SONDERDRUCK - Thermo Scientific

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

Aus der Praxis ken bislang keine anerkannte Alternative zum Autoklavieren darstellt, war es das Ziel dieser Validierung, Parameter zu definieren, die die Sporen von Geobacillus stearothermophilus mittels Formaldehydbegasung aller Filter in der laufenden Sicherheitswerkbank sicher inaktivieren. Material und Methoden Nachweisführung, Testverfahren und Testverlauf Für die Nachweisführung eines wirksamen Sterilisationserfolgs von Bioindikatoren nach DIN ISO 11138-5:2006 mittels Formaldehydbegasungen wurde eine Sicherheitswerkbank der Klasse 2 in verstärkter Ausführung (~ 3-Filter-System) herangezogen (Abbildung 2 und 3A). Technische Daten der Sicherheitswerkbank Hersteller: <strong>Thermo</strong> Fisher <strong>Scientific</strong>, Marke Heraeus Modellreihe HERAsafe, Typ KSP 12, Länge der Arbeitsöffnung 1,2 m; Höhe der Arbeitsöffnung 0,2 m; Nominaler Umluft-Volumenstrom ~823 m 3 /h; reduzierter Luftstrom bei geschlossener Frontscheibe ~ 240–360 m 3 /h; Innenraum-Volumen / Gesamt-Dampfraum der Sicherheitswerkbank 1,85 m 3 ; Filtermaterial auf Basis von Borosilikatglasfasern. Sterilisationsverfahren Unabhängig vom Verfahren wurde die technische Lüftung der Sicherheitswerkbank während des gesamten Begasungszeitraums bei reduzierter Stufe betrieben, Öffnungen geschlossen bzw. die Umgebung durch einen Aktivkohlefilter vom Abluftsystem getrennt. Dies gewährleistet einen Druckausgleich beim Erwärmen und einen minimalen Abluftstrom, wodurch das Abluftfilter der Werkbank vom Formaldehyd gleichmäßiger durchströmt wird. Desinfektionsmittel-Verdampfer Der hier verwendete Desinfektionsmittel- Verdampfer besteht aus einem Verdampferteil für Formalin und einem davon abhängig gesteuerten Verdampferteil für Ammoniak-Wasser. Er wurde so konstruiert, dass mehrheitlich nur Heißdampf den Luftströmungen des Gerätes beigemischt wird. Mittels Einschalt-Verzug wird zunächst das Verdampfen des Formalins angesteuert. Nach ca. 15–20 Minuten schaltet der Trockengehschutz des Formalinverdampfers auf ein Zeitglied, das abhängig von der einzustellenden Einwirkzeit, nach deren Ablauf das Verdampfen des Ammoniak- Wassers ansteuert. Ist dessen Verdampfung abgeschlossen, schaltet der zugehörige Trockengehschutz das System aus. Formaldehydbegasung Verfahren A In Anlehnung an das Standard-Raumbegasungsverfahren gemäß RKI-Liste [1] bzw. TRGS522 wurden 60 ml einer Formaldehyd-Lösung (17,5 %) in einer Sterilwerkbank verdampft und nach Abbildung 3: Segmentierte H14-Hauptfilterstufe im Arbeitsraum. Seitenansicht (A) einer mikrobiologischen Sicherheitswerkbank der Klasse 2 in verstärkter Ausführung. Teilansicht (B) mit einem herausgenommenem Segment des H14-Hauptfilters. 284 Hyg Med 2009; 34 [7/8] © mhp-Verlag GmbH 12-stündiger Einwirkzeit mit 20 ml Ammoniak (25 %) neutralisiert. Verfahren B Es wurden 1000 ml einer Formaldehyd- Lösung (17,5 %) in einer Sterilwerkbank verdampft und nach 12-stündiger Einwirkzeit mit 300 ml Ammoniak (25 %) neutralisiert. Die Luftfeuchtigkeit im Dampfraum der betriebenen Sicherheitswerkbank wurde durch zwei im Arbeitsbereich der Sicherheitswerkbank seitlich aufgestellte Wasserbäder (befüllt mit je 18 l H 2 O) erhöht. Die Erhöhung der Luftfeuchtigkeit erfolgte über das Aufheizen der Wasserbäder auf 96 °C. Durch die vollständige Einhausung der Sicherheitswerkbank mit 40 mm Styroporplatten wurde dem Wärmeabfluss aus dem Dampfraum entgegengewirkt. Durch diese Isolationsmaßnahme konnte die allein durch die Wasserbäder erzeugte Einwirktemperatur von ~65 °C aufrechterhalten werden. Das Gerät zur Fomaldehyd- Verdampfung wurde in der Mitte der Arbeitsfläche auf die Ränder der Wasserbäder aufgestützt, so dass sich das Gerät 15 cm über der Arbeitsfläche befand. Zur Messung der Luftfeuchte (kapazitiver Feuchtefühler; Feuchtesensor FH A646-1; Ahlborn Mess- und Regelungstechnik GmbH, Holzkirchen) und der Temperatur (Widerstandsthermometer; PT 100 4-LEITER 4mm M-FX 416, Abbildung 4: Verwendete Bioindikatoren nach DIN ISO 11138-5:2006 in Form von „Sporenstreifen“. Die Sporenstreifen (A) wurden an einem Ende aufgefädelt (B), um sie dann entweder im Innenraum des Arbeitsraums oder in den Filtern befestigen und steril wieder entnehmen zu können. Abbildung 5: Verteilung der Sporenstreifen in den Filtern. Die aufgefädelten Sporenstreifen (vgl. Abb. 4B) wurden an den mit Pfeilen markierten Positionen (s. Längsschnitt durch eine Sicherheitswerkbank (A), Aufsicht (B) und Frontansicht (C) eines Filtersegmentes) einseitig oder beidseitig eingebracht.
B; TMH Temperatur Messelemente, Hanau) im Dampfraum wurden je zwei Messfühler unterhalb des Umluftfilters in der Mitte und am Rand der Arbeitsfläche positioniert. Die Messwerte wurden über den gesamten Begasungszeitraum im Abstand von 30 sec aufgezeichnet. Alle Anschlusskabel wurden durch die Stopfen an der Seite geführt, um ein Maximum an Dichtigkeit des Dampfraums zu gewährleisten. Überprüfung des Sterilisationserfolgs Zur Überprüfung des Sterilisationserfolgs wurden Bioindikatoren nach DIN EN ISO 11138-5:2006 in Form von „Sporenstreifen“ verwendet (BAG-BioStrip, Fa. BAG Health Care GmbH, Lich, Cat. No. 7479, Abbildung 4). Diese enthalten auf einem Trägermaterial 10 5 Sporen von Geobacillus stearothermophilus ATCC 7953 als Testkeime (D-Wert 121 °C 1,7; D-Wert 134 °C 0,10; Z-Wert 9,1). Bei den Sterilisationstests wurden die Sporenstreifen im Raum, auf den inneren Oberflächen und in den Filtern der Sicherheitswerkbank verteilt (Abbildung 5). Nach Formaldehyd-Exposition wurde jeder Sporenstreifen mit einer sterilen Pinzette in ein verschließbares Röhrchen mit CASO-Bouillon und Zusatz von TLCH zur Formaldehyd-Inaktivierung (Fa. heipha Dr. Müller GmbH, Eppelheim, Art. Nr. 58200090) gegeben. Zusätzlich wurde je Versuch eine Positiv-Kontrolle mit nicht exponierten Sporenstreifen mitgeführt. Anschließend wurden die Röhrchen gemäß DIN 58948 Teil 14 [10] zur Hitzeaktivierung der Sporen 60 min im Wasserbad bei 90 °C gehalten und danach 7 Tage bei 57 °C bebrütet. Kam es während der Bebrütungszeit zur Vermehrung der Test- keime (feststellbar anhand einer sichtbaren Trübungs- bzw. Sedimentationsbildung innerhalb eines Röhrchens), so wurde der jeweilige Teststreifen als „nicht sterilisiert“ beurteilt. Bei ausbleibender Trübung bzw. Sedimentation galten die Testkeime des Teststreifens als inaktiviert, der Teststreifen somit als „sterilisiert“. Nur bei Sterilisation ausnahmslos aller Teststreifen wurde die Sterilisation der Sicherheitswerkbank als erfolgreich bewertet. Ergebnisse Um die Inaktivierung von Sporen von Geobacillus stearothermophilus (ATCC 7953) durch Verfahren A nachzuweisen, wurden 160 Sporenstreifen in allen Filtern, an den Scheiben und frei hängend im Arbeitsraum der Sicherheitswerkbank eingebracht und nach 12-stündiger Formaldehyd-Exposition einem Sterilitätstest unterzogen. Überraschenderweise kam es bei ausnahmslos allen 160 Sporenstreifen nach eintägiger Bebrütung bei 57 °C zu einer deutlichen Vermehrung der Testkeime. Dieses Ergebnis zeigt, dass das Standardverfahren zur Raumbegasung gemäß RKI-Liste [1] zur Inaktivierung von Geobacillus-stearothermophilus-Sporen gänzlich ungeeignet ist. Entsprechend den Empfehlungen zur Anlagensterilisation mit Formaldehyd sollte die Formaldehyd-Exposition optimalerweise bei einer Temperatur oberhalb von 60 °C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 100 % stattfinden [3]. Um während des gesamten Expositionszeitraums die Temperatur und Luftfeuchtigkeit zu erhöhen, wurden nachfol- 285 Hyg Med 2009; 34 [7/8] © mhp-Verlag GmbH Aus der Praxis gend ein Wasserbad und ein Heizungsradiator in den Arbeitsraum eingebracht und die Formaldehydverdampfung bei eingeschaltetem Wasserbad (96 °C) wiederholt. Die Überprüfung des Sterilisationserfolges erfolgte wiederum mittels Bioindikatoren. Wenngleich über den gesamten Begasungszeitraum nun eine mittlere erhöhte Temperatur von ~45 °C gemessen werden konnte, zeigte sich gleichzeitig, dass die Luftfeuchtigkeit innerhalb des Arbeitsraums der Werkbank zum Heizungsradiator hin drastisch abnahm. Insgesamt lag die mittlere Luftfeuchtigkeit, trotz des vom Wasserbad erzeugten heißen Wasserdampfes bei lediglich ~28 %. Da allerdings einige Sporenstreifen in der Nähe des Wasserbads ein verzögertes Wachstum zeigten, deutete dieses Ergebnis darauf hin, dass eine weitere Erhöhung der Lufttemperatur bei gleichzeitiger konstant hoher Luftfeuchtigkeit zu einem Sterilisationserfolg führen könnte. Als nächstes wurde daher ermittelt, wie mit handelsüblichen Mitteln die Temperatur über den gesamten Begasungszeitraum oberhalb von 60 °C bei einer gleichzeitigen relativen Luftfeuchtigkeit von 100 % aufrecht erhalten werden kann. Als Ergebnis einer Reihe von Vorversuchen stellte sich der unter Verfahren B beschriebene Versuchsaufbau als geeignet heraus. Um mittels Bioindikatoren zu prüfen, ob dieser Versuchsaufbau auch zur wirksamen Sterilisation aller HEPA-Filter führt, wurden 77 Sporenstreifen im Arbeitsraum und in allen Filtern der Werkbank eingebracht. Es wurde darauf geachtet, dass Sporenstreifen insbesondere auch an kritisch eingeschätzten Stellen (z. B. in den Abbildung 6: Temperatur- und Luftfeuchteverlauf während der Formaldehydbegasung. Während der Begasungsdauer wurde die Temperatur und die relative Luftfeuchte alle 30 sec gemessen. Über den Begasungszeitraum von 9 Stunden (hellgrau markiertes Zeitfenster) ergab sich bei erfolgreicher Sterilisation eine 100 %ige Luftfeuchte bei einer mittleren Temperatur von 65 °C.
Seite 1 und 2: D 45 35 ISSN 0172-3790 August 2009,
Seite 3: tomization of the well-established

SONDERDRUCK - Thermo Scientific

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?