11520009 Resistens Final Report - Spildevandsinfo.dk
11520009 Resistens Final Report - Spildevandsinfo.dk
11520009 Resistens Final Report - Spildevandsinfo.dk
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
3.2.1 Tabletmetoden<br />
Tabletmetoden bruges til bestemmelse af resistens over for forskellige antibiotika.<br />
Tabletmetoden er baseret på diffusion af antibiotika i agar.<br />
Resultaterne af tabletmetoden er for hvert antibiotikum enten følsom, intermediær eller<br />
resistent. Hvis resultatet er følsom, betyder det, at bakterien ikke har nogen påviste<br />
resistensmekanismer mod det pågældende antibiotikum. I medicinsk forstand betyder<br />
følsom, at antibiotikummet forventes at have virkning ved standarddosis. Hvis resultatet<br />
er intermediær, betyder det, at bakterien har nedsat følsomhed over for det pågældende<br />
antibiotikum. Medicinsk kan dette betyde, at stoffet evt. kræver en højere dosering, eller<br />
at stoffet opkoncentreres på infektionsstedet. Hvis resultatet er resistent, betyder det, at<br />
bakterien har en til flere resistensmekanismer, som gør, at bakterien ikke påvirkes af det<br />
pågældende antibiotikum. Dette bevirker, at en infektion med denne bakterie ikke vil<br />
kunne behandles med det pågældende antibiotikum (Dansk Selskab for Klinisk<br />
Mikrobiologi, 2004).<br />
3.2.2 E-Test (Epsilometer Test)<br />
E-test bruges til at fastlægge MICkoncentrationen<br />
for bakterier. Testen består af<br />
en plastikstrip påført antibiotika i stigende<br />
koncentration ned langs længden af strippen.<br />
Strippen placeres på en agarplade og inkuberes.<br />
Der opstår en hæmningszone omkring strippen,<br />
som vist på Figur 3-5. MIC (Minimum<br />
Inhibition Concentration) værdien aflæses<br />
direkte på strippen og angiver den laveste<br />
antibiotika koncentration, der skal til for at<br />
hæmme bakteriernes vækst (Dansk Selskab for<br />
Klinisk Mikrobiologi, 2004).<br />
3.2.3 MALDI-TOF-MS<br />
MALDI-TOF-MS er i dette studie brugt til artsbestemmelse af bakterier baseret på<br />
proteiner. Det er en koblet analysemetode bestående af tre dele: MALDI (Matrix<br />
Assisted Laser Desorption Ionization), TOF (Time of Flight) og MS (Mass<br />
Spectrometry). Proteiner fra de bakterier, der ønskes artsbestemt, ekstraheres og<br />
indlejres i en matrix. Matrixen beskydes med en laserstråle, hvis energi bevirker, at<br />
proteinmolekyler ioniseres. Efterfølgende accelereres proteinmolekylerne i et elektrisk<br />
felt. De ioniserede molekylers forskellige masser gør, at forskellige molekyler får<br />
forskellige hastigheder, som registreres og danner et spektrum. Spektret er specifikt for<br />
den pågældende mikroorganisme, som identificeres ved sammenligning med kendte<br />
referencespektre i en database (OUH, 2009).<br />
3.2.4 Ribotypning<br />
Ribotypning er en metode, der anvendes til at identificere bakteriestammer. Metoden<br />
virker ved, at en bakteriestamme isoleres, og der ekstraheres genomisk DNA. DNA’et<br />
kappes med et restriktionsenzym og separeres ved gelelektroforese. 16S og 23S rRNA<br />
bruges som probe. Gelen fotograferes og analyseres digitalt på en computer, hvor<br />
billedet sammenlignes med tidligere undersøgte bakterier i en database. Ribotypen er<br />
således en slags fingeraftryk, der fortæller om DNA’et som koder for rRNA.<br />
7<br />
Figur 3-5 Eksempel på agarplade med Etest<br />
(kilde: Wikipedia)
Change language