Øvelsesvejledninger til laboratoriekursus i Kemi A - VUC Aarhus

VUC Aarhus. Kemi A. Laboratoriekursus.
Dette udnytter man ved målinger i et spektrofotometer, hvor man sender lys med en bestemt
bølgelængde igennem en beholder med en opløsning af et stof, og på den anden side af beholderen
måler, hvor meget af dette lys, der kommer igennem.
Hvilken bølgelængde, det anvendte lys skal have, kan man faktisk få et fingerpeg om ved at
betragte sin opløsning med det blotte øje. Hvis opløsningen har en farve, lader den noget lys i det
synlige spektrum passere, mens den absorberer lys med andre bølgelængder. Den "farve", der
absorberes vil groft sagt være den komplementære farve til den man kan se. Man kan bestemme det
præcise absorptionsspektrum for et stof ved at måle hvor meget lys, stoffet absorberer ved de
enkelte bølgelængder i bølgelængdeintervallet. Dermed kan man finde frem til den eller de
bølgelængder, stoffet absorberer mest effektivt.
Absorbansen bestemmes ud fra transmittansen, der er den brøkdel, som det udsendte lys´ intensitet
udgør af det indsendte, I/I o . Da dette er et tal mellem 0 og 1, og fordi transmittansen er omvendt
proportional med opløsningens koncentration, beregnes størrelsen -log(I/I o ) som kaldes
absorbansen. Dermed bliver absorbansen ligefrem proportional med koncentration; dette er
essensen af Lambert-Beers lov:
A = ε · c · d
hvor d er kuvettens brede,dvs. lysets vejlængde igennem opløsningen. ε er
ekstinktionskoefficienten, som er en konstant, der afhænger af bølgelængden og stoffet.
Fructose absorberer ikke i bølgelændeområdet fra 400nm til 700nm, hvor vi kan måle. Derfor
tilsætter vi i forsøget Seliwanoff`s reagens, der sammen med fructose danner et farvet kompleks. Vi
kan så måle absorbansen af det farvede kompleks. I praksis, måler spektrofotmeteret absorbansen af
prøven i forhold til en opløsning af det rene opløsningsmiddel tilsat reagensen.
Apparatur:
vandbad ved 60 o C (termostatbad)
vandbad ved 90 o C (bunsenbrænder og gryde)
reagensglas, 12 stk.
25 mL måleglas
100 mL bægerglas, eller et stort reagensglas
1000 μL og 250 μL transferpipette
spektrofotometer og to kuvetter
stativ
5 mL fuldpipette
Kemikalier:
0,5 M glucose-opløsning
0,2 M fructose-opløsning
1,0 M magnesiumsulfat-opløsning
Tris buffer opløsning, med pH=8.0
Sweetzyme T (immobiliseret glucose-isomerase)
Seliwanoff's reagens:
0,2 g resorcinol (=1,3-dihydroxybenzen) opløses i 100 mL
vand og tilsættes 60 mL konc. HCl. Der fyldes op til 200 mL
29