Strahlenschutzforschung - DORIS - Bundesamt für Strahlenschutz

TB 03
ändert. Deshalb fokussieren sich die nächsten Arbeiten auf diese Faktoren und werden mit einigen Faktoren
des intrinsischen Apoptoseweges oder antiapoptotischen Komponenten verglichen. Ein wichtiges Auswahlkriterium
war hierbei ein effizienter knockdown.
Die drei untersuchten Zelllinien zeigen ein weitgehend gleiches Apoptoseverhalten nach Bestrahlung. Deshalb
wurden weiterführende Experimente nur mit einer Zelllinie durchgeführt. Da sich Hela-Zellen sehr gut
transfizieren lassen, die Qualität des knockdowns meist sehr gut ist und sie ein reproduzierbares Apoptoseverhalten
zeigen, wird diese Zelllinie weiter verwendet.
Nach der Auswahl einer Dosis von 10 μM Etoposid, die bei der Bestimmung der �H2AX-Aggregaten in Hela-Zellen
einer Dosis von 10 Gy entspricht, kann ebenfalls gezeigt werden, dass die rezeptorvermittelte Apoptose
nach Bestrahlung verändert ist, wenn auch in geringerem Maße, was möglicherweise durch den fehlenden
ROS vermittelten Anteil an der Apoptose erklärt werden kann.
5.2 ANALYSE DER APOPTOSE IN LYMPHOBLASTOIDEN ZELLLINIEN
Die 23 immortalisierten Zelllinien der KORA- und LUCY-Kohorte wurden nach der Bestimmung ihrer Apoptoseinduktion
nach Bestrahlung in hoch, mittel und niedrig eingestuft und miteinander verglichen (s. Programmreport
2008). Eine Untersuchung der Apoptose nach Etoposidbehandlung findet derzeit noch statt.
20 abgeleitete KORA- und LUCY-Zelllinien wurden im Proteinarray analysiert (s. Programmreport 2008).
6. GEPLANTE WEITERARBEIT
Die Bedeutung der ausgewählten Gene für die strahleninduzierte Apoptose wurde bereits bestimmt. Um die
Bedeutung von ROS für die strahleninduzierte Apoptose zu untersuchen wurde die Bedeutung dieser Faktoren
für die Apoptoseinduktion auch nach Etoposidbehandlung (ROS unabhängige DNA-Doppelstrangbruchinduktion)
untersucht. Nun soll in den nächsten Arbeiten zusätzlich die Bedeutung H 2 O 2 induzierter Apoptose
analysiert werden. Mit diesen verschiedenen Versuchsansätzen soll der mechanistische Zusammenhang zwischen
ROS und Apoptose aufgeklärt werden und eine Aussage darüber getroffen werden, welche Faktoren
ROS abhängig zu Apoptose führt.
Diese Erkenntnisse über ROS vermittelte Aktivierung der verschiedenen Apoptosemechanismen sollen in
den ausgewählten lymphoblastoiden Zelllinien des Patientenmaterials ebenfalls angewandt werden. Dazu
soll sowohl der nur DNA schadensvermittelte Anteil (durch Etoposidbehandlung) als auch der ROS aktivierte
Anteil an der Apoptose beschrieben werden. Damit soll eine Aussage getroffen werden, welche ROS aktivierten
Mechanismen zum unterschiedlichen Apoptoseverhalten nach Bestrahlung von Zelllinien unterschiedlicher
Individuen beitragen.
178 Statusberichte TB 03: Strahlenbiologie - Wirkung von ionisierender Strahlung, Strahlenempfindlichkeit