = 1,118 × 10 -5 × radie × (RPM) 2<br />
Radie = avstånd i centimeter mätt från rotationscentrum till filtratuppsamlarens botten.<br />
RPM = (revolutions per minute) varv per minut.<br />
OBS! RCF och RPM är inte samma sak (d.v.s. 3 000 × g är INTE samma som 3 000 RPM.) Kontrollera<br />
centrifugens bruksanvisning för instruktioner om omvandling av g-kraft till RPM eller använd<br />
formeln ovan.<br />
Flödeshastighet<br />
Filtreringshastigheten påverkas av flera driftsparametrar, inklusive provkoncentration, startvolym, relativ<br />
centrifugalkraft, rotortyp, membranets NMWL och temperatur. Vid koncentrering av spädda lösningar ger<br />
”swinging-bucket”-rotor och rotor med fast vinkel jämförbara flödeshastigheter.<br />
För lösningar som innehåller över 10 % fasta ämnen ger en startvolym på över 5 ml oftast reducerade<br />
flödeshastigheter. En volym på 5 ml eller mindre ger de snabbaste flödeshastigheterna eftersom detta<br />
begränsar mängden fasta ämnen som kan blockera membranet.<br />
Centrifugeringstiderna måste förlängas vid arbete i låga temperaturer. Vid 4 °C är flödeshastigheterna<br />
ungefär 1,5 gånger långsammare än vid 25 °C. Viskösa lösningar kan också kräva längre centrifugeringstid.<br />
Till exempel en 1 mg/ml BSA-lösning i 50 % glycerin skulle ta fem gånger längre tid att koncentrera än<br />
samma protein i en vattenbaserad buffertlösning om man skulle använda enheten <strong>Centriprep®</strong> 10K.<br />
Retention och utbyte<br />
De anisotropa, hydrofila membranen i <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> särskiljs med hjälp av<br />
gränsvärdet för nominell molekylvikt (NMWL), d.v.s. deras förmåga att avskilja molekyler av en specifik<br />
molekylvikt.<br />
Eftersom detta är en enkel parameter att arbeta med används molekylvikt för att klassificera membranpermeabilitet<br />
och -selektivitet baserat på resultat med välkarakteriserade proteiner.<br />
Men molekylvikt är inte nödvändigtvis den avgörande egenskapen för alla lösta ämnen. Till exempel kan<br />
retentionsförmågan vara större för en globulär molekyl än för en linjär molekyl som har samma nominella<br />
molekylvikt. Effekter av pH och jonstyrka på en molekyls dimensioner och uppträdande i en viss lösning<br />
måste också vägas in när man bedömer retentionsförmågan för ett löst ämne.<br />
Om det lösta ämnet visar sig ha ett lågt utbyte i koncentratet kan det tyda på förlust p.g.a. adsorption<br />
och/eller att det lösta ämnet har passerat genom membranet. Förlust p.g.a. adsorption beror på det lösta<br />
ämnets koncentration, det lösta ämnets egenskaper (hydrofobt eller hydrofilt), temperatur, den tid det har<br />
varit i kontakt med komponenternas ytor, provets sammansättning och pH.<br />
<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
7
Typiskt utbyte i koncentratet<br />
Löst ämne<br />
& ursprunglig koncentration<br />
Nominell<br />
molekylvikt<br />
<strong>Centriprep®</strong> % utbyte i koncentratet<br />
3K 10K 30K 50K<br />
IgG Fr. II (1 mg/ml) 156 000 – – – 99<br />
Bovint serumalbumin (1 mg/ml) 67 000 – 97 98 93<br />
Ovalbumin (1 mg/ml) 45 000 – 95 90 –<br />
α-kymotrypsinogen (1 mg/ml) 25 000 94 93 – –<br />
Cytokrom c (0,25 mg/ml) 12 400 96 96 8 4<br />
Vitamin B12 (0,2 mg/ml) 1 355 12 – 5 –<br />
Startvolym på 15 ml, 25 °C, ”swinging-bucket”-rotor<br />
Resultaten är baserade på de rekommenderade centrifugeringstiderna som anges i avsnittet ”Typisk<br />
tidsåtgång för koncentrering av spädda proteinlösningar”<br />
Typiskt proteinutbyte, enheten <strong>Centriprep®</strong> 30K<br />
Koncentration % utbyte i koncentratet ± 1 SD<br />
100 µg/ml 98,2 ± 1,7<br />
1 000 µg/ml 96,6 ± 0,2<br />
Startvolym på 15 ml, 25 °C, ”swinging-bucket”-rotor, 1 500 × g<br />
Bovint serumalbumin, två centrifugeringar på 25 minuter<br />
Avsaltning<br />
För avsaltning e ller byte av lösningsmedel, koncentrera provet tills jämviktsläge har uppnåtts. Filtratet<br />
kasseras och sedan späs provet ut till sin ursprungliga volym genom att tillsätta lämpligt lösningsmedel och<br />
blanda det på en provrörsskak av vortex-typ. Provet koncentreras sedan och späds ut en gång till. Processen<br />
upprepas tills koncentrationen av kontaminerande lågmolekylära ämnen har reducerats tillräckligt.<br />
Följande teoretiska exempel illustrerar en process för avsaltning av prov:<br />
Processteg Provvolym Proteinkoncentration NaCl-koncentration<br />
Initialprov 15 ml 1 mg/ml 500 mM<br />
Centrifugera för att koncentrera 3 ml 5 mg/ml 500 mM<br />
Späd upp till 15 ml<br />
med 10 mM NaCl<br />
Centrifugera för att<br />
koncentrera/avsalta 1<br />
Späd upp till 15 ml<br />
med 10 mM NaCl<br />
Centrifugera för att<br />
koncentrera/avsalta 2<br />
Späd upp till 15 ml<br />
med 10 mM NaCl<br />
Centrifugera för att k<br />
oncentrera/avsalta 3<br />
15 ml 1 mg/ml 108 mM<br />
3 ml 5 mg/ml 108 mM<br />
15 ml 1 mg/ml 29,6 mM<br />
3 ml 5 mg/ml 29,6 mM<br />
15 ml 1 mg/ml 13,9 mM<br />
3 ml 5 mg/ml 13,9 mM<br />
8 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>
Prestandavärden<br />
Typisk filtreringsprofil för <strong>Centriprep®</strong>-enheter vid användning av vanliga,<br />
spädda proteinlösningar<br />
Enheten<br />
<strong>Centriprep®</strong> 3K<br />
Driftsparametrar:<br />
● g-kraft: 3 000 × g<br />
● temperatur: 25 °C<br />
● ”swinging-bucket”rotor<br />
● löst ämne: 0,25 mg/ml<br />
cytokrom c<br />
Startvolymer på<br />
5, 10 och 15 ml<br />
Filtratet dekanterades vid<br />
de angivna tidpunkterna<br />
Enheten<br />
<strong>Centriprep®</strong> 10K<br />
Driftsparametrar:<br />
● g-kraft: 3 000 × g<br />
● temperatur: 25 °C<br />
● ”swinging-bucket”rotor<br />
● löst ämne: 1 mg/ml<br />
bovint serumalbumin<br />
Startvolymer på<br />
5, 10 och 15 ml<br />
Filtratet dekanterades vid<br />
de angivna tidpunkterna<br />
Koncentratets volym (ml)<br />
Koncentratets volym (ml)<br />
<br />
<br />
<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
Centrifugeringstid (min)<br />
<br />
<br />
Centrifugeringstid (min)<br />
9
Prestandavärden, fortsättning<br />
Enheten<br />
<strong>Centriprep®</strong> 30K<br />
Driftsparametrar:<br />
● g-kraft: 1 500 × g<br />
● temperatur: 25 °C<br />
● ”swinging-bucket”rotor<br />
● löst ämne: 1 mg/ml<br />
bovint serumalbumin<br />
Startvolymer på<br />
5, 10 och 15 ml<br />
Filtratet dekanterades vid<br />
de angivna tidpunkterna<br />
Enheten<br />
<strong>Centriprep®</strong> 50K<br />
Driftsparametrar:<br />
● g-kraft: 1 500 × g<br />
● temperatur: 25 °C<br />
● ”swinging-bucket”rotor<br />
● löst ämne: 1 mg/ml<br />
bovint serumalbumin<br />
Startvolymer på<br />
5, 10 och 15 ml<br />
Filtratet dekanterades vid<br />
de angivna tidpunkterna<br />
Koncentratets volym (ml)<br />
Koncentratets volym (ml)<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
Centrifugeringstid (min)<br />
<br />
Centrifugeringstid (min)<br />
10 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>
Hur utbytet kvantifieras<br />
Beräkna totalt utbyte, procent utbyte i koncentratet och procent utbyte i filtratet genom att använda<br />
metoden nedan. Denna metod ger än god uppskattning av utbytet i lösningar som har koncentrationer på<br />
upp till ungefär 20 mg/ml.<br />
OBS! Lämpliga analysmetoder är bl.a. absorptionsspektrofotometri, radioimmunanalys, refraktivt index<br />
och konduktivitet.<br />
Vägningsmetod<br />
Densiteten för de flesta spädda proteinlösningar är nära identisk med densiteten för vatten (d.v.s. 1 g/ml).<br />
Genom att använda denna egenskap kan koncentrat- och filtratvolymerna kvantifieras genom vägning och<br />
genom att byta ut gram mot milliliter. Denna metod gäller bara lösningar med koncentrationer på ungefär<br />
20 mg/ml eller mindre.<br />
1. Väg provbehållaren och ett tomt provrör (som rymmer 15 ml) före användning.<br />
2. Fyll provbehållaren med lösning och gör en ny vägning.<br />
3. Sätt ihop centrifugfilterenheten och centrifugera enligt instruktioner. Dekantera filtratet ned i det<br />
förvägda provröret. Om ytterligare koncentrering önskas, centrifugera en andra gång, dekantera<br />
filtratet ned i provröret du använde för det första filtratet. Väg provröret plus filtratet/filtraten igen.<br />
4. Ta isär enheten och väg provbehållaren plus koncentratet igen.<br />
5. Subtrahera det tomma provrörets vikt eller provbehållarens vikt för att beräkna vikten för<br />
ursprungsmaterialet, filtratet och koncentratet.<br />
6. Analysera ursprungsmaterialet, filtratet och koncentratet för att bestämma det lösta ämnets<br />
koncentration.<br />
7. Beräkna utbytena genom att använda uppgifterna om vikt/volym och beräkna koncentrationerna<br />
enligt följande:<br />
% utbyte i koncentratet = 100 ×<br />
Wf × Cf % utbyte i filtratet = 100 ×<br />
Wo × Co % totalt utbyte = % utbyte i koncentratet + % utbyte i filtratet<br />
W c = koncentratets totala vikt före filtreringen<br />
W o = ursprungsmaterialets vikt<br />
W f = filtratets vikt<br />
C c<br />
= koncentratets koncentration<br />
C o = ursprungsmaterialets koncentration<br />
C f = filtratets koncentration<br />
W c × C c<br />
W o × C o<br />
<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
11
Specifikationer<br />
Provbehållarens kapacitet 15 ml<br />
Koncentratets slutvolym vid 25 °C 0,5–0,6 ml<br />
Filtratuppsamlarens kapacitet 12 ml<br />
Maximal relativ centrifugalkraft<br />
Enheten <strong>Centriprep®</strong> 3K 3 000 × g<br />
Enheten <strong>Centriprep®</strong> 10K 3 000 × g<br />
Enheten <strong>Centriprep®</strong> 30K 1 500 × g<br />
Enheten <strong>Centriprep®</strong> 50K 1 500 × g<br />
Aktiv membranyta 2,84 cm 2<br />
Stoppvolym (membran och stöd) 0,5 ml<br />
Dimensioner<br />
Förslutande skruvlockets diameter 36,5 mm (locket sitter utanpå hållaren i centrifugen)<br />
Provbehållarens diameter 28,1 mm<br />
Längd 135 mm<br />
Konstruktionsmaterial<br />
Membran Ultracel® regenererad cellulosa<br />
Provbehållare Polykarbonat<br />
Membranstöd Polykarbonat<br />
Filtratuppsamlare Polykarbonat<br />
Förslutande skruvlock Nylon<br />
Lufttätt lock Polypropen<br />
12 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>
Kemisk kompatibilitet<br />
<strong>Centriprep®</strong>-enheter är avsedda att användas för biologiska vätskor och vattenlösningar. Kontrollera om<br />
provet är kemiskt kompatibelt med enheten före användning. Lösningarna som anges i följande tabell har<br />
utvärderats för kemisk kompatibilitet med <strong>Centriprep®</strong>-enheter.<br />
Syror Koncentration Koncentration<br />
Fosforsyra ≤ 30 % Svavelsyra ≤ 3 %<br />
Mjölksyra ≤ 50 % Trifluorättiksyra (TFA) ≤ 50 %<br />
Myrsyra ≤ 50 % Triklorättiksyra (TCA) ≤ 10 %<br />
Salpetersyra ≤ 10 % Ättiksyra ≤ 80 %<br />
Saltsyra ≤ 1,0 N<br />
Alkalier<br />
Ammoniumhydroxid ≤ 5 % Natriumhydroxid ≤ 0,1 N<br />
Alkoholer<br />
Etanol ≤ 70 % Metanol ≤ 60 %<br />
Isopropanol ≤ 70 % N-butanol ≤ 90 %<br />
Rengöringsmedel<br />
Alconox® rengöringsmedel ≤ 1 % PyroCLEAN rengöringsmedel 1:10<br />
Lubrol® PX rengöringsmedel ≤ 0,1 % Tergazyme® rengöringsmedel ≤ 1 %<br />
Natriumdeoxykolat ≤ 5 % Triton® X-100 surfaktant ≤ 0,002 %<br />
Natriumdodecylsulfat (SDS) ≤ 2 % Tween® 20 surfaktant ≤ 0,1 %<br />
Nonidet P-40 surfaktant ≤ 2 %<br />
Organiska lösningsmedel<br />
Aceton rekommenderas ej Formaldehyd ≤ 5 %<br />
Acetonitril ≤ 30 % Kloroform rekommenderas ej<br />
Bensen rekommenderas ej Koltetraklorid rekommenderas ej<br />
Dimetylformamid ≤ 50 % Pyridin rekommenderas ej<br />
Dimetylsulfoxid (DMSO) ≤ 5 % Tetrahydrofuran rekommenderas ej<br />
Dioxan rekommenderas ej Toluen rekommenderas ej<br />
Etylacetat rekommenderas ej<br />
Övrigt<br />
Ammoniumsulfat Mättad Imidazol ≤ 100 mM<br />
Dietylpyrokarbonat ≤ 0,2 % Merkaptoetanol ≤ 0,1 M<br />
Ditiotreitol (DTT) ≤ 0,1 M Natriumkarbonat ≤ 20 %<br />
Fenol ≤ 1 % Natriumtiocyanat ≤ 3 M<br />
Fosfatbuffert (pH 8,2) ≤ 1 M Polyetylenglykol ≤ 10 %<br />
Glycerin ≤ 70 % Trisbuffert (pH 8,2) ≤ 1 M<br />
Guanidin HCl ≤ 6 M Urea ≤ 8 M<br />
Guanidintiocyanat ≤ 0,5 M<br />
<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
13
Produktmärkning för in vitro-diagnostik<br />
Följande tabell definierar symbolerna som finns på <strong>Centriprep®</strong>-enheternas etiketter.<br />
Symbol Definition Symbol Definition<br />
V<br />
Medicinteknisk produkt för in vitrodiagnostik<br />
N Tillverkningsdatum<br />
h Katalognummer M Tillverkare<br />
D Får ej återanvändas l Temperaturbegränsning<br />
H Används före d Icke-steril produkt<br />
g Satskod C CE-konformitetsmärkning<br />
Information för produktbeställning<br />
I detta avsnitt anges katalognumren för ultrafiltreringsenheterna <strong>Centriprep®</strong>. Se avsnittet om teknisk<br />
hjälp för kontaktinformation. Du kan köpa dessa produkter online på www.millipore.com/products.<br />
Beskrivning 24/förp. 96/förp.<br />
Avsedda för in vitro-diagnostik<br />
Enheten <strong>Centriprep®</strong> 10K (10 000 NMWL) 4304 4305<br />
Enheten <strong>Centriprep®</strong> 30K (30 000 NMWL) 4306 4307<br />
Endast för forskningsbruk<br />
Enheten <strong>Centriprep®</strong> 3K (3 000 NMWL) 4302 4303<br />
Enheten <strong>Centriprep®</strong> 50K (50 000 NMWL) 4310 4311<br />
Meddelande<br />
Informationen i detta dokument kan ändras utan föregående meddelande och ska inte tolkas som något<br />
åtagande från Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. (”<strong>Millipore</strong>”) eller något dotterbolag. Varken Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. eller<br />
något av dess dotterbolag är ansvariga för eventuella fel som kan finnas i detta dokument.<br />
Teknisk hjälp<br />
Kontakta närmaste kontor för mer information. Uppdaterad global kontaktinformation finns på vår<br />
webbsida www.millipore.com/offices. Du kan också gå in på vår tekniska servicesida på<br />
www.millipore.com/techservice.<br />
Garanti<br />
Gällande garantier för produkterna som finns i denna publikation finns på www.millipore.com/terms<br />
(i ”Villkor vid köp” som gäller vid köpet).<br />
14 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>
Tillverkad i Irland<br />
Merck <strong>Millipore</strong> Ltd.<br />
Tullagreen,<br />
Carrigtwohill,<br />
Co. Cork, IRL<br />
Logotypen M är ett varumärke som tillhör Merck KGaA, Darmstadt, Tyskland.<br />
<strong>Millipore</strong>, Centriprep och Ultracel är registrerade varumärken som tillhör Merck KGaA.<br />
Alconox och Tergazyme är registrerade varumärken som tillhör Alconox, Inc.<br />
Lubrol är ett registrerat varumärke som tillhör Imperial Chemical Industries PLC.<br />
Nonidet är ett varumärke som tillhör Royal Dutch/Shell Group.<br />
PyroCLEAN är ett varumärke som tillhör ALerCHECK, Inc.<br />
Triton är ett registrerat varumärke som tillhör Union Carbide Corp.<br />
Tween är ett registrerat varumärke som tillhör ICI Americas Inc.<br />
© 2012 EMD <strong>Millipore</strong> Corporation. Alla rättigheter förbehållna.<br />
PR03522TR, Rev. A, Svenska, 03/12<br />
<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />
15<br />
C<br />
I<br />
P<br />
A<br />
G<br />
C<br />
P<br />
N<br />
B<br />
E<br />
F<br />
M<br />
Å<br />
F<br />
H<br />
T<br />
P<br />
P<br />
H<br />
S<br />
K<br />
P<br />
I<br />
M<br />
T<br />
G