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III Material und Methoden 13
3.2 Probenentnahme
3.2.1 Serumgewinnung
Bei allen Tierexperimenten, bei denen die Ratten mit 17ß Östradiol behandelt wurden,
sowie den dazugehörigen Kontrolltieren, wird unter Äthernarkose durch Herzpunktion
mit einer Einmalinjektionskanüle Größe 1 (9x40 mm, Art. No. 04657519, B. Braun
Melsungen AG, Melsungen) und einer Serum- Monovette (7.5 ml, S- Monovette Z,
No.01.1601; Sarstedt AG &Co., Nürmbrecht) mit Multiadapter (No./Ref. 14.1205
Sarstedt AG &Co., Nürmbrecht) ca. 5 ml Blut entnommen und 2 Stunden bei – 4° C im
Kühlschrank gelagert. Danach werden die Röhrchen bei 4° C 20 Minuten lang bei 3000
rpm in einer Kühlzentrifuge (Minifuge RF Sepatec , Heraeus, Hanau) zentrifugiert. Das
Serum wird abpippetiert und bis zur 17ß Östradiolbestimmung in Eppendorfgefäßen bei
–20° C eingefroren.
3.2.2 Gewebeentnahme
Nach der Autopsie wird der gesamte Uterus, der aus einem rechten und linken
Uterushorn besteht, entnommen und von umgebenden Fettgewebe frei präpariert.
Anschließend wird der Uterus an der anatomischen Grenze von der Vagina abgetrennt.
Eines der beiden Uterushörner wird zur Bestimmung des Uterusfeuchtgewichts nach
dem Ausstreichen von Sekret gewogen und danach halbiert. Die eine Hälfte dieses
Uterushorns wird für die histologische Aufarbeitung über Nacht in 3,7% PBS
(Phosphate buffered Saline Dulbecco’s, Life Technologies, Ltd. Paisley Scotland
#14190-94,) gepuffertem Formaldehyd (Merck KGaA, Darmstadt) fixiert. Die andere
Hälfte wird in Kunststoffförmchen der Firma Plano W. Plannet GmbH, Wetzlar mit
Tissue Tek VIP TM Processing/Embedding Medium (Sakura Finetec Inc., Torrance
USA) auf Trockeneis fixiert und bei -80° C in der Tiefkühltruhe gelagert.
Das andere der beiden Uterushörner wird in PBS gespült, in kleine Stücke geschnitten
und sofort in flüssigem Stickstoff schockgefroren. Bei dieser Vorgehensweise wird
streng auf sterile Arbeitsweise unter Verwendung von sterilen Einmalhandschuhen