TC-PRAKTIKUM - TCI @ Uni-Hannover.de - Leibniz Universität ...

36ENZYMEIn diesem Versuch soll die Kinetik einer enantioselektiven enzymatischen Hydrolyseeines D,L-Aminosäureesters (D, L- Phenylalaninmethylester) zu der entsprechendenL-Amino-säure und dem D-Ester untersucht werden. Dazu wird ein natives und einimmobilisiertes Enzym verwendet (α-Chymotrypsin). Im ersten Teil sollen diekinetischen Parameter vmax und KM für das native Enzym ermittelt werden; imzweiten Teil wird die Reaktionsgeschwindigkeit für das immobilsierte Enzymuntersucht.1. THEORETISCHE GRUNDLAGEN- Aminosäuren, Proteine, Enzyme- Enzymkinetik- Hemmtypen (kompetitive-, nicht kompetitive-, unkompetitive-, Substrat-,Diffusions-Hemmung)- Allosterische Effekte, Kooperativität- Enzymimmobilisierung- Enzyme in der TechnikLiteratur: - Karlson, Biochemie, Kurzes Lehrbuch der Biochemie, 12. völlig neubearbeitete Auflage, Georg Thieme Verlag, Stuttgart,(New York) 1984- Lubert Stryer, Biochemie, Spektrum Chemie, 4. Auflage 1987- Hartmeier, Immobilisierte Biokatalysatoren, SpringerVerlag, Berlin, 19862. VERSUCHSDURCHFÜHRUNGZunächst wird die Reaktortemperatur über das Wasserbad eingestellt!1. Herstellen der Substratlösung durch Lösen des Substrats in 250 ml Wasser(1g/250 ml entspr. 4g/L).Herstellen der Verdünnungslösungen und mit der Stammlösung im Wasserbadvortemperieren.2. Erst den Titrator, dann den Computer einschalten.3. Kalibration der pH-Elektrode:pH-Elektrode öffnen (Markierungen übereinander)