SONDERDRUCK - Thermo Scientific

Aus der Praxis
äußerst seitlich angebrachten Filtern) positioniert
wurden. Um die Wahrscheinlichkeit
für einen wirksamen Sterilisationserfolg
zu erhöhen, wurde zusätzlich die
Menge der verdampften Formaldehyd-
Lösung erhöht. Die Werkbank selber wurde
vollständig mit Styroporplatten eingehaust,
um einem Temperaturverlust innerhalb
der Werkbank entgegen zu wirken.
Unter diesen Bedingungen (Verfahren
B) konnte über einen Zeitraum von
9 Stunden eine Durchschnittstemperatur
von 64,7 °C (Messfühler 1) bzw. 65,5 °C
(Messfühler 2) bei einer Luftfeuchte von
100 % erreicht werden (Abbildung 6).
Erwartungsgemäß konnte nun auch tatsächlich
eine Sterilisation ausnahmslos
aller 77 Sporenstreifen nachgewiesen werden.
Diese Ergebnisse lassen den Schluss
zu, dass die HEPA-Filter gleichmäßig vom
Formaldehyddampf erfasst wurden und
die Wirksamkeit des Sterilisationsverfahrens
an allen erfassten Stellen innerhalb
der Sicherheitswerkbank und der Filter
gleichermaßen gegeben war.
Diskussion
Obwohl die Raumbegasung mit Formaldehyd
als anerkanntes Desinfektionsverfahren
und die Niedrigtemperatur-Dampf-
Formaldehyd-Sterilisation als anerkanntes
Sterilisationsverfahren gilt, gibt es viele unterschiedliche
Meinungen über die Sicherheit
des Verfahrens für die Applikation an
mikrobiologischen Sicherheitswerkbänken,
da ein eindeutiger Wirksamkeitsnachweis
bislang nicht erbracht wurde. Die einzige
gesicherte Erkenntnis ist, dass sich Formaldehyd
nicht zur Inaktivierung von Prionen eignet.
Aufgrund der fixierenden Wirkung und
der damit verbundenen Resistenzerhöhung
gegenüber anderen Inaktivierungsverfahren
ist Formaldehyd dort kontraindiziert [5].
Bereits 1991, vor Erscheinen der TRGS
522, wurde durch die Hanauer Firma Heraeus
eine mikrobiologische Untersuchung zur
Sterilisation von Sicherheitswerkbänken
mittels Formaldehyd durchgeführt. Die
Versuche wurden an einer Sicherheitswerkbank,
ganz ähnlich der heutigen Klasse 2 in
verstärkter Ausführung mit so genanntem
3-Filter-System, durchgeführt, da diese die
höchsten Anforderungen an die Sterilisation
der gesamten Werkbank mitsamt der Filter
stellen. Es wurde nachgewiesen, dass der
Formaldehyddampf alle eingesetzten HEPA-
Filterstufen durchdringt. Die Versuche
wurden mit Bacillus-subtilis-Sporen durchgeführt,
die im Arbeitsraum der Werkbank
vernebelt worden waren. Die anschließende
Begasung erfolgte nach der damals gültigen
DIN 12 950, wie sie auch heute noch im
informativen Anhang J der aktuellen DIN
EN 12 469 beschrieben ist (vgl. Verfahren
A). Unter diesen Bedingungen konnte gezeigt
werden, dass Keime im Arbeitsraum
und auf der Oberfläche des Hauptfilters inaktiviert
worden waren. Ungeklärt blieb
jedoch insbesondere die Frage, inwiefern die
Filterinnenräume mit Testkeimen beaufschlagt
waren und wie hoch die erzielte
Keimreduktion war.
Die hier nun vorgestellten Untersuchungen
zeigen, dass Sporen in Sporenstreifen,
die unmittelbar auf die Filter und zwischen
die Falten der Filter gebracht wurden, durch
den Formalddampf wirksam inaktiviert
werden können, dass aber die relative Luftfeuchtigkeit
und die Temperatur kritische
Parameter darstellen, die während des Inaktivierungsvorgangs
bestimmte Mindestwerte
erreichen müssen. Sterilisationsversuche
im Rahmen unserer Vorversuche
zeigten, dass selbst bei einer relativen Luftfeuchtigkeit
von 100 % eine Durchschnittstemperatur
von lediglich ~47 °C nicht zur
Inaktivierung aller Keime führte, sondern
erst Temperaturen von ca. 65 °C.
Wenngleich die minimal wirksame
Sterilisationstemperatur bei der Begasung
zwischen 47 °C und 65 °C liegen wird und
ebenso die eingesetzte Formaldehydmenge
reduziert werden könnte oder spezifische
Validierungen mit den resistentesten umhüllten
und unbehüllten Viren für ausschließlich
virologisch arbeitende Laboratorien
zu einer Reduzierung der notwendigen
Begasungsparameter führen könnte,
können bei Durchführung des hier beschriebenen
Verfahrens B nicht nur die
entnommenen Filter, sondern der gesamte
Innenraum der Sicherheitswerkbank als
praktisch steril betrachtet werden.
In Bereichen höheren Risikos erscheint
neben dem Erfassen der physikalischen
Parameter das Überprüfen der
Wirksamkeit des Sterilisationsverfahrens
durch Bioindikatoren nach DIN EN ISO
11138-5 als sinnvoll.
Das hier geschilderte Sterilisationsverfahren
ist dem Autoklavieren, bei dem
lediglich die Filter selbst sterilisiert werden,
vorzuziehen, insbesondere dann,
wenn eine Sicherheitswerkbank gewartet
oder ausgemustert werden soll.
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Hyg Med 2009; 34 [7/8] © mhp-Verlag GmbH
Danksagung
Wir danken Herrn Björn Wefers, Institut für
Virologie, Frau Hanne Monix und Barbara
Noske, Institut für Medizinische Mikrobiologie
und Krankenhaushygiene sowie den
Herrn Klaus Hauck, Rudi Kampfmann und
Heinrich Müller (Thermo Fisher Scientific)
für ihre exzellente technische Unterstützung
bei der Durchführung dieses Projekts.
Interessenkonflikt
Die Autoren erklären, dass kein Interessenkonflikt
im Sinne der Richtlinien
des International Committee of Medical
Journal Editors besteht.
Literatur
1. Liste der vom Robert Koch-Institut geprüften und anerkannten
Desinfektionsmittel und -verfahren (Desinfektionsmittelliste,
15. Ausgabe), 2007, Bundesgesundheitsbl
- Gesundheitsforsch. - Empfehlung Gesundheitsschutz;
50: 1335–1356.
2. Technische Regel für Gefahrstoffe 522, Raumdesinfektion
mit Formaldehyd (TRGS 522), Ausgabe: Juni 1992,
zuletzt geändert: BArbBl. Heft 9/2001.
3. Wallhäuser, K. H.; Praxis der Sterilisation, Desinfektion,
Konservierung, Keimidentifizierung, Betriebshygiene; 5.
völlig überarbeitete Auflage; 1995; Georg Thieme Verlag,
Stuttgart, New York.
4. DIN Deutsches Institut für Normung e. V.; DIN EN 12469,
Ausgabe: 2000-09; Biotechnik - Leistungskriterien für
mikrobiologische Sicherheitswerkbänke; Beuth Verlag
GmbH.
5. Die Variante der Creutzfeldt-Jakob-Krankheit (vCJK)
Abschlussbericht der Task Force vCJK zu diesem
Thema. Bundesgesundheitsbl-. Gesundheitsforsch-
Gesundheitsschutz. (4/2002) 45:376–394.
6. Verordnung über Sicherheit und Gesundheitsschutz bei
Tätigkeiten mit biologischen Arbeitsstoffen (Biostoffverordnung
– BioStoffV) vom 27. Januar 1999; BGBl. I S. 50;
zuletzt geändert März 2007; BGBl. I S. 261.
7. Verordnung über die Sicherheitsstufen und Sicherheitsmaßnahmen
bei gentechnischen Arbeiten in gentechnischen
Anlagen (Gentechnik-Sicherheitsverordnung
- GenTSV) vom 14. März 1995; BGBl. I S. 297; zuletzt
geändert März 2007; BGBl. I S. 261.
8. DIN Deutsches Institut für Normung e. V.; DIN 12980,
Ausgabe: 2005-06; Laboreinrichtungen – Sicherheitswerkbänke
für Zytostatika; Beuth Verlag GmbH.
9. Stellungnahme der ZKBS zur Entsorgung der nachgeschalteten
HEPA-Filter aus einer mikrobiologischen
Sicherheitswerkbank der Klasse 2 in einer gentechnischen
Anlage der Stufe 3; Az.: 6790-07-47; 6. Mai 2008;
www.bvl.bund.de.
10. DIN Deutsches Institut für Normung e. V.; DIN 58948
Teil 14, Ausgabe: Jan. 1987; Bio-Indikatoren zur
Prüfung auf Wirksamkeit von Formaldehydgassterilisatoren.
Weitere Informationen:
www.thermo.com/bsc
Lit.Code: PFBSC_HEPASterilisation_2009