Untitled - CEEMaR

Работа выполнена в Одесском ордена Трудового Красного
Знамени государственном университете им. И.И.Мечникова.
Официальные оппоненты: доктор биологических наук,
професоор А.И.АРЧАКОВ;
доктор биологических наук,
профессор В.А.ФИЛОВ;
доктор медицинских наук,
профессор Ю.В.ХМЕЛЕВСКИИ.
Ведущая организация - Научно-исследовательский институт
фармакологии АМН СС5СР.
Защита ооотоится " " 1981 года в 1ч.30
на заседании специализированного совета Л 016.07.01 при
Институте биохимии им. А.З.Палладина АН УССР (252030,
Киев-30, ул.Леонтовича, 9).
О диосертацией можно ознакомиться в библиотеке Института
биохимии им. А.В.Палладина АН УССР.
Автореферат разослан " " 1981 года.
УЧЕНИЯ СЕКРЕТАРЬ
СПЕЦИАЛИЗИРОВАННОГО СОВЕТА,
КАНДИДАТ БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК
0.В.КИРСЕН1СО
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Постоянно изменяющиеся условия жизни человека,
его труд неразрывно связаны с посторонними веществами, которые
в силу различных причин поступает в организм. К таким веществам
относятся многие синтетические и природные лекарственные
средства, пестициды, гербициды, отходы промышленных предприятий,
пищевые добавки, косметические составы и др. Они не встречается в
организме человека и животных и поэтому получили название чужеродных,
или ксенобиотиков. Многие из стих веществ в живых организмах ,
претерпевают ферментативные превращения, которые направлены на увеличение
полярности молекулы, уменьшение ее растворимости в липидах
и более быстрое выведение из него. 3 настоящее время исследования
метаболизма ксенобиотиков превратились в самостоятельный раздел
биохимии, получивший название биохимии чужеродных вепеств, или ксенобиохимии,
имеющий свою теоретическую базу, технические приемы и
определенный объем знаний.
К числу малоизученных научных проблем ксенобиохимии относятся
вопросы механизмов реакций метаболизма ксенобиотиков, природы промежуточных
соединений, образующихся при Ферментативном катализе,
избирательного действия на молекулу ксенобиотика Ферментов, катализирующих
окислительно-восстановительные реакции, а также влияние
последних на процессы передвижения и выведения этих веществ из организма.
Исследования в этой области важны, так как они связаны с
целым рядом сопредельных дисциплин. В частности, химики-органики
используют Ферменты, метаболизирующие ксенобиотики, для получения
соединений, синтез которых традиционным способом затруднен. Фармакологи
при изучении "активного начала" лекарств и механизма их действия
учитывают тот *акт, что они в процессе метаболизма изменяют
свою активность. Во многих случаях усиление токсичности кселобиотиков
обусловлено их превращением в организме животных и человека.
В наших исследованиях были использованы в качестве ксенобиотиков
производные 1,ч-бенздиазепина и родственные соединения. Выбор таких
веществ в качестве объекта исследований не был случайным, а диктовался
прежде всего запросами практической медицины. К началу представленной
работы в ряде стран начался широкий поиск транквилизаторов
бенздиазепинового ряда, занимающих особое положение в ряду применяемых
психотропных средств. Благодаря своей высокой эффективности
и многообразию клинического спектра действия они практически
вытеснили другие менее эффективные препараты. При этом расширились

- 2 -
показания к их применению в клинической и амбулаторной практике
для лечения неврозов и неврозоподобных состояний. Кроме того, эти
препараты с успехом используются при лечении некоторых форм шизофрении,
эпилепсии, депрессивных состояний, наркоманических и алкогольных
абстинентных явлений, сосудистых психозов. Наряду с этим
бенздиазепины применяется в комплексной терапии судорожных состояний
различной этиологии, мышечной ригидности, а также терапии, хирургии,
акушерстве и гинекологии.
Цель и задачи работы. Основная цель настоящей работы состояла в
изучении закономерностей и механизмов окислительно-восстановительных,
гидролитических и синтетических реакций обмена различных по
структуре и Физико-химическим свойствам производных 1,4-бенздиазепина
и родственных систем в организме экспериментальных животных.
Выявить взаимосвязь между процессами метаболизма изучаемых веществ
и их кинетикой распределения в организме и выведения из него. Использовать
принципы метаболизма соединений в конструировании противосудорожных
и антиагрессивных средств. Конкретные задачи работы
складывались из следующего:
1. Разработать методы извлечения из биологических жидкостей,
очистки от коэкстрактизных веществ, разделения, идентификации и
количественного определения неизвестных ранее или малоизученных
бенздиазепинов и родственных структур.
2. Разработать методы анализа трансформации и транслокации 1,4-
бенздмазепинов в кишечнике экспериментальных животных, а также
внутрипеченочной циркуляции этих веществ, определения ферментативной
активности Фракций гепатоцитав, катализирующих дегидрирование
субстратов и окисление бензгидрола.
3. Изучить зависимость между скоростью окисления гетероциклического
кольца 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онов и их Физикохимическими
свойствами. Определить механизмы реакций окисления
ацетального углерода в гетерокольце субстратов (С^-гидроксилирование).
4. Исследовать структурную избирательность (специфичность) каталитического
действия монооксигеназ при ароматическом гидроксилиовании
1,4-бенздиазепинов. Использовать при этом пути метаболизма
Н-5-бром-2* -хлор-2-аминобензоФенона в организме экспериментальных
животных в качестве биохимической модели ароматического гидроксилирования
Феназепама. Установить природу монооксигеназ, окисляющих
ароматические ядра и гетероциклическое кольцо 1,4-бенздиазепинов.
- 3 -
5. Получить данные о неизвестных путях метаболизма ксенобиотиков.
В этой связи изучить кинетические параметры процессов дегидрирования
тетрагидро-1,4-бенздиазепинов, его зависимость от концентрации
ионов водорода, ФосФатных ионов и коФерментов.
6. Получить данные о взаимодействии процессов восстановления,
ацети'лирования и деацетилирования 1,4-бенздиазепинов в организме
экспериментальных животных.
7. Выяснить в процессе доклинического испытания видовые различия
метаболизма Феназепама. Исследовать кинетику распределения Феназепама
и его метаболитов в органах и тканях, а также выведения
с мочой и калом у экспериментальных животных, получавших однократно
и длительно препарат. Создать кинетические модели, описывающие
выведение феназепама из организма животных, основанные на его ферментативном
превращении.
8. Использовать принципы распределения и метаболизма 1,4-бенздиазепинов
в конструировании противосудорожнах и антиагрессивных
средств и изучении некоторых сторон механизма их действия.
Научная новизна работы заключается в том, что впервые:
Разработаны методы извлечения из биологических сред, очистки
от коэкетрактивных веществ, разделения метаболитов (тонкослойная
и колоночная хроматографии), идентификации (УФ-, ИК-, ЯМР-спектроскопии,
масс-спектрометрия и вольтамперометрия) и количественного
определения (спектроФотометрия, полярограФия и радиоиндикация)
неизвестных ранее или малоизученных 1,4-бенздиазепинов. Синтезированы
м 3
3
С-Феназепам, Н-феназепаи, Н-5-бром-2' -хлор-2-аминобензофенон.
Используя принта метаболизма бензоФенона в организме
животных, получен 3 Н-5-бром-3-окси-2*-хлор-2-аминобензофенон.
Представлены методы получения канюлированных вывернутых мешочков
из тонкой кишки крыс для анализа трансформации и транслокации
ксенобиотиков, а также животных "доноров" и "реципиентов" желчи,
для исследования внутрипеченочной циркуляции 1,4-бенздиазепинов.
Определена Ферментативная активность Фракций гепатоцитов, катализирующих
дегидрирование тетрагидро-1,4-бенздиазепинов и окисление
5-бром-2-аминобе нзгидрола.
Установлено, что скорость окисления гетероциклического кольца
(С 3 -гидроксилирование) 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онов зависит
от их электронных свойств (дипольные моменты, основность,

_ ц -
субстрата. Показана возможность С^-гидроксилирования н -окисей
1,ч-бенздиазепинов последовательными реакциями, катализируемыми
не зависимыми от цитохрома Р-ч50 ферментами.
Относительное содержание о-, м- и п-изомеров, образующихся в
реакциях ароматического гидроксилирования 1,ч-бенздиазепинов и
2- аминобензофенонов зависит от природы уже имеющегося в ароматическом
кольце заместителя. Использовав различные индукторы и ингибиторы
мы заключили, что окисление гетерокольца и ароматическое
гидроксилирование 1,ч-бенздиаэепинов катализируется не одним, а
по крайней мере двумя ферментами.
Установлено, что механизм ферментативного образования хиназолин-2-она
из 1,4-бенздиаэепинов включает окисление последних в
3- оксипроизводные с последующим их превращением в глиоксалевые
производные кетимина с освобождением формальдегида. Показаны различия
в скорости дегидрирования тетрагидро-1,ч-бенздиазепин-2-она
в клетках печени, почек и надпочечников мышей, крыс и морских
свинок, ферменты, катализирующие превращение субстрата в дигидропроизводное
локализованы в м-кросомах и растворимой фракции исследуемых
органов, имеют оптимум рН 9 и их активность зависит от
концентрации фосфатных ионов и коферментов в инкубационной среде.
Показано, что процессы восстановления, ацетилирования и деацетилирования
1,ч-бенздиазепинов зависят от структурных (конформационных)
особенностей субстратов и вида экспериментальных животных.
Определенный вклад в обмен этих соединений вносят ферменты
слизистой кишечника, его микрофлора и форменные элементы крови.
Изучены пути метаболизма С- и ^Н-феназепама и зависимость
этого процесса от вида экспериментальных животных. Объяснены закономерности
кинетики распределения феназепама и его метаболитов
по органам и тканям и выведения из организма крыс и мышей. Рассмотрены
математические модели фармакокинетики феназепама.
Практическая ценность работы. Проведенные нами исследования
метаболизма и фармакокинетики производных 1,ч-бенздиазепина явились
частью предклинических испытаний, впоследствие внедренного
в медицинскую практику первого отечественного транквилизатора
феназепама.
Результаты работы использованы при переносе данных с животных
на человека, так как для их правомочности следует учитывать
как динамику действия препарата, так и его фармакокинетические
особенности.
- 5 -
Разработанные нами математические модели фармакокинетики феназепама
способствуют созданию теоретических основ рационального
использования этого препарата при его однократном и длительном
введении пациентам и животным.
Кинетические методы распределения феназепама, его метаболизм,
совместно с ныне существующими методами санитарной токсикологии,
позволили объективно установить величины предельно допустимых
уровней всех этих соединений в воздухе цеха Опытного завода Физико-химического
института АН УССР, где выпускается субстанция
феназепама.
Впервые в широкой практике нами испытан метод управления феназепамом
поведения пушных зверей (норок) в условиях современного
пушного зверохозяйства промышленного типа. Предлагаемый способ
повышает качество пушнины за счет снижения феназепамом агрессивности
животных и может быть использован при клеточном разведении
песцов, лисиц, соболей и др.
Существенное практическое значение в медицинской практике и
в специальных целях могут иметь наши данные о соединениях, которые
в живых организмах превращаются в I,*г-бе;-:здиазегяаы, что способствует
возникновению длительного противосудорожного эффекта.
Материалы работы (разработанные методы исследования, данные о
механизмах реакций метаболизма ксенобиотиков) внедрены в учебный
процесс Одесского университета на кафедре органической химии для
студентов, обучающихся по специальности биохимия и химия Физиологически
активных синтетических и природных соединения.
Апробация работы. Отде-льные фрагменты работы докладывались и
обсуждались на Ш-м (Рига, 197ч) и 1У-м (Ленинград, 1979) Всесоюзных
биохимических съездах, Х1-м Менделеевском съезде по общей
и прикладной химии (Алма-Ата, 1975), Украинской республиканской
конференции "Химия и перспективы применения углеводородов ряда
адамантана и родственных соединений" (Киев, 197ч), 1У-м Всесоюзном
коллоквиуме "Химия и фармакология индольных соединений" (Кишинев,
1975), У1-м Всесоюзном совещании по полярографии (Рига,
1975), Ш-й Всесоюзной конференции по аналитической химии органических
соединений (Москва, 1976), Всесоюзной конференции "Синтез
и механизм действия физиологически активных веществ" (Одесса,
1976), Всесоюзном симпозиуме "Биохимия митохондрий" (Одесса,

- б -
1976), Ш-м Украинском биохимическом съезде (Донецк, 1977), Х-м
съезде Украинского Физиологического общества (Одесса, 1977), Общем
собрании отделения химии и химической технологии АН УССР (Донецк,
1977), Всесоюзном совещании "Современное состояние и перспективы
развития фармакокинетики" (Звенигород, 1978), Ш-м и
1У-м Всесоюзных симпозиумах по целенаправленному изысканию новых
физиологически активных соединений (Рига, 1979; 1981), Всесоюзном
симпозиуме "Окисление физиологически активных соединений в биологических
мембранах" (Одесса, 1979), Всесоюзной конференции "Молекулярные
механизмы проницаемости мембранных структур" (Паланга,
1979), Международном симпозиуме "Бенздиазепины - теоретические и
практические аспекты" (Москва, 1980), на постоянно действующих
семинарах по органической и биоорганической химии Физико-химического
института АН УССР, на Отчетных научных сессиях провес сорок о
преподавательского состава Одесского университета.
Публикации. По материалам диссертации опубликована 71 работа.
Результаты исследований и литературные данные обобщены в 2-х моно
графиях и б обзорных статьях.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора
литературы (3 главы), экспериментальной части (7 глав), заключения,
вызодов и списка цитированной литературы (539 наименова
ний). Работа изложена на 454 страницах машинописного текста, содержит
71 таблицу и 53 рисунка. В обзоре литературы изложены современные
представления о молекулярной ^ганизации ферментных систем,
катализирующих окислительно-восстановительные и синтетические
реакции метаболизма ксенобиотиков. Специальная глава посвяще
на свойствам (физическим, физико-химическим, биологическим) и метаболизму
производных 1,4-бенздиазепина.
МАТЕРИАЛУ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Все исследованные нами соединения - производные 1,4-бенздиазепина
и родственные структуры - синтезированы в Одесском госуниверситете
и в отделе химии биологически активных веществ физикохимического
института АН УССР. Методы синтеза, доказательство
строения, а также физико-химические свойства отих веществ описаны
нами в монографии (Богатский, Андронати, Головенко, 1980). Синтез
меченых соединений осуществляли по разработанному нами методу
(Якубовская и др., 1979).
- 7 -
Опыты проводили на мышах линий СВА и BAL В/с, крысах линии Висгар,
морских свинках и диких норках. Исследуемые вещества вводили
животным в твиновой эмульсии изотониче л, сого раствора хлористого
натрия. В различных сериях опытов введение соединений было внутрибрюшинным,
пероральным или внутривенным. Для сбора мочи и кала животных
помещали в специально оборудованные клетки. Выделение 1,4-
бенздиазепинов с желчью, а также их внутрипеченочная циркуляция
изучались по методам (Головенко, Карасева, 1979; Богатский, Головенко,
Зиньковский, 1980). 3 качестве объектов исследования в зависимости
от решаемой задачи использовали: ядра, митохондрии, микросомы
и растворимую фракцию различных органов и тканей, Форменные
элементы крови и плазму (Кост, 1975), канюлированые вывернутые
мешочки (КВМ) тонкого кишечника (Богатский, Головенко и др.,1978).
Для изучения роли Ферментов различных отделов кишечника и их микрофлоры
в обмене 1,4-бенздиазепинов использовали метод in situ
(Головенко, Богатский и др., 1977).
Исследования активности Ферментов окислительного обмена ксенобиотиков
включали следующие методы: деметилирование диметиланилина
и n-гидроксилирование анилина (Карузина, Арчаков, 1977); НАВРН -
цитохром с редуктазы по Dallner, 1963), основанного на определении
изменения поглощения акцептора электронов (цитохром с) при его переходе
из окисленной Формы в восстановленную (спектрофотометр
PerldLn Elaer-555 )• Измерение скорости поглощения кислорода препаратами
микросом печени проводили с помощью стационарного платинового
электрода закрытого типа на полярограФе LP-7 . Определяли
содержание цитохрома измерением разницы поглощения восстановленной
и окисленной Форм Темопротеида (Карузина, Арчаков, 1977).
Запись проводили в диапазоне волн 400-500 нм на спектрофотометре
"Specord UV Vis". Концентрацию цитохрома Р-450 определяли по поглощению
комплекса восстановленного гемопротсида с окисью углерода
( Omura.Sato, 1964) на спектрофотометре "Specord UV Vis" (по
двухлучевой схеме) и Hitachi 356 (по двуволновои схеме). Спектральные
изменения комплексов цитохрома Р-450 с 1,4-бенздиазепинами
регистрировали спектрофотометром Ш-2ОТ Vis "Aminco" . Активность
глюкозо-б-Фосфатазы микросом печени устанавливали по количеству
образовавшегося ФосФора при гидролизе глюкозо-6-ФосФата ( Zakim,
Vessey, 1973). Метод определения активности УДФ-глюкурокилтрансФеразы
основан на использовании в качестве субстратов о-аминобсизоата
и п-нитроФенола ( Zaum, Vessey, 1973). Содержание белка измеряли
по методу Лоури.

­ 8 ­
Анализ 1,4­бенздиазепинов и их метаболитов проводили в сложных
по своему химическому составу, чрезвычайно разнообразных смесях. В
связи с этим он сводился к ряду последовательных процедур, направленных
на извлечение бенздиазепинов из исследуемого биологического
материала, их очистку и количественное определение. Детально методы
описаны в обзорной статье (Головенко, Зиньковский, 1978) и монографии
(Богатский, Андронрти, Головенко, 1980).
Устанавливали структуру метаболитов, выделенных из биологических
проб цветными реакциями, УФ­, ИК­спектроскопией и вольтамперометрией.
Большинство масс­спектров метаболитов получено на приборе
МХ­1303 при энергии ионизации 50 В, токе эмиссии 1,5 мА и при
температуре на 20­50°С ниже их температуры плавления. Масс­спектры
высокого разрешения получали на приборах Фирмы Таг1ап, модели МАТ­
311 и фирмы Зео1, модели 01­БЬ­2. ЯМР­спектры метаболитов снимали в
растворах дейтероацетона на приборе Тесла­60.
Количественное определение метаболитов осуществляли методами
спектроФотометрии, вольтамперометрии и радиоиндикации (сцинтиляционный
Фотометр КЬ­ЗО, Франция\ В целом для количественной оценки
метаболитов феназепама в моче и кале экспериментальных животных
нами предложена общая схема их определения (Головенко, Зиньковский,
Богатский и др., 1979). Если исследовались метаболиты Феназепама в
органах и тканях животных, нами использовалась другая схема (Головенко,
ЗИНЬКОВСКИЙ, Серединин и др., 1980).
Статистическая обработка большинства экспериментальных данных
проводилась методом средней арифметической и средней квадратической
ошибки по критерию достоверности Стьюдента на ЭЦМ "Искра­122". Для
установления математической зависимости между Физико­химическими
свойствами субстратов и скоростью их окисления использовали регрессионный
анализ (Лакин, 1973). При определении накопленных частот
минимальных эффективных доз применялся математический аппарат
пробит­анализа (Беленький, 1963). Для описания процессов выделения
феназепама и его метаболитов, а также распределения их в органах и
тканях животных, мы применили многочастевые модели (Соловьев, Фирсов,
Филов, 1980). Исследование нелинейных процессов интегральных
кривых Ферментативных реакций проводили с использованием математического
аппарата, предложенного Пиотровским (Пиотровский, 1976).
­ 9 ­
СОДЕРЖАНИЕ
РАБОТЫ
ОКИСЛЕНИЕ ГЕТЕРОЦИКЛЛЧЕСКОГО ШЛА 1,ч­БЕНЗДИАЗЕПИНОВ
Анализ радиохроматограмм хлороформных экстрактов мочи и кала
крыс, которым внутрибрюшинно вводили ^С­Феназепам (1ч мг/кг) показал,
что они содержат не менее четырех пиков радиоактивности.
Масс­спектрометрическое исследование соединения I (Л£ 0,85 в си
стеме растворителей ацетон­хлороФорм­30^ аммиак в соотношении
1:1:0,05) свидетельствовало о его полной идентичности исходному
препарату. Фрагментация этого вещества включала в себя два направ
ления. На первом молекулярный ион последовательно теряет атом хло
ра (щ/е 313), молекулу СО ( щ/е 285) и молекулу НВг (щ/е 205).
Кроме того, ион с щ/е 313 может элиминировать атом брома ( т/е
23ч), а ион с щ/е 285 терять молекулу НОТ ( щ/е 258). Второе
направление включает элиминирование молекулярным ионом атома водо
рода (щ/е 347), молекулу СО ( щ/е 319) и молекулу 0^01 ( щ/е
207). Фрагмент с щ/е 207, как показал масс­спектр высокого разре
шения, имеет элементный состав СдН^ИЕг. Масс­спектр метаболита
II (кг 0,45), наряду с незначительным по интенсивности пиком моле
кулярного иона ( щ/е 364), содержит интенсивные пики фрагментных
ионов [м­Н г
0] + с щ/е Зчб и [м­НС0] + с щ/е 335, что указывает на
наличие оксигруппы у третьего углеродного атома молекулы бенздиазепина.
Метаболит II в значительных количествах обнаружен в хлоро
формных экстрактах водных фаз мочи и кала, обработанных в ­глюкуронидазой.
Следовательно, Феназепам в организме крыс окисляется по ацетальному
углероду с последующим образованием глюкуронида (11­г).
За сутки из организма крыс выводится в 2,5 раза больше метаболита
II ^свободная Форма и глюкуронид), чем I. 3 течение б часов
эксперимента в желчи крыс содержание II и II­г в 8 раз больше,
чем I. В организме мышей линии BAL 3/с окисление гетерокольца Феназепама
проходит значительно интенсивнее, так как за 2ч часа с
мочой и калом окисленный метаболит выводится в количестве, превы­

- 10 -
тающем в 7 раз экскрецию этими путями исходного препарата. У диких
норок процессы метаболизма Феназепама также смещены в сторону образования
3-оксилроизводного. В течение суток с калом у норок выводится
0,84±0,28$ исходного препарата, 3,34±0,74 3-оксипроизводного
и 1,83±0,78 глюкуронида. В отличие от крыс и мышей II выделяется
из организма норок с калом в большем количестве свободной
формой, чем глюкуронидом.
Для того, чтобы установить взаимосвязь между структурой 1,4-
бенздиазепинов и их способностью окисляться, а также накапливаться
в органах и тканях экспериментальных животных, нами были использованы
7-замещенные 1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-оны. Как и Феназепам,
эти вещества окисляются по гетероциклическому кольцу с
образованием 3-оксиметаболитов
В=Вг; СІ; Н;

- 13 -
- 12 -
Во всех трех олучаях экспериментальные данные более чем на 95%
соответствуют теоретическим расчетам. Сопоставление скоростей окиоления
ацетального углерода оубстратов с их липотропностыэ показало
отсутствие определенной взаимосвязи между изучаемыми параметрами.
В то же время известны удовлетворительные корреляционные уравнения,
описывающие процессы ароматического гидроксилирования и деалкилирования
ксенобиотиков, которые зависят от их липотропных свойств (Ляхович,
Цырлов, 1978). Проведенные исследогания свидетельствуют о
том, что при окислении гетероциклического кольца 7-замещенных 1,4-
бенздиазепин-2-оков их электронные свойства играют более важную
роль, чем липофильные.
Образование комплекса между окисленной формой цитохрома Р-450 и
субстратами принято считать начальной и обязательной стадией в процессе
гидроксилирования ксенобиотиков (1^аЪгоок,Со1хеп,1969.) . При
взаимодействии гемопротеида с 1,4-бенздиазепинами ( и =Вг ; Н и
СН3) нами зарегистрированы его спектральные изменения, характеризующиеся
поглощением при 390 и 425 нм. В литературе он получил название
спектрального изменения второго типа. Возникает он в результате
присоединения ксенобиотика к гемовой группе цитохрома Р-450 с образованием
комплексов гемохромогенов ( БсЬепкшап,БаЪо,1968) . Нитразепам
( и = Я0 2
) вызывает атипичные спектральные изменения гемопротеида,
особенно в области высоких концентраций субстрата, что по
нашему мнению связано с его нитрогруппой, обеспечивающей высокие
электроноакцепторные свойства (табл.1) и характер метаболизма. Измерение
амплитуды спектральных изменений в условиях образования
комплекса цитохром Р-450 - субстрат показало, что она зависит от
концентрации последних. Для соединений с Е = Вт и СН^ насыщение
наступает при 0,55-0,65 мМ; для R = н - около I, а Е = N0 2
0,25
мМ. 3 координатах Лайнуивера-Бэрка зависимость дю от концентрации
субстратов (исключая в = И0 2
) спрямляется. Для изучаемых соединений
показано резкое различие Ks И дБтах вследствие преждевременного
спрямления кривых (V^D; 1/S ) при малых значениях концентраций
субстратов. Определенной корреляции между дСшах и скоростью
С -гидроксилирования 7-замещенных 1,4-бенздиазепинов нами
не обнаружено.
Механизм окисления ацетального углерода гетероциклического кольца
1,4-бенздиазепинов - весьма сложный процесс и, по-видимому,
включает несколько путей. Зо-первых, внедрение активированного
кислорода в связь углерод-водород. Второй путь начинается с отрыва
водорода с последующим активированием субстрата. Последний процесо
энергетически менее выгоден, однако имеет место при али^атичеоком
окислении ксенобиотиков ( Testa,Jenner, 1978). Оба пути проводят
к образованию энантиомерных продуктов. 3 настоящее время нет данных,
указывающих, какой из энантиомеров образуется в большей степе
ни.
Дальнейшие наши исследования показали, что С -гидроксилирование
1,4-бенздиазепинов может проходить не только в эндоплазматическом
ретикулуме, но и в митохондриях печени крыс. Внесение в инкубационную
среду, содержащую ацетил-КоА, митохондрий (5,8-6,2 мг белка)
и субстрата (Н -окись-бенздиазепина) приводит к образованию
3-ацетилпроизводного и 3-оксиметаболита. Мы заключили, что превращение
к -окиси в 3-оксипроизводное проходит в две стадии:

­ 1ч ­
На первой возникает промежуточное соединение, образование которого
обусловлено взаимодействием активного кислорода с нуклеофильным
иминоазотом и Ферментом (донором ацетильной группы, типа ацетил­КоА).
В результате такой реакции образуется высокоэнергетический
ферментно­субстратный комплекс. Затем через ряд химических перегруппировок
н­окись превращается в 3­ацетильное производное. Последнее
соединение служит субстратом для деацетилаз (эстераз), которые
катализируют его превращение в 3­оксипроизводное. Очевидно,
процесс окисления N­окиси в митохондриях гепатоцитов крыс ­ неспецифический
процесс и окисление как термин можно считать условным.
Вещества, содержащие метиленовую группу вместо карбоксильной,
(типа медазепама) в организме крыс подвергаются С^­гидроксилированию.
Окисление при втором атоме таких 1,4­бенздиазепинов проходит
через стадию образования карбиноламина, с последующим окислением
его до кетона.
ГИДРОКСИЖРОВАНИЕ АРОМАТИЧЕСКИХ ЯДЕР 1,4­БЕНЗДИАЗЕПИНОВ
Как уже указывалось в предыдущем разделе, хлороформные экстракты
мочи и кала экспериментальных животных содержат не менее четырех
пиков радиоактивности. Два из них ­ I и II ­ соответствовали
исходному соединению и его 3­окоипроизводному. Физико­химические
методы анализа показали, что метаболиты III и 1У содержат азометиновую
связь (полярографическое восстановление ­ 1100 мВ), интенсивное
поглощение в ИК­области (1680­1700 сг ­ 1
­ карбонильная группа
гетерокольца) и УФ­спектрах (III ­ 231, 322 нм и 1У ­ 243, 313 нм),
поэтому их можно отнести к производным 1,4­бенздиазепина. Однако
наиболее однозначная информация о структуре этих веществ была получена
нами масс­спектрометрией III и продуктов гидролиза III и 1У.
Масс­спектр метаболита III продемонстрировал образование пиков
молекулярного иона с ш/е 36ч, 366, 368 а.е.м., свидетельствующих
о наличии брома и хлора в молекуле метаболита. По сравнению с молекулой
феназепама молекулярная масса III увеличилась на 1с а.е.м.
Очевидно, в процессе метаболизма один атом водорода в молекуле феназепама
замещен оксигруппой. Наличие пиков ионов [м­^сЦ * щ/е
336, 338 и 340 однозначно указывает на то, что замещение произошло
не по третьему положению молекулы. Пики ионоа [ы­Н] + (ш/е 363,
365), а также [М­С1] + ( ш/е 329 и 331) обусловлены процессами отщепления
от соответствующих молекулярных ионов атомов водорода и
­ 15 ­
хлора, а ионов с щ/е 335, 337 и 339 ­ последовательным элиминированием
атома водорода и молекулы СО. В ма^с­спектре III не было
обнаружено прямого указания на положение оксигрулпы. Например, отсутствовал
пик £м-0н] + , при наличии которого мокно было бы говорить
о замещении в орто­положении 5­фенильного кольца. Тем не менее,
увеличение относительной интенсивности пиков ионов [м-н] +
{62% по сравнению с 55% у Феназепама) и уменьшение относительной
интенсивности пиков ионов [м­С1] +
(40$ по сравнению с 52^) косвенно
указывает на то, что с процессом элиминации хлора из орто­положения
фенильного кольца молекулы может конкурировать следующий
Более детально строение метаболитов III и 1У мы изучили по продуктам
их гидролиза. При кислотном гидролизе синтетических и выделенных
из мочи крыс феназепама и 3­оксипроизводного образуется
один продукт ­ 5­бром­2'­хлор­2­аминобензофенон (1­6). Продуктом
гидролиза III был ароматический амин с Е£ 0,35 (Ш­б). Изучение
продуктов гидролиза пика радиоактивности 1У показало, что он обусловлен
присутствием по крайней мере трех веществ со значениями И£
0,65 (17­1), 0,50 (У­б) и 0,42 (У1­6). Данные У*­, ИК­спектроскопии,
полярографии и цветные реакции свидетельствовали о ТОЙ, что
полученные соединения представляют собой производные 2­аминобензофенона.
Сравнение масс­спектров Ш­б ­ У1­6 и определение основных
изменений в их структуре по отношению к стандарту (1­6) показали
следующие закономерности (рис.1). В масс­спектре Ш­б пики молекулярных
ионов сместились на 16 а.е.м. в сторону больших значений щ/е,
что свидетельствует о наличии в молекуле гидроксильной группы. Соответствующие
приращения массы наблюдались у ионов $£-$5 и Фд­Ф 10
­
Ионы Ф£, Фу и Фд на шкале щ/е сохранили свое положение. Следовательно
в данном бензофеноне гидроксильная группа находится в. хлорсодерыащем
бензольном ядре. Однако в этом спектре полностью отсутствует
пик ионов [ф/ +
­Н20] + , что указывает на различное положение гидроксила
в молекуле Ш­б и 1У­6. Принимая во внимание, что относительная
интенсивность Ф2 ['''1­0Н] +
в спектре Ш­б сильно увеличилась
(47 по сравнению с 1,6% у 1­6), мы заключили, что в данном соедини­

- 17 -
ний гидроксильная группа находится в орто-положении хлорзамещенного
бензольного кольца (рис.1).
Все перемещения значений и/в пиков М + и Фрагментных ионов в
масс-спектре ІУ-6 полностью совпадают со спектром Щ-б. В то же
время ионы Ф^ теряют молекулу воды. Исходя из того, что в этом
процессе участвует гидроксил в молекуле ІУ-6, оксигруппа находится
в мета-положении хлорзамещеиного бензольного кольца (рис.1).
В масс-спектре У-б пики молекулярных ионов также сместились на
16 а.е.м. в сторону больших значений ш/е. Пики Ф^-^д и Ф^ сместились
соответственно на 16 а.е.м., в то время как величины ш/е для
ионов Фд и Ф 10
сохранили свое значение. Этот Факт свидетельствует
о том, что гидроксильная группа в У-б находится в бромбензольном
кольце. Следует обратить внимание на то, что как и для ІУ-6 ионы
[м-Сі] + у У-б далее элиминируют молекулу воды ( щ/е 272-274),
чего не наблюдалось в масс-спектре 1-6.
Молекулярная масса УІ-6 увеличилась на 46 а.е.м. по сравнению
с 1-6. Причем это приращение обусловлено заместителями, входящими
в хлорбензольное кольцо, так как пики ионов и Фу ( т/в 198-200
и 170-172), образующиеся в результате элиминирования этого Фрагмента
из молекулярного иона, сохранили свое положение в масс-спект
ре. Наиболее вероятно из всех возможных элементных составов с массой
46, молекула Г присоединила в процессе метаболизма элементы
СЕ^. Исходя из того, что молекулярные ионы не теряют группы ОН
(относительная интенсивность пиков ионов $2 не
увеличилась по срав
нению с масс-спектром 1-6), а ионы Ф^ не элиминируют молекулы воды
или СН3ОН, можно предположить, что положения 3 и б не замещены.
Дальнейшее направление распада Ф^ косвенно указывает, что метоксигруппа
находится в положении 5, тогда как гидроксильная замещает
положение 4 (рис.1).
Структуры У-б и УІ-6 подтверждены нами методом спектроскопии
ЯМР. Следует отметить, что УІ-6 возможно представлен смесью двух
изомеров, так как сигнал протонов в области 3,5 м.д. несимметрично
расщеплен.
Исходя из представленных результатов, ароматическое гидроксилирование
I протекает по схеме:

- 18 -
В течение суток из организма крыс выводится 11,2;? фенольных метаболитов
(3-оксиметаболита - 0,42$). Для организма мышей эти величины
соответственно составили 13,3 и 12,8$. Таким образом, для
организма крыс предпочтительным является процесс окисления ароматических
ядер, в то время как для мышей - ароматическое гидроксилирование
и окисление гетерокольца I - равноценны.
Использование в качестве субстрата окисления ^Н-5-бром-2'-хлор-
2-аминобензофенона (I-б) позволило нам дополнить представление о
структурной избирательности каталитического действия монооксигеназ
в процессе ароматического гидроксилирования. В организме крыс и
мышей из "^H-I-б образуются те же производные (кроме 1У-6), которые
были выделены нами при гидролизе метаболитов I. Среди продуктов,
экскретирующихся с иочой у мышей, было обнаружено 14,5% исходного
вещества. Интенсивность метаболизма исследуемого бензоФенона в организме
крыс ниже, так как около 70% общего радиоактивного материала
представлено I-б. Среди метаболитов в моче мышей обнаружено более
QO% глюкуронидов как установленной структуры (III-б и У-б),
так и неидентифицированных (со значением RT 0,0 и 0,2). У крыс '
процесс конъюгации оксиметаболитов I-б с глюкуроновой кислотой выражен
значительно слабее и поэтому только 55% их было зарегистрировано
в свободном состоянии после инкубации с а-глюкуронидазой.
Дальнейшее изучение метаболизма 1-6 было проведено in vitro на
микросомах печени крыс и мышей (рис.2). В этом случае были использованы
в качестве субстратов окисления как I-б, так и У-б. В хлороформных
экстрактах инкубационной смеси, в которой исследовали
метаболизм У-б, были обнаружены вещества с Ef 0,0; 0,2 и 0,7, ранее
выделенные нами из мочи животных. Полученные данные позволяют
утверждать, что неидентифицированные соединения, образующиеся при
обмене I-б, являются метаболитами' "второго поколения", в основе

- 20 -
которых лежит У-б. Сравнительное исследование окисления in vitro
I-б в микросоыах печени крыс и иышей показало, что этот процесс не
зависит от вида животного. Однотипность окисления I-б in vitro и
существенные различия в опытах in vivo позволяют предположить,
что причина их обусловлена не видовыми различиями монооксигеназ, а
скорее воего различной специфичностью по отношению к окисленному
продукту УДФ-глюкуронилтрансфераз. В литературе имеются данные о
том, что монооксигеназы и УДФ-глюкуронилтра нефе разы образуют мультиферментный
комплекс в эндопльзматическом ретикулуме гепатоцитов
животных ( Eetabrook, Franklin,Cohen, 1971). Эти ферменты прочно
связаны с мембранами и их взаимосвязь вызывает увеличение локальной
концентрации промежуточных продуктов реакции в зоне микроокружения
ферментов.
Относительное содержание о-, м- и п-изомеров, образующиеся в
процессе окисления I и I-б зависит от природы уже имеющегося в
ароматическом кольце заместителя. Так соединение I-б содержит в
овоей молекуле два ароматических кольца. Одно из них имеет в качестве
заместителя вг и NH 2
другое - CI. Галогены, как известно,
составляют класо заместителей, дезактивирующих орто- и пара-ориентантов,
что приводит к образованию при замещении орто- или параизомеров.
Однако, в обоих ароматических ядрах метаболитов Ш-б и
У-б окоигруппа находится в мета-положении относительно атомов галогенов.
Очевидно, при гидроксилировании бромзамещенного ядра
аминогруппа оказывает ооновное влияние на этот процесс. Заместители
типа КН 2
активируют все свободные положения ядра, причем активация
орто- и пара-положений больше, чем мета-положения. Заметим
по этому случаю, что пара-положение у I-б относительно аминогруппы
занято бромом. Несколько сложнее обстоит дело с хлорзамещенным
ароматичеоким ядром, которое окисляется в мета-положении в метаболитах
Щ-б и У1-6. Можно предположить, что основное влияние в
этом случае оказывает заместитель АГ-СО. Представленные данные
свидетельствуют о том, что ферментативное окисление ароматических
ядер, по-видимому, следует правилам электрофильного ароматического
замещения и должно, оогласно этому, протекать путем присоединения
активированного кислорода к дГ-электронной оистеме.
Среди метаболитов I и I-б мы не обнаружили дигидродиодов и катехолов,
которые образуются в организме экспериментальных животных
при введении им конобиотиков, содержащих ароматические ядра ( j
e
-
rina, Daly.wltkop и др., 1968). Исходя из наших исследований и литературных
данных, окисление ароматических ядер I молет проходить
- 21 -
путем арилэпоксидирования. Промежуточными продуктами этих реакция
служат ареновые окислы.
роксилирование и окисление ароматических ядер были проведены исследования
на изолированных микросомах печени крыс и мышей. Оказалось,
что монооксигеназы печени мышей с большей скоростью окисляют
ацетальный углерод гетерокольца I с образованием II, а у крыс ароматическое
ядро с образованием III. Мы предположили, что одной из
причин, объясняющих это явление, может быть различие в содержании
определенной формы цитохрома Р-450 в печени экспериментальных животных.
Интактные микросомы печени мышей содержат гемапротеид в
количестве 1,1*0,3 нмоль/мг белка, а крыс - 0,64*0,05 нмоль/мг
белка. Введение крысам Фенобарбитала и 3-метилхолантрена приводило
к индукции цитохрома Р-450 (1,38*0,08 и 0,91^0,07 нмоль/мг белка,
соответственно). В этом случае скорость образования метаболита II
значительно увеличивается (табл.3). В то же время оба индуктора
оказались не эффективными по отношению к метаболиту III.
Следовательно, увеличение содержания в гепатоцитах крыс цитохрома
Р-450 приводит к изменению направления гидроксилирования I.
Этот факт, а также различие кинетических параметров в образовании
II и III в одном организме свидетельствует, что оба процесса катализируются
не одним, а по крайней мере двумя ферментами.

Определение общего содержания радиоактивного материала в организме
белых крыс, которым однократно вводили ^С-Феназепам (1ч
мг/кг) показало, что он неравномерно распределяется в органах и
тканях животного. Их можно расположить в следующий ряд: печень >
•> почки у жировая ткань > сердце ^ селезенка, легкие > плазма крови,
надпочечники > головной мозг, вилочковая железа > лимфатические
узлы, мышцы. При длительном (в течение 15 суток) введении животным
феназепама общая картина его распределения не меняется. Положительным
моментом также можно считать тот факт, что жировая ткань
крыс не является областью медленного обмена (депо) для Феназепама,
так как снижение логарифма концентрации радиоактивного материала
в жировой ткани и плазме крови осуществляется параллельно. Уменьшение
содержания ФЕНАЗЕПАМА в органах и тканях животных указывает
на то, что элиминация препарата и его метаболитов - биэкспоненциальчый
процесс, СОСТОЯЩИЙ ИЗ "быстрой" и "медленной" Фаз.
В плазме крови, печени и головном мозге крыс кроме Феназепама
содержатся метаболиты II и III. Значительное количество Феназепама
и его метаболитов связывается с белками плазмы крови и печени животных.
Распределение радиоактивного материала, связанного с белками
крови - двухфазный процесс, для которого "медленная" фаза
имеет период полувыведения 20-2ч часа (константа скорости процесса
- 0,03 ч~*). Этот процесс наблюдается на Фоне быстрой элиминации
свободных метаболитов феназепама и неизмененного препарата.
Поэтому мы предполагаем, что областью "медленного" обмена Феназепама
служат белки (альбумины).
Выведение общего радиоактивного материала с мочой и калом крыс,
которым однократно и в течение 15 суток вводили феназепам, описывается
уравнением первого порядка. Наиболее удобным описанием скорости
выведения Феназепама из трех методов "скорости" "сигма минус"
и "Иансгельдорфа" оказался последний. На его основании мы заключили,
что выделение радиоактивного материала из организма крыс
- биэкспоненциальный процесс, который может бить описан следующей
кинетической моделью:

- 32 -
гепатоцитов крыс. Однако детальное исследование компонентов монооксигеназных
систем и активности УДФ-глюкуронилтрансфераз показало
отсутствие различий у контрольных крнс и животных, которым в течение
15 дней вводили феназепам (табл.8).
Таблица 8
Содержание белка, гемопротеидов и удельная активность
ферментов микросом печени белых крыс, катализирующих окисление
феназепама и образование глюкуронидов в норме и в условиях
длительного введения животным препарата в дозе
1ч мг/кг ( и = 6-8)
Анализ данных кинетики выведения феназепама и е^о метаболитов
позволил нам заключить, что изменение их соотношения при однократном
и длительном введении препарата обусловлено тем, что один из
параллельных процессов (экскреция неизмененного сос/.лнения) -
первого порядка, а другом (образование и выведение метаболита) -
нелинейный. В опыте при длительном введении феназепама наблюдается
увеличение интенсивности выделения неизменного препарата, а
отношение количества выделившихся свободных метаболитов и глюкуронидов
возросло более чем в четыре раза. Следовательно, образо-

- 36 -
скорость С -гидроксилирования. Однако, экспериментальные данные
показали отсутствие различий в скорости образования II, Б и их
глюкуронидов. Очевидно, Б поступают в область "медленного обмена",
которая, как и в случае организма крыс, может быть представлена
белками. Уровень содержания связанного радиоактивного материала
в плазме и печени мышей позволяет сделать такое заключение.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРИНЦИПОВ МЕТАБОЛИЗМА И РАСПРЕДЕЛЕНИЯ
ШЗДИАЗЕПИНОВ В КОНСТРУИРОВАНИИ ПР0ТИ30СУД0Р01НЫХ И АНТИ-
#АГРЕССИВНЫХ СРЕДСТВ И ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ СТОРОН МЕХАНИЗМА
их ДЕЙСТВИЯ
Одно из важных приложений кинетики распределения Физиологически
активных веществ и метаболитов - установление связи между их
концентрацией в области действия и величиной эффекта. В этой связи
нами исследованы величины минимальных эффективных доз ложных клонических
и клонико-тонических судорог, а также тонической экстензии,
вызванных внутривенным введением коразола мышам и влияние на
этот процесс Феназепама, сулазепама и их метаболитов. Показано,
пч> все исследуемые соединения увеличивают значение минимальных
• 'активних доз по регистрируемым показателям, а максимум противосудорожноя
активности достигается через 15 мин после введения
бенздиазепинов. Установлена четкая корреляционная зависимость
между величинами минимальных эффективных доз регистрируемых показателей
судорожного припадка в контрольной группе животных, которая
сохраняется и после введения веществ. Очевидно, 1,4-бенздиазепины
увеличивают минимальные эффективные дозы коразола для регистрируемых
эффектов, но не изменяэт общей картины судорожного
припадка и не влияют на дисперсию зависимости доза коразола - эффект.
Кроме того, характер кривой (доза коразола, вызывающая
ЕД зс
-доза бенздиазелина), дает возможность предположить отсутствие
взаимодействия коразола и бенздиазепинов на одном рецепторе
нервной ткани. Регистрируя судорожное действие коразола на фоне
введения животным бенздиазепинов, мы можем представить, что это
"Физиологический антагонизм" двух агонистов, имеющих противоположные
эффекты и реализующих свое действие на различных рецепторах.
По-видимому, этим объясняется тот Факт, что при сопоставлении
максимальних концентраций Феназепама и его З-оксиметаболита
в головном мозге милей и сопряженных величин минимальных доз ко-

­ 38 ­
Учитывая антиагрессивные свойства 1,4­бенздиазепинов и тот
факт, что многие зверохозяйства, специализирующиеся на разведении
пушных зверей при массовом клеточном содержании терпят убытки от
их чрезмерной агрессивности, мы использовали феназепам для управления
поведением норок. В частности, подобраны дозы препарата для
предотвращения каннибализма самок, а также нормализации поведения
животных в укрупненных группах на стадии взращивания молодняка.
В Ы В О Д Ы
1. Основные процессы метаболизма 1,4­бенздиазепинов в организме
животных представлены реакциями Функционализации и синтеза. К
2 3
первым относятся С ­ и С ­гидроксилирование, Н ­деалкилирование,
н ­окисление, ароматическое гидроксилирование и метоксилирование,
дегидрирование тетрагидро­1,4­бенздиазепиков, десульфирование,
сужение бенздиазешшового цикла до хиназолинового, гидролитическое
расщепление до бензофенона, восстановление нитрогруппы и н ­окиси.
Ко вторым ­ реакции образования к­ и О­глюкуронидов, а также аце­
••'илпроизводных.
2. Окисление ацетального углерода гетерокольца 7­замещенных
1,4­бенздиазепинов (С 3 ­гидроксилирование) зависит от электронных
свойств их заместителей (дипольнне моменты,

- 40 -
6. Предкдиническое изучение метаболизма, кинетики распределения
и выведения из организма экспериментальных животных фармакологически
активного соединения 7-бром-5-(о-хлорфенил)-1,2-дигидро-ЗН-
1,4-бенздиазепин-2-она (феназепама) показало преимущества его перед
существующими препаратами этого класса. В частности, нами не
обнаружены промежуточные реактивные соединения (устойчивые ареновые
окислы, нитрозосоединения и др.) в процессе метаболизма феназепама,
существующие у других ксенобиотиков и вызывающие патологическое
состояние организма.
9. Общее распределение феназепама и его метаболитов (общего
радиоактивного материала), а также отдельных метаболитов (3-оксипроизводнос,
фенольные метаболиты, глюкурониды и связанные с бьлками
метаболиты) является биэкспоненциальным процессом, состоящим
из "медленной" и "быстрой" фаз. Характер распределения Феназепама
и его метаболитов в организме крыс обусловлен их связью с альбуминами
(область медленного обмена). Константы скорости выделения
Феназепама и его метаболитов не претерпели заметных изменений у
чивотных, которым длительное время вводился препарат. Содержание
злка, цитохромов Р-450 и , удельная активность ферментов пече-
! крыс, катализирующих деметилировакие днметиланилина, гидрокси-
: твание анилина, а также скорость ИАСГН -цитохром с редуктазной
реаадип не отличались от контроля. Изменений в УДФ-глюкуронилтранс-
Феразных реакциях не наблюдалось.
10. Выведение части метаболитов с желчью у крыс описывается одночаотевой
моделью. В течение первых трех часов скорость выведения
метаболитов практически постоянна, но в дальнейшем изменение логарифма
скорости выделения от времени опыта стремится к линейной зависимости.
Следовательно элиминация "остаточных метаболитов" происходит
в результате ферментативного процесса, описываемого функцией
Михаэлиса-Ментен , Характер распределения и выведения феназепама
и его метаболитов из организма мышей определяет стадия ферментативного
окисления исходного препарата.
11. Бенздиаэепины (исходные препараты и их метаболиты) увеличивают
значения минимальных эффективных доз коразола по регистрируемым
показателям (ложные клонические, клонико-тонические судороги
и тоническая экстензия), но не влияют на общую картину судорожного
припадка и на дисперсию зависимости доза коразола - эффект.
- 41 -
12. Особенности судорожного действия коразола на фоне введения
1,4-бенздиазепинов, а также отсутствие определенной корреляции
между максимальным содержанием феназепама и его метаболитов в головном
мозге мышей и сопряженными величинами минимальных эффективных
доз коразола, вызывающих тоническую экстензию, указывает,
что это "физиологический антагонизм" двух агонистов, имеющих противоположные
эффекты и реализующих свое действие на различных рецепторах.
13. Разработаны аналитические методы извлечения из биологических
сред, очистки от коэкстрактивных вепрств, разделения метаболитов,
установления их структуры и количественного определения неизвестных
ранее или малоизученных 1,4-бенздиазепинов и родственных
соединений. Для создания математических моделей распределения и
3
выведения бенздиазепинов впервые синтезированы * С-феназепам, Н-
феназепам и -^Н-о-бром-г'-хлор-2-аминобензофенон. Используя принцип
метаболизма бензофенонов в организме экспериментальных животных
для дальнейших исследования оинтезировали 3 Н-5-бром-3-окси-2'-
хлор-2-аминобензофенон. Модифицировали и апробировали методы получения
канюлированных вывернутых мешочков из тонкой кишки для
анализа трансформации и транолокации 1,4-бенздиазепинов, методы
изучения внутрипеченочной циркуляции веществ на животных "донорах"
и "реципиентах" желчи, а также способы определения ферментативной
активности фракций гепатоцитов, катализирующих дегидрирование тетрагидро-1,4-бенздиазепинов
и окисление 5-бром-2-аминобензгидрола.
14. Применение методов и подходов, используемых при изучении
метаболизма и кинетики распределения соединений позволили провеоти
поиск противосудорожных и антиагрессивкых средств среди соединений,
превращающихся в живых организмах в производные 1,4-бенздиазепина
и способствует их рациональному использованию в медицине
и звероводотве.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Богатский A.B., Андронати CA., Головенко Н.Я. Транквилизаторы
(1,4-Бенздиазепины и родственные отруктуры). - Киев: Наук.думка,
1980. - 280 о.
2. Головенко Н.Я. Механизмы реакций метаболизма ксенобиотиков в
биологических мембранах. - Киев: Наук.думка, 1981. - 220 с.
3. Головенко Н.Я. Метаболизм ксенобиотиков кишечной микрофлорой.
Успехи современ.биологии, 1977, 84, 3(6), с.429-440.

- 42 -
4. Головснко Н.Я. УридиндифосФатглюкуронилтрачсфераза. Структура
и каталитические свойства. - Успехи совреиен.биологии. -
1980, 89, 3, с.360-376.
5. Головснко Н.Я. Молекулярное аспекты взаимодействия сывороточного
альбумина с лекарствами и его фармакологические последствия.
- Молекулярная биология, Киев: Наук.думка, 1978, в.20
с.22-32.
6. Богатский A.B., Головеико Н.Я. Роль стереохимических Факторов
в метаболизме лекарственных средств. - Зопросы стереохимии,
1977, в.6, с.3-16.
7. Богатский A.B., Головснко Н.Я. Значение метаболизма в создании
и изучении лекарственных средств. - Физиологически активные
вещества, 1977, в.У, с.3-9.
Р. Богатский A.B., Головенко Ii.Я., Андронати O.A. БиотрансФормапия
некоторых дигидро-1,4-беыздиазепинов. - В кн.: Рефераты
сообщений Ш ВсосODз.биохимического сьезда. Рига: Зинатне,
1974, т.1, с.244.
9. Богатский A.B., Андронати СЛ., Еилина З.И., Вихляев S.U.,
Юрченко А.Г., КЛЫГУЛЬ Т.А., Головенко_Н.Я. Поиск новых психотропных
средств среди производных адамантана. - В кн.: Химия
и применение углеводородов ряда адамантана и родственных соединений.
Тез.докладов Украинской респ.конференции, Киев, 197ч,
с.20-22.
10. Богатский A.B., Иванова Р.Ю., Андронати С.А., Жилина З.И.,
Вихляев Ю.И., Головенко Н.Я. Новые индолсодержщие производные
1,4-бенздиазепина. - В кн.: Химия и Фармакология индольных
соединений. Тез.докладов 1У Всесоюзного коллоквиума, Кишинев:
Птиинца, 1975, с. 49.
П. Головенко Н.Я., Богатский A.B., Андронати С.А. Метаболизм и
Фармакокинетика транквилизаторов, производных 1,4-бекздиазепина.
- 3 кн.: 3-й съезд Украинской ССР. Тезисы гокл. Зинница,
1977, с. 42-4J.
12. Богатский A.B., Головенко Н.Я., Андронати СЛ., Коломейченхо
Г.Ю., Зиньковский З.Г. 1,4-Бенэдиазепикы, их циклические гомологи
и аналоги. XXII. Строение, биотрансФормадая и динамика
распределения в организме некоторых I-замещенных 1,4-бенздиазепинсв.
Физиологически активные вещества, 1975, в.7, с.79-84.
13. Богатский A.B., Андронати CA., Вихляев В.И., Килина З.И.,
Клыгуль Т.А., Головенко Н.Я., Соболева С.Г., Старовойт H.A.
- 43 -
Синтез на основе 2-аМинобензо[енонов шести-, семи-, восьми-,
девятичленных и многочленных азотистых гетероциклов и изучение
их свойств. - В кн.: XI Менделеевский съезд по общей и
прикладной химии. Рефераты докладов и сообщений, !й 2, М., Наука,
1974, с.27-29.
14. Головенко Н.Я., Богатский А.З., Метешкин В.В., Зиньковский В.Г.,
Коломийченко Г.Ю. Функциональная особенность митохондриальной
и микросомальной редокс-цепей печени белых крыс при взаимодействии
ксенобиотиков. В кн.: Биохимия митохондрий: Тезисы докладов
Зсесосзн.симпозиума (Одесса, окт.1976 г), П., Наука,
1976, с43.
15. Головенко Н.Я. Ферментативное превращение 1,4-бенздиазепинов,
контролирующее их фармакологические свойства. - В TU.: Синтез
и механизм действия физиологически активных веществ: Тезисы
докл. Всесоюз.конф. (Одесса, окт.1976 г.), Одесса, 1976,
с. 154-155.
16. Головенко Н.Я., Коломийченко Г.Ю., Ногинская З.Б., Метешкин
СВ., Карасева Т.Л., Зиньковский В'.Г. Видовые различия в метаболизме
малых транквилизаторов. - Реферат.информация о законч.
научно-исследоват.работах в вузах УССР. Биология, Киев: Вища
школа, 1977, в.II, с.8.
17. Богатский A.B., Головенко Н.Я., Андронати O.A., Карасева Т.Л.
Ферментативное превращение 1,4-бенздиазепинов в организме экспериментальных
животных. - Реферат.информация о законч.научно-исследоват.работах
в вузах УССР. Биология, Киев: Вища школа,
1977, в.II, с.6-7.
18. Головенко Н.Я. Химическая природа промежуточных соединений в
монооксигеназном катализе. В кн.: Окисление физиологически активных
соединений в биологических мембранах. Тезисы докл.Всесоюзн.симп.
(Одесса, окт.1979 г.), Одесса, 1979, с.23.
19. Головенко Н.Я., Коломийченко Г.Ю., Метешкин Ю.В., Орлюк Е.И.,
Карасева Т.Л. Особенности ферментативных систем цитомембран,
метаболизирующих 1,4-бенздиазепины и родственные соединения. -
В кн.: 1У Воесоюзн.биохимический съезд. Тез.научн.сообщений,
Москва: Наука, 1979, с.90-91.
20. Головенко Н.Я., Зиньковский В.Г. Определение транквилизаторов
1,4-бенздиазепинового ряда и их метаболитов в биологических
средах. - Хим.-Фарм.жур., 1978, II' I, с.3-14.
21. Головенко Н.Я., Ногинская З.Б., Станкевич Е.А., Зиньковский
В.Г., Коломийченко ГЛ., Карасева 'Г.Л. Аналитические методы

_ ЦЦ -
исследований метаболизма транквилизаторов 1,4-бенздиаэепинового
ряда. В кн.: Синтез и механизм действия Физиологически активных
веществ. Тезисы докл.Зсесоюзн.конФ. (Одесса, окт.1976),
Одесса, 1976, с.156-157.
22. Богатский A.B., Андронати С.А., Старовойт И.А., Головенко Я.Я.,
Метешкин /О.В., Галатина А.И. Сочетание вольтамперометрии, тонкослойной
хроматографии и масс-спектрометрии при исследовании
метаболизма и фармакокинетики 1,4-бенздиазепинов. В кн.: Новости
полярографии 1975. Тезисы докл. У1 Зсесоюзн.совещания по
полярографии. Рига, Зинатне, 1975, с.165.
23. Богатский А.З,, Головенко Н.Я., Зиньковский З.Г., Карасева
Т.Л., Андронати CA. Разделение, идентификация и количественное
определение 1,4-бенздиазепинов в биологических средах. В
кн.: III Зсесоюзн.конф. по аналит.химии органических соединений.
Тезисы докл. (Москва, пай 1976 г.), Москва; Наука, 1976,
с.163-164.
24. Головенко Н.Я., Зиньковский З.Г., Карасева Т.Л., Богатский
A.B. Разделение метаболитов диазепама и нитразепама колоночной
хроматографией. - Фармация, 1977, № 4, с.39-41.
Л, Богатский A.B., Головенко Н.П., Гурман Э.Г., Метеикин Ю.З.
Ханюлированный вывернутый мешок из тонкой кишки - модель для
изучения всасывания ксенобиотиков. - Докл.АН УССР, сер.Б,
1978, * 8, с.745-750.
26. Головенко Н.Ч., Богатский А.З. Зсасывание и трансформация
транквилизаторов производных 1,4-бенздиазепина в организме
крыс. В кн.: X съезд Украинского физиологического общества.
Тезисы докл. (Одесса, сент.1977 г.), Киев: Наук.думка, 1977,
с.86-87.
27. Головенко Н.Я., Коломийченко Г.Й., Богатский A.B. Прямое измерение
окисления вторичных спиртов субклеточными Фракциями
гепатоцитов крыс. - Докл.АН СССР, 1977, 246, * I, с.223-225.
?н. ГолоЕенко Н.Я., Богатский A.B., Карасева Т.Л. Взаимоотношение
Ферментных систем печени экспериментальных животных, восстанавливающих,
ацетилирующих и дезацетилируюцих 1,4-бекздиазепины.
- Докл. АН УССР, сер.Б, 1976, * 5, с.447-456.
29. Чзрасева Т,Л., Головенко Н.Я., Яворский A.C., Галатина А.И.,
Орлюк Я.И. Метаболизм, фармакокинетика и субклеточное распределение
нитразепама. 3 кн.: Синтез и механизм действия физиологически
активных веществ. Тезисы до-.л.Зсесоюзн.конф. (Одесса,
окт.1976 г.), Одесса, 1976, с.157-159.
- 45 -
30. Богатский A.B., Головенко Н.Я., Карасева Т.Л. Распределение
нитразепама и его метаболитов в субклеточных фракциях некоторых
органов белых крыс. - Вопр.мед.хи.ши, 1977, № I,
с.92-96.
31. Головенко Н.Я., Богатский A.B., Орлюк Е.И., Курушин A.A.,
Карасева Т.Л. Метаболизм нитразепама в кишечнике белых крыс.
Бюл.экспер.биол., 1977, 84, с.53-56.
32. Головенко H.H., Богатский A.B., Карасева Т.Л. Зависимость
метаболизма нитразепама от способа его введения и вида экспериментальных
животных. - Укр.биохим.ж., 1978, 50, S« 3,
с.302-306.
33. Головенко Н.Я., Карасева Т.Л., Курушин A.A. Ацетилирование
7-аминопроизводного нитразепама субклеточными Фракциями некоторых
органов и кровью белых крыс. - Вопр.мед.химии, 1978,
щ б, с.839-845.
34. Головенко Н.Я., Карасева Т.Д. Выделение с желчью нитразепама
и его метаболитов у крыс. - Фармакол. и токсикол., 1978, № I,
с.17-19.
35. Головенко Н.Я., Карасева Т.Д., Жилина З.И. Поиск противосудорожных
средств среди соединений, метаболизирующихся в организме
животных до 1,4-бенздиазепинов. - Хим.-фарм.жур.,
1979, * 8, с.62-68.
36. Головенко Н.Я., Зиньковский З.Г. Анализ компонентов судорожного
действия коразола в условиях введения мышам сулазепама
и его метаболитов. - Бюл.экспер.биол., 1976, N' 9, с.1078-
1081.
37. Зиньковский В.Г., Головенко Н.Я., Жилина З.И., Гурман Э.Г.,
Котляр И.И. Метаболизм, распределение и противосудорожная
активность сулазепама и некоторых его метаболитов. - В кн.:
Синтез и механизм действия физиологически активных вещзств.
Тезисы докл.Всесоюзн.конф. (Одесса, окт.1976 г), Одесса,
1976, с.159-160.
ЗС Головенко Н.Я., Зиньковский В.Г., Жилина З.И. Анализ противосудорожной
активности сулазепама и его метаболитов в связи
с их трансформацией в организме экспериментальных животных.
- Физиологически активные вещества, 1979, в.II, с.60-64
39. Богатский A.B., Головенко Н.Я., Вихляев СИ., Андронати CA.
Вострова Л.Н., Станкевич Е.А. 1,4-Бенздиазепины, их циклические
гомологи и аналоги. ХХ1У. Сраннительная характеристика
активности и метаболизма дезоксихлордиазепоксида и его 'i-оки

- 46 -
си. - физиологически активные вещества, 1977, Я» 9, с.9-12.
40. Богатский A.B., Головенко Н.Я., Андронати С.А., Зиньковский
В.Г., Килина З.'Л. Соотношение свободных и конъюгированных
метаболитов диазепама у белых крыс и кроликов. - Фармакол. и
токсикол. Киев: Здоров'я, 1977, в.12, с.16-19.
41. Богатский А.З., Головенко Н.Я., Андронати С.А., Коломийченко
Г.И. Половые отличия метаболизма 1,4-бенздиазепинов. - Докл.
АН УССР, сер.Б, 1976, * 5, С.443-446.
42. Богатский А.З., Головешсо Н.Я., Андронати С.А., Коломийченко
Г.О., КетеяКив В.В. Противосудорожная активность, метаболизм
и фармакокинетика диазепама при гравитационной перегрузке
мышей. - Космич.биол. и авиакосмич.мед., 1978, 12, й 3,
с.75-78.
43. Богатский A.B., Головенко Н.Я., Андронати С.А., Коломийченко
Г.Ю., Зиньковский В.Г. Сопоставление электроноакцепторных и
липотропных свойств экзогенных субстратов с действием на них
микросомальных Ферментов печени белых крыс. - Докл.АН УССР,
сер.Б, 1975, 1С 8, С.740-747.
44. Головенко H.H., Богатский А.З., Коломийченко Г.В., Андронати
С.А. Зависимость между химическим строением, Фармакологической
активностью, метаболизмом и Фармакокинетикой некоторых
транквилизаторов 1,4-бенздиазепинового ряда. - Хим.-фарм.
жур., 1976, Й II, с.14-18.
45. Богатский А.З., Головенко Н.Я., Коломийченко Г.В., Андронати
CA., Метешкин Ю.З., Станкевич Е.А. Сопоставление Физико-химических
свойств 1,4-бенздиазепинов с их активностью, метаболизмом
и Фармакокинетикой. В кн.: Синтез и механизм действия
Физиологически активных веществ: Тезисы докл.Зсесоюзн.
конф. (Одесса, окт.1976), Одесса, 1976, с.152-154.
46. Богатский А.З., Головенко Н.Я., Андронати С.А. Коломийченко
Г.В., Еилина З.И. Участие редокс-цепи микросом печени крыс в
сужении кольца 1,4-бенздиазепинов. - Докл.АН СССР, 1977,
234, ff' I, с.215-218.
47. Головенко Н.Я., Богатский A.B., Коломийченко Г.С, Андронати
CA., Рудекко О.П. Дегидрирование тетрагидро-1,4-бенздиазепин-2-она
в организме белых крыс. - Докл.АН СССР, 1978, 238,
№ 4, с.977-980.
48. Головенко Н.Я., Коломийченко Г.В., Пономаренко В.В. Некоторые
особенности Ферментативного дегидрирования тетрагидро-
- 47 -
1,4-бенздиазепин-2-она. - Биохимия, 1979, 44, № II, с.2053-
2057.
49. Головенко Н.Я., Метешкин В.В. Взаимодей твие цитохрома Р-450
микросом печени белых крыс с 1,4-бенздиазепинами. - Докл.АН
УССР, сер.Б, 1978, К» 2, с. 154-157.
50. Головенко Н.Я., Метешкин В.В. Гидроксилирование 1,4-бенздиазе
пинов и родственных соединения в эндоплазматическом ретикулуме
белых крыс. - Докл.АН УССР, сер.Б, 1978, » 10, с.921-923.
51. Головенко Н.Я. Синтез аминоглюкуронидов в организме белых
крыс. Зависимость процесса от физико-химических свойств субстрата.
- Вопр.мед.химии, 1978, * 5, с.676-678.
52. Головенко Н.Я. Сопоставление электронных и липотропных
свойств субстратов с действием на них УДФ-глюкуронилтрансферазы,
катализирующей синтез аминоглюкуронидов. - В кн.: Третий
Украинский биохимический съезд. Тезисы стендовых сообщений.
Донецк, 1977, с.67-68.
53. Богатский А.В., Жилина З.И., Андронати С.А., Вихляев В.П.,
Клыгуль Т.А., Головенко Н.Я., Исаева СС 1,4-Бекэдиаэегшны,
их циклические гомологи и аналоги. XXIX. Адамантановые производные
1,2-дигидро-ЗН-1,4-бенздиазепин-2-онов. - Физиологически
активные вещества, 1979, в.II, с.55-59.
54. Якубовская Л.Н., Богатский А.В., Андронати С.А., Зиньковский
В.Г., Головенко Н.Я. Синтез феназепама-* 1 * С и его потенциальных
метаболитов. - Хим.-Фарм.жур., 1979, * 2, с.«5-89.
55. Середенин СБ., Головенко Н.Я., Бледнов В.А., Зиньковский
B. Г., Бадыштов Б.Н. Распределение ***С-феназепама в организме
белых крыс. - Хим.-фарм.жур., 1978, № 10, с.22-24.
56. Зиньковский В.Г., Богатский А.В., Головенко Н.Я., Середенин
СБ., Андронати С.А., Якубовская Л.Н. Кинетика выведения'
феназепама-*''с из организма белых крыс при однократном и
длительном введении препарата. - Бюл.экспер.биол., 1979, 87,
№ 6, с.561-563.
57. Головенко Н.Я., Зиньковский В.Г., Богатский А.В., Андронати
C. А., Середенин СБ., Якубовская Л.Н. Сравнительное изучение
выведения метаболитов феназепама при его однократном и много
кратном введении белым крысам. - Хим.-фарм.жур., 1979, Я» I,
с.21-26.
58. Головенко П.Я., Зиньковский В.Г. Метаболизм 2- С-феназепама
in vitro • - Фармакол. и токсикол., 1979, Bi б, с.597-600.

- ч8 -
59. Головекко Н.Я., Зиньковский З.Г. Метаболизм и распределение
в организме белых крыс производных 2-аминобензоФенона. - 3
кн.: Щ Всесоюзный симпозиум по целенаправленному изысканию
новых Физиологических веществ. Рига, 1979, с.37.
60. Зиньковский З.Г., :Парбатян П.А., Андронати С.А., Головенчо
Н.Я., Захаров 1С.С. Структурная избирательность ароматического
гидроксилирования Феназепама. - В кн.: Окисление физиологически
активных соединении в биологических мембранах. Тезисы
докл.Всесоюзн.симп. (Одесса, окт.1979 г), Одесса, 1979,с.28.
61. Головенко Н.Я., Орлюк 2.И. Влияние транквилизаторов 1,4-
бенздиазепинового ряда на активность гидроксилирующего комплекса
и глюкозо-6-фосфатазы гепатоцитов бе.лых крыс. - Вопр.
мед.химии, 1979, й 6, с.728-731.
62. Метешкип Ю.В., Головенко Н.Я., Андронати С.А., Яворский A.C.,
Якубовская Л.Н., Еилина З.И. Межвидовые различия в гидроксилировании
феназепама in vitro. - В кн.: Окисление Физиологически
активных соединений в биологических мембранах. Тезисы
докл.Всесоюзн.симп. (Одесса, окт.1979 г), Одесса, 1979,с.29.
63. Богатский A.B., Сердэк В.З., Назаров Е.И., Головенко Н.Я. Изменения
постсинаптических процессов возбуждения в присутствии
Феназепама. - Бюл.экспер.биол., 1979, 87, Es ч, с.317-319.
64. Богатский A.B., Зиньковский В.Г., Головенко Н.Я., Андронати
С.А., Яворский A.C., Парбатян П.А. Ферментативное превращение
Феназепама в организме экспериментальных животных. - Докл.АН
УССР, сер.Б, 1979, » I, с.943-946.
65. Богатский A.B., Головенко II.Я., Зиньковский З.Г. Знутрипеченочная
циркуляция -^С-Феназепама и его метаболитов в организме
белых крас. - Бюл.экспер.биол., 1980, & I, с.27-29.
66. Головенко Н.Я., Зиньковский З.Г., Середенин СБ., Андронати
СЛ., Якубовская Л.Н. Распределение ^с-феназепама и его метаболитов
в печени, головном мозге и плазме кро-и при однократном
и длительном введении препарата белым крысам. -
Фармакол.и токсикол., I960, В» 2, с. 144-147.
67. Головенко Н.Я., Зиньковский В.Г., Богатский A.B., Парбатян
П.А., Андронати CA. Метаболизм феназепама в организме крыс. -
Хим.-Фарм.жур., 1980, » 4, с.15-21.
CR. Мстешкин Ю.В., Головенко Н.Я., Богатский A.B., Зиньковский
В.Г., Яворский A.C., Середенин СБ. Гидроксилирование ароматических
ядер и гетерокольца молекулы Феназепама в эндоплазматическом
ретикулуме белых крыс и мыаеп. - Бюл.экспер.биол.,
- 49 -
1980, № 6. с.700-702.
69. Головенко Н.Я., Метешкин D.B., Якубовскаї. Л.Н. Исследование
каталитических свойств монооксигеназ, окисляющих 14 С-феназепам.
- Вопр.мед.химии, 1980, » 5, с.637-640.
70. Головенко Н.Я., Зиньковский В.Г., Середенин СБ. Ферментативная
модель Фармакокинетики феназепама в организме мышей. -
Хим.-Фарм.жур., 1980, № 12, СІ4-ІЄ.
71. Golovenko N., Aadronati S., Sinkovsky V., Bogatsky A. Meta-
14-
boliem of
C-pnenaeepam In rat and mice.- In: International
Conference on xenobiochemistry (biociiemistry of metaboliem
and effect of xenoblotios). Bratislava, l98o,p."l36.
БР 04243. Подл, к печати 12.03.81 г. Формат 60 х 84 1/16.
Об'ем 2 п. п. Заказ № 3895. Тираж 150 экз.
Гортилография Одесского обплолиграфиэдата, цех Ыв 3,
Ленина, 49.