VZV - PL - virion\serion
VZV - PL - virion\serion
VZV - PL - virion\serion
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
7.5 Manualna procedura testowa<br />
1. Umieścić żądaną liczbę dołków w ramce i przygotować arkusz protokołu.<br />
2. Dodać po 100 µl rozcieńczonych próbek lub gotowych kontroli do<br />
odpowiednich studzienek na mikrotitracyjnych paskach testowych. Zostawić jedną<br />
wolną studzienkę jako próbę ślepą substratu, np.:<br />
IgA/IgG/IgM oznaczenie ilościowe<br />
studzienka nr<br />
studzienka A1 Próba ślepa<br />
Studzienka B1 Kontrola negatywna<br />
Studzienka C1 Surowica standardowa<br />
studzienka D1 Surowica standardowa<br />
studzienka E1 Pacjent 1 ....<br />
3. Inkubować próbki przez 60 minut (+/- 5 min) w temperaturze 37°C (+/- 1°C) w<br />
komorze wilgotnej<br />
4. Po inkubacji przepłukać wszystkie studzienki roztworem do płukania (metodą<br />
automatyczną lub ręczną):<br />
- zaaspirować lub wytrząsnąć roztwór inkubacyjny<br />
- napełnić każdą studzienkę 300 µl roztworu do płukania<br />
- zaaspirować lub wytrząsnąć bufor do płukania<br />
- powtórzyć procedurę płukania 3 razy (razem 4 razy!)<br />
- osuszyć, ostukując płytkę mikrotitracyjną na papierowym ręczniku<br />
5. Dodawanie koniugatu<br />
Dodać 100 µl koniugatu IgA/IgG/IgM (gotowego do użycia) do odpowiednich<br />
studzienek (za wyjątkiem próby ślepej substratu)<br />
6. Inkubować z koniugatem przez 30 minut (+/- 1 min)* w temperaturze 37°C (+/-<br />
1°C) w komorze wilgotnej.<br />
7. Po inkubacji przepłukać wszystkie studzienki roztworem do płukania (patrz<br />
powyżej)<br />
8. Dodawanie substratu<br />
Dodać 100 µl roztworu substratu (gotowego do użycia) do każdej studzienki<br />
(również do studzienki z próbą ślepą substratu!)<br />
9. Inkubować z substratem przez 30 minut (+/- 1 min)* w temperaturze 37°C (+/-<br />
1°C) w komorze wilgotnej.<br />
10. Zatrzymanie reakcji<br />
Dodać 100 µl roztworu zatrzymującego reakcję do każdej studzienki, następnie w<br />
celu wymieszania delikatnie wstrząsnąć płytką mikrotitracyjną.<br />
11. Odczyt ekstynkcji<br />
Odczytać wartość OD po 60 minutach przy długości fali 405 nm względem próby<br />
ślepej substratu, przy fali odniesienia o długości między 620 nm i 690 nm (np.<br />
650 nm).<br />
_____________________<br />
* Należy zwrócić uwagę, że w określonych warunkach pracy konieczne może być<br />
wewnętrzne dostosowanie czasów inkubacji w laboratorium.<br />
polski 13
Change language