Untitled - CEEMaR

­ 8 ­
Анализ 1,4­бенздиазепинов и их метаболитов проводили в сложных
по своему химическому составу, чрезвычайно разнообразных смесях. В
связи с этим он сводился к ряду последовательных процедур, направленных
на извлечение бенздиазепинов из исследуемого биологического
материала, их очистку и количественное определение. Детально методы
описаны в обзорной статье (Головенко, Зиньковский, 1978) и монографии
(Богатский, Андронрти, Головенко, 1980).
Устанавливали структуру метаболитов, выделенных из биологических
проб цветными реакциями, УФ­, ИК­спектроскопией и вольтамперометрией.
Большинство масс­спектров метаболитов получено на приборе
МХ­1303 при энергии ионизации 50 В, токе эмиссии 1,5 мА и при
температуре на 20­50°С ниже их температуры плавления. Масс­спектры
высокого разрешения получали на приборах Фирмы Таг1ап, модели МАТ­
311 и фирмы Зео1, модели 01­БЬ­2. ЯМР­спектры метаболитов снимали в
растворах дейтероацетона на приборе Тесла­60.
Количественное определение метаболитов осуществляли методами
спектроФотометрии, вольтамперометрии и радиоиндикации (сцинтиляционный
Фотометр КЬ­ЗО, Франция\ В целом для количественной оценки
метаболитов феназепама в моче и кале экспериментальных животных
нами предложена общая схема их определения (Головенко, Зиньковский,
Богатский и др., 1979). Если исследовались метаболиты Феназепама в
органах и тканях животных, нами использовалась другая схема (Головенко,
ЗИНЬКОВСКИЙ, Серединин и др., 1980).
Статистическая обработка большинства экспериментальных данных
проводилась методом средней арифметической и средней квадратической
ошибки по критерию достоверности Стьюдента на ЭЦМ "Искра­122". Для
установления математической зависимости между Физико­химическими
свойствами субстратов и скоростью их окисления использовали регрессионный
анализ (Лакин, 1973). При определении накопленных частот
минимальных эффективных доз применялся математический аппарат
пробит­анализа (Беленький, 1963). Для описания процессов выделения
феназепама и его метаболитов, а также распределения их в органах и
тканях животных, мы применили многочастевые модели (Соловьев, Фирсов,
Филов, 1980). Исследование нелинейных процессов интегральных
кривых Ферментативных реакций проводили с использованием математического
аппарата, предложенного Пиотровским (Пиотровский, 1976).
­ 9 ­
СОДЕРЖАНИЕ
РАБОТЫ
ОКИСЛЕНИЕ ГЕТЕРОЦИКЛЛЧЕСКОГО ШЛА 1,ч­БЕНЗДИАЗЕПИНОВ
Анализ радиохроматограмм хлороформных экстрактов мочи и кала
крыс, которым внутрибрюшинно вводили ^С­Феназепам (1ч мг/кг) показал,
что они содержат не менее четырех пиков радиоактивности.
Масс­спектрометрическое исследование соединения I (Л£ 0,85 в си
стеме растворителей ацетон­хлороФорм­30^ аммиак в соотношении
1:1:0,05) свидетельствовало о его полной идентичности исходному
препарату. Фрагментация этого вещества включала в себя два направ
ления. На первом молекулярный ион последовательно теряет атом хло
ра (щ/е 313), молекулу СО ( щ/е 285) и молекулу НВг (щ/е 205).
Кроме того, ион с щ/е 313 может элиминировать атом брома ( т/е
23ч), а ион с щ/е 285 терять молекулу НОТ ( щ/е 258). Второе
направление включает элиминирование молекулярным ионом атома водо
рода (щ/е 347), молекулу СО ( щ/е 319) и молекулу 0^01 ( щ/е
207). Фрагмент с щ/е 207, как показал масс­спектр высокого разре
шения, имеет элементный состав СдН^ИЕг. Масс­спектр метаболита
II (кг 0,45), наряду с незначительным по интенсивности пиком моле
кулярного иона ( щ/е 364), содержит интенсивные пики фрагментных
ионов [м­Н г
0] + с щ/е Зчб и [м­НС0] + с щ/е 335, что указывает на
наличие оксигруппы у третьего углеродного атома молекулы бенздиазепина.
Метаболит II в значительных количествах обнаружен в хлоро
формных экстрактах водных фаз мочи и кала, обработанных в ­глюкуронидазой.
Следовательно, Феназепам в организме крыс окисляется по ацетальному
углероду с последующим образованием глюкуронида (11­г).
За сутки из организма крыс выводится в 2,5 раза больше метаболита
II ^свободная Форма и глюкуронид), чем I. 3 течение б часов
эксперимента в желчи крыс содержание II и II­г в 8 раз больше,
чем I. В организме мышей линии BAL 3/с окисление гетерокольца Феназепама
проходит значительно интенсивнее, так как за 2ч часа с
мочой и калом окисленный метаболит выводится в количестве, превы­