17.07.2013 Views

Centriprep® centrifugfilterenheter - Millipore

Centriprep® centrifugfilterenheter - Millipore

Centriprep® centrifugfilterenheter - Millipore

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

Användarhandbok<br />

<strong>Centriprep®</strong><br />

<strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

Enheterna <strong>Centriprep®</strong> 10K och 30K är avsedda<br />

för in vitro-diagnostik<br />

Enheterna <strong>Centriprep®</strong> 3K och 50K är endast avsedda<br />

för forskningsbruk och inte för diagnostiska metoder<br />

Svenska<br />

Introduktion<br />

Centrifugfilterenheterna <strong>Centriprep®</strong> är ultrafiltreringsenheter för engångsbruk och används för<br />

rening, koncentrering, avsaltning och filtrering av biologiska prover med en volym på 2 till 15 ml. Dessa<br />

ultrafiltreringsenheter är bruksfärdiga och avsedda för de flesta centrifuger som rymmer centrifugrör på<br />

50 ml. De är enkla att använda och kan användas för höga flödeshastigheter. <strong>Centriprep®</strong>-enheten består<br />

av en provbehållare med ett förslutande skruvlock, en filtratuppsamlare innehållande ett lågadsorberande<br />

Ultracel®-membran av regenererad cellulosa och ett lufttätt lock för att isolera provet.<br />

<strong>Centriprep®</strong>-enheten är utformad så att filtrering och sedimentering av fina partiklar kan ske samtidigt<br />

utan att täppa igen membranet. Med enheten <strong>Centriprep®</strong> 50K kan 15 ml prov koncentreras till 0,6 ml på<br />

endast 20 minuter och koncentration av mindre volymer går ännu snabbare. Det är tack vare membranets<br />

låga adorptionsförmåga som den ger höga koncentrationer och vanligtvis 90 % utbyte för makromolekylära<br />

lösta ämnen. En inbyggd spärr begränsar koncentratets slutvolym till 0,5–0,6 ml.<br />

Produktfördelar<br />

För biologiska prover erbjuder <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> många fördelar jämfört med<br />

koncentrationsmetoder såsom kemisk fällning, avdunstning, frystorkning och dialys. Förberedelsetiden är<br />

minimal och enheten centrifugeras helt enkelt tills önskad koncentration har uppnåtts. Filtreringsprocessen<br />

är skonsam och man undviker potentiella problem såsom denaturering av provet eller att buffertsalter<br />

koncentreras. Eftersom koncentreringen och avsaltningen sker samtidigt i <strong>Centriprep®</strong>-enheten elimineras<br />

den provförlust som annars inträffar vid materialöverföring. Enheten är perfekt utformad för lösningar med<br />

fina partiklar eftersom filtreringen sker i motsatt riktning jämfört med sedimenteringen och därmed begränsas<br />

tilltäppning av membranet. <strong>Centriprep®</strong>-enheterna är kompletta produkter, vilket ger ökad säkerhet vid arbete<br />

med farliga prover. Eftersom allt materiel är inneslutet i enheten är risken för att användaren utsätts för<br />

biologisk fara minimerad.<br />

<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

1


Avsedd användning<br />

VARNING: Enheterna <strong>Centriprep®</strong> 10K och 30K är avsedda för in vitro-diagnostik. Enheterna<br />

<strong>Centriprep®</strong> 3K och 50K är endast avsedda för forskningsbruk och INTE för diagnostiska<br />

metoder.<br />

Forskningstillämpningar: Centrifugfilterenhet <strong>Centriprep®</strong> 3K kan användas för koncentrering och avsaltning<br />

av oligonukleotider, peptider, tillväxtfaktorer och små proteiner. Tillämpningar för enheterna <strong>Centriprep®</strong><br />

10K, 30K och 50K inkluderar koncentrering och avsaltning av eluat från kolonner och gradientfraktioner<br />

som innehåller proteiner, enzymer och antikroppar, återvinning av biomolekyler från supernatanter från<br />

cellodlingar, lysat, extrakt och andra biologiska prover samt rening av lågmolekylära komponenter (t.ex.<br />

aminosyror och antibiotika) från fysiologiska vätskor, cellodlingsmedia eller jäsningsbuljonger.<br />

Användning inom in vitro-diagnostik: Centrifugfilterenheterna <strong>Centriprep®</strong> 10K och 30K kan användas för<br />

koncentrering av makromolekyler i serum, urin, cerebrospinalvätska och andra kroppsvätskor innan vätskorna<br />

används för analys. Alla andra <strong>Centriprep®</strong>-<strong>centrifugfilterenheter</strong> är endast för forskningsbruk och inte för<br />

diagnostiska metoder.<br />

Gränsvärden för nominell molekylvikt<br />

I produktlinjen <strong>Centriprep®</strong> ingår enheter med följande gränsvärden för nominell molekylvikt (Nominal<br />

Molecular Weight Limits, NMWL):<br />

● Enheten <strong>Centriprep®</strong> 3K – 3 000 NMWL (gult membranstöd)<br />

● Enheten <strong>Centriprep®</strong> 10K – 10 000 NMWL (grönt membranstöd)<br />

● Enheten <strong>Centriprep®</strong> 30K – 30 000 NMWL (genomskinligt membranstöd)<br />

● Enheten <strong>Centriprep®</strong> 50K – 50 000 NMWL (rosa membranstöd)<br />

<strong>Centriprep®</strong>-komponenter<br />

Lufttätt lock<br />

Förslutande skruvlock<br />

Avluftningsskåra<br />

Filtratuppsamlarens skuldra<br />

Filtratuppsamlare<br />

Membranstöd<br />

Provbehållare<br />

Fyllnadslinje<br />

2 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>


Polariseringskontroll<br />

Nödvändig utrustning<br />

<strong>Centriprep®</strong>-enheter kan centrifugeras i en centrifug med variabel hastighet med antingen en ”swingingbucket”-rotor<br />

eller rotor med fast vinkel och hållare som på ett säkert sätt rymmer 50 ml centrifugrör.<br />

Centrifugen måste ha en kapacitet på 500–3 000 × g. För att se en lista på kompatibla centrifuger och<br />

rotorer, gå till www.millipore.com/rotorguide.<br />

Begränsningar<br />

Med rotor med fast vinkel kan polariseringskontrollen försämras vid låg g-kraft (under 2 000 × g).<br />

Filtratflödet kan minska beroende på provets sammansättning och det lösta ämnets koncentration.<br />

Oavsett vilken centrifug som används, överskrid inte följande gränsvärden eftersom alltför stor g-kraft kan<br />

resultera i läckage eller skador på enheten.<br />

Enhet Maximal centrifugalkraft<br />

<strong>Centriprep®</strong> 3K och 10K 3 000 × g<br />

<strong>Centriprep®</strong> 30K och 50K 1 500 × g<br />

Enheternas hållbarhet och förvaring<br />

För bästa resultat förvara <strong>Centriprep®</strong>-enheterna mellan 15 och 30 °C. Prestandan kan försämras om<br />

enheterna förvaras i extrema temperaturer (d.v.s. under 0 °C eller över 40 °C). Hållbarheten är tre år från<br />

tillverkningsdatum. Se utgångsdatum på förpackningens etikett.<br />

Försköljning<br />

Centrifugalkraft<br />

Filtrering<br />

”Swinging-bucket”rotor<br />

Membranen i <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> innehåller spårmängder av glycerin. Om detta interfererar<br />

med analysen fyll enheten med ungefär 15 ml buffert eller avjoniserat vatten och centrifugera tills det<br />

första jämviktsläget har nåtts. Dekantera filtratet och koncentratet. Upprepa vid behov tills det inte längre<br />

finns någon interferens. Våta membran måste förbli våta för att bibehålla sin funktion.<br />

<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

Polariseringsskikt<br />

Filtrering<br />

Rotor med fast<br />

vinkel<br />

3


Membranets och enhetens utseende<br />

● Emellanåt kan en oanvänd <strong>Centriprep®</strong>-enhet ha några droppar vatten i filteruppsamlaren eller<br />

provbehållaren. Detta beror på kondensation av fukt i membranet och påverkar inte prestandan.<br />

● Efter centrifugering kan en liten mängd filtrat (ungefär 0,5 ml) vara kvar i området mellan membranet<br />

och membranstödet i <strong>Centriprep®</strong>-enheten. Detta är normalt och påverkar inte enhetens funktion eller<br />

prestanda.<br />

● Ultracel®-membranet som används i <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> kan se lite veckade ut efter<br />

centrifugering.<br />

Återanvändning av <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

<strong>Centriprep®</strong>-enheter är endast avsedda för engångsbruk. Om man försöker rengöra enheten kan<br />

membranytan eller förseglingen skadas, vilket kan äventyra enhetens integritet och därmed påverka dess<br />

prestanda.<br />

Funktionsprincip<br />

Lossa först på behållarens förslutande skruvlock och avlägsna filtratuppsamlaren. Tillsätt provet, för<br />

försiktigt tillbaka filtratuppsamlaren in i provbehållaren (lösningen trängs undan) och skruva fast locket så<br />

att enheten är försluten. Den ihopsatta centrifugfilterenheten centrifugeras vid 1 000–3 000 × g, beroende<br />

på vilket NMWL membranet har.<br />

Genom att sänka ned filtratuppsamlaren i provlösningen blir det en liten skillnad i hydrostatiskt tryck som<br />

utövar en flytkraft uppåt mot membranet som sitter i botten på filtratuppsamlaren. Det vätsketryck som<br />

orsakas av den undanträngda vätskan är för svag för att på egen hand ge ultrafiltrering. Centrifugering<br />

ökar detta tryck och tvingar lågmolekylära ämnen och lösningsmedlet igenom membranet in i<br />

filtratuppsamlaren. Lösta ämnen med en molekylvikt som är större än membranets NMWL stannar kvar<br />

i provbehållaren och deras koncentration ökar ju längre centrifugeringen pågår. Ultrafiltreringen sker i<br />

motsatt riktning jämfört med centrifugalkraftens vektor.<br />

Tryckskillnaden som orsakas av den förhöjda vätskenivån är viktig för att centrifugfilterenheten ska<br />

fungera. Under centrifugeringen sjunker provlösningens menisk, medan filtratets menisk stiger. Samtidigt<br />

förlorar filtratuppsamlaren sin flytförmåga och sjunker ned till botten av provbehållaren, vilket maximerar<br />

filtratuppsamlingen. Så småningom uppnås en jämvikt där meniskerna ligger på samma nivå. Filtreringen<br />

avstannar då eftersom skillnaden i vätsketryck då är noll.<br />

Om ytterligare koncentrering behövs, dekantera filtratet och centrifugera sedan enheten en gång till.<br />

Dekantering återetablerar tryckskillnaden mellan provets och filtratets menisker så att filtreringen kan<br />

fortgå. Filtreringen fortsätter tills ett nytt jämviktsläge uppnås. Observera att tryckskillnaden hela tiden<br />

förändras under förfarandet då meniskerna stiger och sjunker.<br />

Centrifugfilterenheterna <strong>Centriprep®</strong> är formgivna så att höga flödeshastigheter kan bibehållas genom att<br />

minimera ansamling av lösta ämnen på membranet under förfarandet. Centrifugalkraften gör att kompakta<br />

ämnen sjunker bort från membranet ned till botten på provbehållaren. Eftersom <strong>Centriprep®</strong>-membranet<br />

”flyter” ovanför detta polariseringsskikt används hela membranets yta hela tiden och filtratflödet är<br />

obegränsat. Detta är särskilt fördelaktigt när man arbetar med suspensioner som lätt kan täppa till eller<br />

blockera membran.<br />

4 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>


Hur <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> ska användas<br />

Ta isär enheten och<br />

tillsätt prov upp till<br />

fyllnadslinjen.<br />

Sätt ihop igen och<br />

placera i<br />

centrifugen.<br />

Centrifugera<br />

för att<br />

koncentrera<br />

Centrifugera tills<br />

vätskenivåerna är lika.<br />

1. Vrid det förslutande skruvlocket på provbehållaren moturs och ta ut filtratuppsamlaren med dess lock<br />

och sätt den åt sidan.<br />

FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRD: Var försiktig med membranet på botten av filtratuppsamlaren så att det<br />

inte vidrörs, skrapas eller skadas när enheten tas isär, fylls på och sätts ihop.<br />

2. Aillsätt vätska i provbehållaren. Strecket på sidan av behållaren markerar den maximala<br />

fyllnadsvolymen på 15 ml. Överskrid inte denna volym.<br />

OBS! För vätskor som innehåller fina partiklar, såsom cellsuspensioner, kommer en startvolym på över<br />

5 ml att leda till en minskad flödeshastighet. För bästa resultat med prover som innehåller över<br />

10 % fasta ämnen, begränsa den initiala provvolymen till 5 ml eller mindre.<br />

3. Placera det förslutande skruvlocket så att det vilar mot filtratuppsamlarens skuldra. Skjut ned locket<br />

vid behov tills det stannar vid skuldran.<br />

4. För försiktigt ned filtratuppsamlaren med dess lock på in i provbehållaren och tryck försiktigt nedåt<br />

så att filtratuppsamlaren tränger undan lösningen. Vrid det förslutande skruvlocket medurs för att<br />

försluta provbehållaren. Säkerställ slutligen att det lufttäta locket sitter tätt mot det förslutande<br />

skruvlocket.<br />

5. Sätt in den ihopsatta <strong>Centriprep®</strong>-enheten i centrifugen och sätt ned en liknande enhet som motvikt.<br />

FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRD: Inspektera ”swinging-bucket”-rotorer och säkerställ att det inte finns<br />

något hinder för centrifugering innan de används. Hinder kan leda till<br />

att <strong>Centriprep®</strong>-enheten skadas och att provet eventuellt går förlorat.<br />

<strong>Centriprep®</strong>-enheten kan användas i adaptrar utan gummistoppning om det<br />

ger bättre säkerhet.<br />

6. Centrifugera <strong>Centriprep®</strong>-enheten med lämplig g-kraft tills vätskenivåerna innanför och utanför<br />

filtratuppsamlaren är lika. För tillämpningar gällande koncentrering, se riktlinjerna för att uppnå olika<br />

koncentrationsvolymer som anges i det följande avsnittet ”Typisk tidsåtgång för koncentrering av<br />

spädda proteinlösningar”.<br />

7. Om ytterligare koncentrering behövs efter att jämvikt uppnåtts, avlägsna enheten från centrifugen<br />

och ta av det lufttäta locket. Vänd avluftningsskåran uppåt och dekantera filtratet. Sätt tillbaka locket<br />

och centrifugera enheten en andra gång. För tillämpningar gällande filtrering, spara filtratet.<br />

8. Efter en andra centrifugering, dekantera det återstående filtratet. Om ytterligare koncentrering<br />

önskas, centrifugera enheten igen. Fortsätt annars med steg 9.<br />

9. Lossa på det förslutande skruvlocket (vrid moturs) och avlägsna filtratuppsamlaren. Ta ut provet med<br />

hjälp av en pipett eller häll koncentratet i en lämplig behållare.<br />

<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

Vänd avluftningsskåran uppåt<br />

och dekantera filtratet.<br />

Centrifugera igen.<br />

Centrifugera<br />

för att<br />

koncentrera<br />

Ta isär enheten och<br />

samla upp<br />

koncentratet.<br />

5


Typisk tidsåtgång för koncentrering av spädda proteinlösningar<br />

Startvolym i enheten<br />

<strong>Centriprep®</strong> 3K Första<br />

centrifugeringen<br />

Centrifugeringstid och koncentratets volym (ml)<br />

Andra<br />

centrifugeringen<br />

Tredje<br />

centrifugeringen<br />

min ml min ml min ml<br />

5 ml 50 1,2 10 0,8 10 0,5<br />

10 ml 65 2,0 10 1,0 10 0,5<br />

15 ml 95 3,1 35 1,2 10 0,6<br />

<strong>Centriprep®</strong> 10K Första<br />

centrifugeringen<br />

Andra<br />

centrifugeringen<br />

Tredje<br />

centrifugeringen<br />

min ml min ml min ml<br />

5 ml 15 1,3 10 0,6 ET<br />

10 ml 30 2,1 10 1,0 5 0,5<br />

15 ml 40 3,2 10 1,2 5 0,5<br />

<strong>Centriprep®</strong> 30K Första<br />

centrifugeringen<br />

Andra<br />

centrifugeringen<br />

Tredje<br />

centrifugeringen<br />

min ml min ml min ml<br />

5 ml 5 1,3 5 0,8 5 0,5<br />

10 ml 10 2,4 5 1,2 5 0,4<br />

15 ml 15 3,2 10 1,1 5 0,5<br />

<strong>Centriprep®</strong> 50K Första<br />

centrifugeringen<br />

Andra<br />

centrifugeringen<br />

Tredje<br />

centrifugeringen<br />

min ml min ml min ml<br />

5 ml 5 1,4 5 1,0 5 0,6<br />

10 ml 10 2,2 5 1,1 5 0,6<br />

15 ml 10 3,4 5 1,3 5 0,6<br />

Centrifugeringsförhållanden och proteiner som användes i studierna av<br />

koncentreringstid<br />

Enheternas<br />

NMWL 3K 10K 30K 50K<br />

Protein Cytokrom c,<br />

0,25 mg/ml<br />

Bovint serumalbumin,<br />

1 mg/ml<br />

Bovint serumalbumin,<br />

1 mg/ml<br />

Bovint serumalbumin,<br />

1 mg/ml<br />

G-kraft 3 000 × g 3 000 × g 1 500 × g 1 500 × g<br />

”Swinging-bucket”-rotor, 25 °C<br />

ET = Ej tillämpligt, tredje centrifugering onödig<br />

6 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>


Prestanda<br />

Flödeshastigheterna och utbytet vid användning av <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> har testats med<br />

flera välkända lösta ämnen. Dessa resultat, som sammanfattas i följande avsnitt, kan användas för att göra<br />

en uppskattning av prestandan med andra lösta ämnen.<br />

Den relativa centrifugalkraften (RCF) mäts vid botten av filtratuppsamlaren och beräknas enligt följande:<br />

RCF = 1,118 × 10 -5 × radie × (RPM) 2<br />

Radie = avstånd i centimeter mätt från rotationscentrum till filtratuppsamlarens botten.<br />

RPM = (revolutions per minute) varv per minut.<br />

OBS! RCF och RPM är inte samma sak (d.v.s. 3 000 × g är INTE samma som 3 000 RPM.) Kontrollera<br />

centrifugens bruksanvisning för instruktioner om omvandling av g-kraft till RPM eller använd<br />

formeln ovan.<br />

Flödeshastighet<br />

Filtreringshastigheten påverkas av flera driftsparametrar, inklusive provkoncentration, startvolym, relativ<br />

centrifugalkraft, rotortyp, membranets NMWL och temperatur. Vid koncentrering av spädda lösningar ger<br />

”swinging-bucket”-rotor och rotor med fast vinkel jämförbara flödeshastigheter.<br />

För lösningar som innehåller över 10 % fasta ämnen ger en startvolym på över 5 ml oftast reducerade<br />

flödeshastigheter. En volym på 5 ml eller mindre ger de snabbaste flödeshastigheterna eftersom detta<br />

begränsar mängden fasta ämnen som kan blockera membranet.<br />

Centrifugeringstiderna måste förlängas vid arbete i låga temperaturer. Vid 4 °C är flödeshastigheterna<br />

ungefär 1,5 gånger långsammare än vid 25 °C. Viskösa lösningar kan också kräva längre centrifugeringstid.<br />

Till exempel en 1 mg/ml BSA-lösning i 50 % glycerin skulle ta fem gånger längre tid att koncentrera än<br />

samma protein i en vattenbaserad buffertlösning om man skulle använda enheten <strong>Centriprep®</strong> 10K.<br />

Retention och utbyte<br />

De anisotropa, hydrofila membranen i <strong>centrifugfilterenheter</strong>na <strong>Centriprep®</strong> särskiljs med hjälp av<br />

gränsvärdet för nominell molekylvikt (NMWL), d.v.s. deras förmåga att avskilja molekyler av en specifik<br />

molekylvikt.<br />

Eftersom detta är en enkel parameter att arbeta med används molekylvikt för att klassificera membranpermeabilitet<br />

och -selektivitet baserat på resultat med välkarakteriserade proteiner.<br />

Men molekylvikt är inte nödvändigtvis den avgörande egenskapen för alla lösta ämnen. Till exempel kan<br />

retentionsförmågan vara större för en globulär molekyl än för en linjär molekyl som har samma nominella<br />

molekylvikt. Effekter av pH och jonstyrka på en molekyls dimensioner och uppträdande i en viss lösning<br />

måste också vägas in när man bedömer retentionsförmågan för ett löst ämne.<br />

Om det lösta ämnet visar sig ha ett lågt utbyte i koncentratet kan det tyda på förlust p.g.a. adsorption<br />

och/eller att det lösta ämnet har passerat genom membranet. Förlust p.g.a. adsorption beror på det lösta<br />

ämnets koncentration, det lösta ämnets egenskaper (hydrofobt eller hydrofilt), temperatur, den tid det har<br />

varit i kontakt med komponenternas ytor, provets sammansättning och pH.<br />

<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

7


Typiskt utbyte i koncentratet<br />

Löst ämne<br />

& ursprunglig koncentration<br />

Nominell<br />

molekylvikt<br />

<strong>Centriprep®</strong> % utbyte i koncentratet<br />

3K 10K 30K 50K<br />

IgG Fr. II (1 mg/ml) 156 000 – – – 99<br />

Bovint serumalbumin (1 mg/ml) 67 000 – 97 98 93<br />

Ovalbumin (1 mg/ml) 45 000 – 95 90 –<br />

α-kymotrypsinogen (1 mg/ml) 25 000 94 93 – –<br />

Cytokrom c (0,25 mg/ml) 12 400 96 96 8 4<br />

Vitamin B12 (0,2 mg/ml) 1 355 12 – 5 –<br />

Startvolym på 15 ml, 25 °C, ”swinging-bucket”-rotor<br />

Resultaten är baserade på de rekommenderade centrifugeringstiderna som anges i avsnittet ”Typisk<br />

tidsåtgång för koncentrering av spädda proteinlösningar”<br />

Typiskt proteinutbyte, enheten <strong>Centriprep®</strong> 30K<br />

Koncentration % utbyte i koncentratet ± 1 SD<br />

100 µg/ml 98,2 ± 1,7<br />

1 000 µg/ml 96,6 ± 0,2<br />

Startvolym på 15 ml, 25 °C, ”swinging-bucket”-rotor, 1 500 × g<br />

Bovint serumalbumin, två centrifugeringar på 25 minuter<br />

Avsaltning<br />

För avsaltning e ller byte av lösningsmedel, koncentrera provet tills jämviktsläge har uppnåtts. Filtratet<br />

kasseras och sedan späs provet ut till sin ursprungliga volym genom att tillsätta lämpligt lösningsmedel och<br />

blanda det på en provrörsskak av vortex-typ. Provet koncentreras sedan och späds ut en gång till. Processen<br />

upprepas tills koncentrationen av kontaminerande lågmolekylära ämnen har reducerats tillräckligt.<br />

Följande teoretiska exempel illustrerar en process för avsaltning av prov:<br />

Processteg Provvolym Proteinkoncentration NaCl-koncentration<br />

Initialprov 15 ml 1 mg/ml 500 mM<br />

Centrifugera för att koncentrera 3 ml 5 mg/ml 500 mM<br />

Späd upp till 15 ml<br />

med 10 mM NaCl<br />

Centrifugera för att<br />

koncentrera/avsalta 1<br />

Späd upp till 15 ml<br />

med 10 mM NaCl<br />

Centrifugera för att<br />

koncentrera/avsalta 2<br />

Späd upp till 15 ml<br />

med 10 mM NaCl<br />

Centrifugera för att k<br />

oncentrera/avsalta 3<br />

15 ml 1 mg/ml 108 mM<br />

3 ml 5 mg/ml 108 mM<br />

15 ml 1 mg/ml 29,6 mM<br />

3 ml 5 mg/ml 29,6 mM<br />

15 ml 1 mg/ml 13,9 mM<br />

3 ml 5 mg/ml 13,9 mM<br />

8 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>


Prestandavärden<br />

Typisk filtreringsprofil för <strong>Centriprep®</strong>-enheter vid användning av vanliga,<br />

spädda proteinlösningar<br />

Enheten<br />

<strong>Centriprep®</strong> 3K<br />

Driftsparametrar:<br />

● g-kraft: 3 000 × g<br />

● temperatur: 25 °C<br />

● ”swinging-bucket”rotor<br />

● löst ämne: 0,25 mg/ml<br />

cytokrom c<br />

Startvolymer på<br />

5, 10 och 15 ml<br />

Filtratet dekanterades vid<br />

de angivna tidpunkterna<br />

Enheten<br />

<strong>Centriprep®</strong> 10K<br />

Driftsparametrar:<br />

● g-kraft: 3 000 × g<br />

● temperatur: 25 °C<br />

● ”swinging-bucket”rotor<br />

● löst ämne: 1 mg/ml<br />

bovint serumalbumin<br />

Startvolymer på<br />

5, 10 och 15 ml<br />

Filtratet dekanterades vid<br />

de angivna tidpunkterna<br />

Koncentratets volym (ml)<br />

Koncentratets volym (ml)<br />

<br />

<br />

<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

<br />

<br />

<br />

<br />

<br />

<br />

Centrifugeringstid (min)<br />

<br />

<br />

Centrifugeringstid (min)<br />

9


Prestandavärden, fortsättning<br />

Enheten<br />

<strong>Centriprep®</strong> 30K<br />

Driftsparametrar:<br />

● g-kraft: 1 500 × g<br />

● temperatur: 25 °C<br />

● ”swinging-bucket”rotor<br />

● löst ämne: 1 mg/ml<br />

bovint serumalbumin<br />

Startvolymer på<br />

5, 10 och 15 ml<br />

Filtratet dekanterades vid<br />

de angivna tidpunkterna<br />

Enheten<br />

<strong>Centriprep®</strong> 50K<br />

Driftsparametrar:<br />

● g-kraft: 1 500 × g<br />

● temperatur: 25 °C<br />

● ”swinging-bucket”rotor<br />

● löst ämne: 1 mg/ml<br />

bovint serumalbumin<br />

Startvolymer på<br />

5, 10 och 15 ml<br />

Filtratet dekanterades vid<br />

de angivna tidpunkterna<br />

Koncentratets volym (ml)<br />

Koncentratets volym (ml)<br />

<br />

<br />

<br />

<br />

<br />

<br />

<br />

<br />

<br />

Centrifugeringstid (min)<br />

<br />

Centrifugeringstid (min)<br />

10 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>


Hur utbytet kvantifieras<br />

Beräkna totalt utbyte, procent utbyte i koncentratet och procent utbyte i filtratet genom att använda<br />

metoden nedan. Denna metod ger än god uppskattning av utbytet i lösningar som har koncentrationer på<br />

upp till ungefär 20 mg/ml.<br />

OBS! Lämpliga analysmetoder är bl.a. absorptionsspektrofotometri, radioimmunanalys, refraktivt index<br />

och konduktivitet.<br />

Vägningsmetod<br />

Densiteten för de flesta spädda proteinlösningar är nära identisk med densiteten för vatten (d.v.s. 1 g/ml).<br />

Genom att använda denna egenskap kan koncentrat- och filtratvolymerna kvantifieras genom vägning och<br />

genom att byta ut gram mot milliliter. Denna metod gäller bara lösningar med koncentrationer på ungefär<br />

20 mg/ml eller mindre.<br />

1. Väg provbehållaren och ett tomt provrör (som rymmer 15 ml) före användning.<br />

2. Fyll provbehållaren med lösning och gör en ny vägning.<br />

3. Sätt ihop centrifugfilterenheten och centrifugera enligt instruktioner. Dekantera filtratet ned i det<br />

förvägda provröret. Om ytterligare koncentrering önskas, centrifugera en andra gång, dekantera<br />

filtratet ned i provröret du använde för det första filtratet. Väg provröret plus filtratet/filtraten igen.<br />

4. Ta isär enheten och väg provbehållaren plus koncentratet igen.<br />

5. Subtrahera det tomma provrörets vikt eller provbehållarens vikt för att beräkna vikten för<br />

ursprungsmaterialet, filtratet och koncentratet.<br />

6. Analysera ursprungsmaterialet, filtratet och koncentratet för att bestämma det lösta ämnets<br />

koncentration.<br />

7. Beräkna utbytena genom att använda uppgifterna om vikt/volym och beräkna koncentrationerna<br />

enligt följande:<br />

% utbyte i koncentratet = 100 ×<br />

Wf × Cf % utbyte i filtratet = 100 ×<br />

Wo × Co % totalt utbyte = % utbyte i koncentratet + % utbyte i filtratet<br />

W c = koncentratets totala vikt före filtreringen<br />

W o = ursprungsmaterialets vikt<br />

W f = filtratets vikt<br />

C c<br />

= koncentratets koncentration<br />

C o = ursprungsmaterialets koncentration<br />

C f = filtratets koncentration<br />

W c × C c<br />

W o × C o<br />

<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

11


Specifikationer<br />

Provbehållarens kapacitet 15 ml<br />

Koncentratets slutvolym vid 25 °C 0,5–0,6 ml<br />

Filtratuppsamlarens kapacitet 12 ml<br />

Maximal relativ centrifugalkraft<br />

Enheten <strong>Centriprep®</strong> 3K 3 000 × g<br />

Enheten <strong>Centriprep®</strong> 10K 3 000 × g<br />

Enheten <strong>Centriprep®</strong> 30K 1 500 × g<br />

Enheten <strong>Centriprep®</strong> 50K 1 500 × g<br />

Aktiv membranyta 2,84 cm 2<br />

Stoppvolym (membran och stöd) 0,5 ml<br />

Dimensioner<br />

Förslutande skruvlockets diameter 36,5 mm (locket sitter utanpå hållaren i centrifugen)<br />

Provbehållarens diameter 28,1 mm<br />

Längd 135 mm<br />

Konstruktionsmaterial<br />

Membran Ultracel® regenererad cellulosa<br />

Provbehållare Polykarbonat<br />

Membranstöd Polykarbonat<br />

Filtratuppsamlare Polykarbonat<br />

Förslutande skruvlock Nylon<br />

Lufttätt lock Polypropen<br />

12 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>


Kemisk kompatibilitet<br />

<strong>Centriprep®</strong>-enheter är avsedda att användas för biologiska vätskor och vattenlösningar. Kontrollera om<br />

provet är kemiskt kompatibelt med enheten före användning. Lösningarna som anges i följande tabell har<br />

utvärderats för kemisk kompatibilitet med <strong>Centriprep®</strong>-enheter.<br />

Syror Koncentration Koncentration<br />

Fosforsyra ≤ 30 % Svavelsyra ≤ 3 %<br />

Mjölksyra ≤ 50 % Trifluorättiksyra (TFA) ≤ 50 %<br />

Myrsyra ≤ 50 % Triklorättiksyra (TCA) ≤ 10 %<br />

Salpetersyra ≤ 10 % Ättiksyra ≤ 80 %<br />

Saltsyra ≤ 1,0 N<br />

Alkalier<br />

Ammoniumhydroxid ≤ 5 % Natriumhydroxid ≤ 0,1 N<br />

Alkoholer<br />

Etanol ≤ 70 % Metanol ≤ 60 %<br />

Isopropanol ≤ 70 % N-butanol ≤ 90 %<br />

Rengöringsmedel<br />

Alconox® rengöringsmedel ≤ 1 % PyroCLEAN rengöringsmedel 1:10<br />

Lubrol® PX rengöringsmedel ≤ 0,1 % Tergazyme® rengöringsmedel ≤ 1 %<br />

Natriumdeoxykolat ≤ 5 % Triton® X-100 surfaktant ≤ 0,002 %<br />

Natriumdodecylsulfat (SDS) ≤ 2 % Tween® 20 surfaktant ≤ 0,1 %<br />

Nonidet P-40 surfaktant ≤ 2 %<br />

Organiska lösningsmedel<br />

Aceton rekommenderas ej Formaldehyd ≤ 5 %<br />

Acetonitril ≤ 30 % Kloroform rekommenderas ej<br />

Bensen rekommenderas ej Koltetraklorid rekommenderas ej<br />

Dimetylformamid ≤ 50 % Pyridin rekommenderas ej<br />

Dimetylsulfoxid (DMSO) ≤ 5 % Tetrahydrofuran rekommenderas ej<br />

Dioxan rekommenderas ej Toluen rekommenderas ej<br />

Etylacetat rekommenderas ej<br />

Övrigt<br />

Ammoniumsulfat Mättad Imidazol ≤ 100 mM<br />

Dietylpyrokarbonat ≤ 0,2 % Merkaptoetanol ≤ 0,1 M<br />

Ditiotreitol (DTT) ≤ 0,1 M Natriumkarbonat ≤ 20 %<br />

Fenol ≤ 1 % Natriumtiocyanat ≤ 3 M<br />

Fosfatbuffert (pH 8,2) ≤ 1 M Polyetylenglykol ≤ 10 %<br />

Glycerin ≤ 70 % Trisbuffert (pH 8,2) ≤ 1 M<br />

Guanidin HCl ≤ 6 M Urea ≤ 8 M<br />

Guanidintiocyanat ≤ 0,5 M<br />

<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

13


Produktmärkning för in vitro-diagnostik<br />

Följande tabell definierar symbolerna som finns på <strong>Centriprep®</strong>-enheternas etiketter.<br />

Symbol Definition Symbol Definition<br />

V<br />

Medicinteknisk produkt för in vitrodiagnostik<br />

N Tillverkningsdatum<br />

h Katalognummer M Tillverkare<br />

D Får ej återanvändas l Temperaturbegränsning<br />

H Används före d Icke-steril produkt<br />

g Satskod C CE-konformitetsmärkning<br />

Information för produktbeställning<br />

I detta avsnitt anges katalognumren för ultrafiltreringsenheterna <strong>Centriprep®</strong>. Se avsnittet om teknisk<br />

hjälp för kontaktinformation. Du kan köpa dessa produkter online på www.millipore.com/products.<br />

Beskrivning 24/förp. 96/förp.<br />

Avsedda för in vitro-diagnostik<br />

Enheten <strong>Centriprep®</strong> 10K (10 000 NMWL) 4304 4305<br />

Enheten <strong>Centriprep®</strong> 30K (30 000 NMWL) 4306 4307<br />

Endast för forskningsbruk<br />

Enheten <strong>Centriprep®</strong> 3K (3 000 NMWL) 4302 4303<br />

Enheten <strong>Centriprep®</strong> 50K (50 000 NMWL) 4310 4311<br />

Meddelande<br />

Informationen i detta dokument kan ändras utan föregående meddelande och ska inte tolkas som något<br />

åtagande från Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. (”<strong>Millipore</strong>”) eller något dotterbolag. Varken Merck <strong>Millipore</strong> Ltd. eller<br />

något av dess dotterbolag är ansvariga för eventuella fel som kan finnas i detta dokument.<br />

Teknisk hjälp<br />

Kontakta närmaste kontor för mer information. Uppdaterad global kontaktinformation finns på vår<br />

webbsida www.millipore.com/offices. Du kan också gå in på vår tekniska servicesida på<br />

www.millipore.com/techservice.<br />

Garanti<br />

Gällande garantier för produkterna som finns i denna publikation finns på www.millipore.com/terms<br />

(i ”Villkor vid köp” som gäller vid köpet).<br />

14 <strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong>


Tillverkad i Irland<br />

Merck <strong>Millipore</strong> Ltd.<br />

Tullagreen,<br />

Carrigtwohill,<br />

Co. Cork, IRL<br />

Logotypen M är ett varumärke som tillhör Merck KGaA, Darmstadt, Tyskland.<br />

<strong>Millipore</strong>, Centriprep och Ultracel är registrerade varumärken som tillhör Merck KGaA.<br />

Alconox och Tergazyme är registrerade varumärken som tillhör Alconox, Inc.<br />

Lubrol är ett registrerat varumärke som tillhör Imperial Chemical Industries PLC.<br />

Nonidet är ett varumärke som tillhör Royal Dutch/Shell Group.<br />

PyroCLEAN är ett varumärke som tillhör ALerCHECK, Inc.<br />

Triton är ett registrerat varumärke som tillhör Union Carbide Corp.<br />

Tween är ett registrerat varumärke som tillhör ICI Americas Inc.<br />

© 2012 EMD <strong>Millipore</strong> Corporation. Alla rättigheter förbehållna.<br />

PR03522TR, Rev. A, Svenska, 03/12<br />

<strong>Centriprep®</strong> <strong>centrifugfilterenheter</strong><br />

15<br />

C<br />

I<br />

P<br />

A<br />

G<br />

C<br />

P<br />

N<br />

B<br />

E<br />

F<br />

M<br />

Å<br />

F<br />

H<br />

T<br />

P<br />

P<br />

H<br />

S<br />

K<br />

P<br />

I<br />

M<br />

T<br />

G

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!