GELELEKTROPHORESE VON PROTEINEN
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<strong>GELELEKTROPHORESE</strong> 2008<br />
8. Setzen Sie die Feststellschrauben am Castingbehälter so ein, dass das kurze Ende nach<br />
oben weist. Zurren Sie die Gelsandwichhalterungen fest, in dem Sie die Feststellschrauben<br />
180° verdrehen, sodass das kurze Ende nach unten weist.<br />
9. Stellen Sie nun die Lösungen nach dem in Tabelle 1 aufgelisteten Pipettierschema her.<br />
Zuerst ist das Trenngel herzustellen.<br />
ACHTUNG: HANDSCHUHE TRAGEN ! ACRYLAMID IST NEUROTOXISCH!<br />
Schritte Trenngel Sammelgel<br />
1 Acrylamid-/Bisacrylamidmonomerlösung<br />
(30% T, 2,7% C) 1<br />
6,65 ml 0,67 ml<br />
2 Trenngelpuffer (1,5M Tris-Cl, pH=8,8) 5,00 ml -<br />
3 Sammelgelpuffer (0,5M Tris-Cl, pH=6,8) - 1,25 ml<br />
4 10% SDS (Sodiumdodecylsulfat) 0,20 ml 50 µl<br />
5 deionisiertes Wasser 8,05 ml 3,0 ml<br />
6 Lösung im Ultraschallbad 5 min entgasen 4<br />
7 10%ige Ammoniumpersulfat-Lösung 2 100 µl 25 µl<br />
8 TEMED 3 6,65 µl 2,5 µl<br />
Endvolumen 20 ml 5ml<br />
Lösung im Ultraschallbad 1 min entgasen 4<br />
Tab. 1: Pipettierschema für Sammelgel und Trenngel.<br />
1 g(<br />
Acrylamid + Bisacrylamid)<br />
g(<br />
Bisacrylamid)<br />
% T = . 100 % C =<br />
. 100<br />
100 ml<br />
g(<br />
Acrylamid + Bisacrylamid)<br />
2 Die Ammoniumpersulfat-Lösung dient als Radikalstarter für die radikalische Polymerisation.<br />
Die Lösung muss frisch hergestellt werden: Dazu werden die im Eppendorfgefäß eingewogenen<br />
20 mg in 200 µl Wasser gelöst.<br />
3 TEMED dient als Katalysator.<br />
4<br />
Die Lösungen für das Trenngel und das Sammelgel sind zu entgasen, da Sauerstoff die<br />
Polymerisation stört.<br />
10. Die nach dem Pipettierschema hergestellte Trenngellösung wird mit einer Einwegpipette<br />
etwa 6 cm hoch in die Sandwiches gefüllt. Die Lösung wird am besten von einem Eck des<br />
Gelsandwiches ausgehend eingefüllt.<br />
ACHTUNG:<br />
Keine Luftblasen einschließen! Zügig arbeiten, da die Lösung relativ rasch<br />
polymerisiert!<br />
Beide Sandwiches werden mit je 100 µl wassergesättigtem 1-Butanol überschichtet, damit<br />
sich kein Meniskus bildet. Die Polymerisation dauert ca. 30 Minuten. Durch leichtes<br />
Neigen der Gelgießkammer kann man feststellen, ob das Gel auspolymerisiert ist. Die<br />
® Martina Marchetti, TU Wien, Chemische Technologien und Analytik
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