Dokument 1.pdf - RWTH Aachen University

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

III Material und Methoden 25 3.3.4.1 Immunhistochemische Auswertung Die Auswertung der immunhistochemischen Präparate für c-fos und cdc2 erfolgt semiquantitativ. Die Gewebeschnitte werden am Lichtmikroskop (Axiophot2, Zeiss, Jena) durchgesehen und die Intensität der Immunfärbung des Epithels wird in vier Kategorien (0,+,++,+++) unterteilt. Null bedeutet keine Färbung, + bedeutet eine leichte Färbung, ++ bedeuten eine deutliche Färbung und +++ bedeuten eine starke Färbung. Die Beurteilung kann auch zwischen zwei Kategorien vergeben werden, z.B. ++-+++. Die Präparate, die mit dem Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) Antikörper angefärbt sind, werden am Lichtmikroskop (Axiophot2, Zeiss, Jena) mit dem Bildanalyseprogramm KS 400 Imaging System, Release 3.0, Carl Zeiss Vision GmbH, Division Bildanalyse quantitativ ausgewertet. Bei 40facher Vergößerung (Ph 2 Plan - Neofluar 40x/0,75, Zeiss, Jena) wird auf jedem Uteruspräparat die Gesamtlänge des luminalen Endometriumepithels und die Gesamtlänge der Drüsenepithels an der zum Lumen gewandten Epithelgrenze gemessen. Weiterhin werden auf jedem Präparat bei 40fachem Objektiv (Ph 2 Plan - Neofluar 40x/0,75, Zeiss, Jena) die braun gefärbten Zellen des luminalen Endometriumepithels und die braun gefärbten Zellen des Drüsenepithels durch Markieren mit der Maus gezählt. Das Programm berechnet einen Proliferationsindex für das luminale Endometriumepithels (kurz Lumen genannt) und einen Proliferationsindex für das Drüseneptihel (kurz Drüsen genannt). Dieser Index gibt im Mittel die Anzahl der braun gefärbten Zellen bezogen auf 1 mm Epithellänge (Endometrium, Drüsen) an und besitzt die Einheit [Zellen/mm Epithel]. Eine fotografische <strong>Dokument</strong>ation von ausgewählten Schnitten wird am Lichtmikroskop (Axiophot2, Zeiss, Jena) mit der Software Axiovision (Zeiss, Jena) vorgenommen und auf Fotopapier ausgedruckt.
III Material und Methoden 26 3.3.5 Molekularbiologische Methoden Für die Aufarbeitung der RNA wurden folgende Vorsichtsmaßnahmen getroffen, um eine Kontamination der Proben mit RNA- abbauenden Enzymen zu vermeiden und somit eine Degradation der RNA zu verhindern: 1. Es wurde immer mit Einmalhandschuhen gearbeitet. 2. Alle Glasgefäße und Mörser mit Kolben wurden im Autoklaven sterilisiert. 3. Alle Lösungen wurden möglichst mit 0,1% Diethylpyrokarbonat (DEPC) behandelt und autoklaviert. 4. Tris-, bzw. EDTAhaltige Puffer wurden mit DEPC- behandeltem Wasser angesetzt und anschließend autoklaviert. 5. Es wurden nur sterile Einmalartikel wie Eppendorfgefäße, Falcon- Tubes und Pipettenspitzen verwendet. 6. Arbeitsmaterialien wie Spatel wurden durch kurzes Spülen in Chloroform von RNAsen dekontaminiert. 3.3.5.1 Gesamt RNA- Isolierung mit Trizol Die Gesamt- RNA aus den Uterushomogenaten wurde mit Trizol Reagent (Life Technologies Inc. Gibco BRL, Maryland USA #15596-018), einer gebrauchsfertigen monophasischen Lösung aus Phenol und Guanidiniumisothiocyanat nach der Methode von Chomczynski und Sacchi (1987) vorgenommen. Dabei bewahrt Trizol- Reagenz während der Gewebehomogenisierung die Integrität der RNA, während Zellen zerstört und Zellkomponenten aufgelöst werden. Ungefähr 100 mg Gewebe ergibt 100 µg Gesamt- RNA. Zuerst wird das gepoolte tiefgefrorene Uterusgewebe (Uterushörner, -80°C) einer Versuchsgruppe (500-600 mg) in bei –20°C vorgekühlten Mörsern unter Zugabe von flüssigem Stickstoff homogenisiert. Dieses Gewebehomogenat wird mit 5-6 ml Trizol- Reagenz versetzt und kann unter dem Abzug langsam auftauen. Es wird pro 50-100 mg Gewebe 1 ml Trizol verwandt. Nachdem das Gewebe im Mörser aufgetaut ist, erfolgt das Scheren mit einer 1er Kanüle bis keine Schlieren mehr vorhanden sind. Anschließend wird das Trizolhomogenat à 5, bzw. 6 ml in Falcon-Tubes (Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, USA, #2059) portioniert und in flüssigem Stickstoff eingefroren und wieder aufgetaut. Dieser Einfrier- und Auftauvorgang wird 2- bis 3mal wiederholt.
Seite 1 und 2: Selektive Östrogen- Rezeptor Modul
Seite 3 und 4: Inhaltsverzeichnis I 1 EINLEITUNG 1
Seite 5 und 6: Inhaltsverzeichnis III 5.2.4 AUSWIR
Seite 7 und 8: I Einleitung 2 estrogen receptor mo
Seite 9 und 10: I Einleitung 4 Von besonderer Bedeu
Seite 11 und 12: I Einleitung 6 östrogenantagonisti
Seite 13 und 14: II Fragestellung 8 2 Fragestellung
Seite 15 und 16: III Material und Methoden 10 17ß
Seite 17 und 18: III Material und Methoden 12 (a) (b
Seite 19 und 20: III Material und Methoden 14 geacht
Seite 21 und 22: III Material und Methoden 16 Tier w
Seite 23 und 24: III Material und Methoden 18 3.3.3.
Seite 25 und 26: III Material und Methoden 20 Anschl
Seite 27 und 28: III Material und Methoden 22 ein Ut
Seite 29: III Material und Methoden 24 Der cd
Seite 33 und 34: III Material und Methoden 28 3.3.5.
Seite 35 und 36: III Material und Methoden 30 In ana
Seite 37 und 38: III Material und Methoden 32 denatu
Seite 39 und 40: III Material und Methoden 34 Alle n
Seite 41 und 42: III Material und Methoden 36 Jeder
Seite 43 und 44: III Material und Methoden 38 3.4 St
Seite 45 und 46: IV Ergebnisse 40 rückgängig und e
Seite 47 und 48: IV Ergebnisse 42 Bei einem Vergleic
Seite 49 und 50: IV Ergebnisse 44 4.2 Untersuchung d
Seite 51 und 52: IV Ergebnisse 46 a) b) Epithelhöhe
Seite 53 und 54: IV Ergebnisse 48 a) b) Abb. 14: His
Seite 55 und 56: IV Ergebnisse 50 4.2.2 Ergebnisse d
Seite 57 und 58: IV Ergebnisse 52 a) b) Abb. 15: His
Seite 59 und 60: IV Ergebnisse 54 a) b) 80 70 60 50
Seite 61 und 62: IV Ergebnisse 56 1200 1000 800 600
Seite 63 und 64: IV Ergebnisse 58 v-fos mRNA 1A mRNA
Seite 65 und 66: IV Ergebnisse 60 v-fos mRNA 1A mRNA
Seite 67 und 68: IV Ergebnisse 62 c-jun mRNA 1A mRNA
Seite 69 und 70: IV Ergebnisse 64 4.4.3.1 Ergebnisse
Seite 71 und 72: IV Ergebnisse 66 Das Expressionsver
Seite 73 und 74: IV Ergebnisse 68 Tabelle 8: Densito
Seite 75 und 76: IV Ergebnisse 70 a) b) Abb. 28: Imm
Seite 77 und 78: IV Ergebnisse 72 a) b) Abb. 29: Imm
Seite 79 und 80: IV Ergebnisse 74 4.5.1.2 Ergebnisse
Seite 81 und 82:
IV Ergebnisse 76 beschreibt die sta
Seite 83 und 84:
IV Ergebnisse 78 a) b) Abb. 30: Imm
Seite 85 und 86:
Seite 87 und 88:
IV Ergebnisse 82 4.5.2.2 Ergebnisse
Seite 89 und 90:
Seite 91 und 92:
Seite 93 und 94:
IV Ergebnisse 88 4.5.3.2 Ergebnisse
Seite 95 und 96:
IV Ergebnisse 90 5 Diskussion 5.1 D
Seite 97 und 98:
V Diskussion 91 1 und 10 µg/kg Kö
Seite 99 und 100:
V Diskussion 93 Eine Reihe von Arbe
Seite 101 und 102:
V Diskussion 95 5.2 Diskussion der
Seite 103 und 104:
V Diskussion 97 die Interaktion des
Seite 105 und 106:
V Diskussion 99 al. (1991) konnten
Seite 107 und 108:
V Diskussion 101 In Untersuchungen
Seite 109 und 110:
V Diskussion 103 5.2.3 Auswirkung d
Seite 111 und 112:
V Diskussion 105 Gegensatz zu der b
Seite 113 und 114:
V Diskussion 107 (siehe Tabelle 9).
Seite 115 und 116:
V Diskussion 109 Stunden p.i. korre
Seite 117 und 118:
V Diskussion 111 zusammen mit dem f
Seite 119 und 120:
V Diskussion 113 5.2.5.2 Nach der M
Seite 121 und 122:
V Diskussion 115 Cooke et al. (1997
Seite 123 und 124:
V Diskussion 117 5.2.6.2 Nach der M
Seite 125 und 126:
V Diskussion 119 Prävention des Br
Seite 127 und 128:
V Diskussion 121 Neben diesen klass
Seite 129 und 130:
IV Zusammenfassung 123 6 Zusammenfa
Seite 131 und 132:
IV Zusammenfassung 125 Auch der cdc
Seite 133 und 134:
VII Literaturverzeichnis 127 Buchan
Seite 135 und 136:
VII Literaturverzeichnis 129 Geum D
Seite 137 und 138:
VII Literaturverzeichnis 131 Kraus
Seite 139 und 140:
VII Literaturverzeichnis 133 Quarmb
Seite 141 und 142:
VII Literaturverzeichnis 135 Watts
Seite 143:
Lebenslauf: Persönliche Daten: Nam
Alle anzeigen

Dokument 1.pdf - RWTH Aachen University

Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.

Template löschen?

Als Template speichern?