Måleprogram på Rigshospitalet - Kildesamarbejdet

Metode til undersøgelse for resistente bakterier i spildevand
Nedenstående metode er beskrevet ud fra samtaler med laboratoriepersonale fra Infektionshygiejnisk
Enhed på Rigshospitalet:
Der blev over to gange tre dage indsamlet 200 ml spildevand. 100 ml spildevand blev
filtreret gennem et 0,45 µm milliporefilter. Filteret blev resuspenderet i 10 ml sterilt
vand.
Der blev udført en pladespredning/screening for det totale kimtal for at estimere en passende
fortyndingsrække.
Fortyndingsrække: 1:1.000; 1:10.000; 1:100.000.
Spildevandet blev derefter screenet for henholdsvis E. coli, enterokokker og stafylokokker
ved at udså 100 µl suspension på henholdsvis lactose-, blod- og saltplader (7,5%)
samt ved opformering i serumbouillon. Ved vækst i serumbouillon udsås der 100 µl på
blodplade.
Lactose- og blodpladerne aflæses efter henholdsvis 24 og 72 timer, saltpladerne aflæses
efter en uge. Kolonier, der mistænkes for at være E. coli, enterokokker og stafylokokker,
isoleres og identificeres.
Kolonierne rendyrkes herefter og screenes for resistens ved hjælp af tablet-diskmetoden.
Screeningen foretages ved, at tabletter lægges på pladerne, og der måles herefter
diameter på zonen uden vækst rundt om tabletterne, jf. billedet nedenfor.
54141_Rapport 38 DHI