eisenaufnahme in astroglia-reichen primärkulturen - E-LIB ...

INHALTSVERZEICHNIS
2.2.3 Experimentelle Inkubationen................................................................................ 52
2.2.4 Bestimmungsmethoden.......................................................................................... 53
2.2.4.1 Kolorimetrischer Test zur Bestimmung von Eisen............................................. 53
2.2.4.2 Proteinbestimmung................................................................................................ 55
2.2.4.3 Zellvitalitätstest ...................................................................................................... 56
2.2.4.4 Citratbestimmung .................................................................................................. 57
3 Ergebnisse ............................................................................................................... 59
3.1 Charakterisierung Astroglia-reicher Primärkulturen als Modellsystem ......... 59
3.1.1 Immuncytochemische Charakterisierung............................................................ 59
3.1.2 Bestimmung der basalen Eisen- und Proteingehalte .......................................... 60
3.2 Eisenakkumulation in serumfreien Kulturmedien ............................................. 61
3.2.1 Zeit- und Konzentrationsabhängigkeit der Eisenakkumulation nach
Gabe von Eisenammoniumcitrat in Vollmedium................................................ 61
3.2.2 Einfluss von Citrat und Isocitrat .......................................................................... 63
3.2.3 Abhängigkeit vom Inkubationsmedium............................................................... 65
3.2.4 Temperaturabhängigkeit....................................................................................... 69
3.2.5 Abhängigkeit vom extrazellulären pH-Wert....................................................... 70
3.2.6 Einfluss von divalenten Kationen und Metallionen ............................................ 72
3.2.7 Einfluss von Endocytose-Inhibitoren ................................................................... 74
3.3 Untersuchung zur Bildung von eisenhaltigen Niederschlägen........................... 77
3.3.1 Zeit- und Konzentrationsabhängigkeit ................................................................ 77
3.3.2 Temperaturabhängigkeit....................................................................................... 80
3.3.3 pH-Wert-Abhängigkeit.......................................................................................... 81
3.3.4 Einfluss von Citrat ................................................................................................. 82
3.3.5 Einfluss von Phosphat............................................................................................ 85
3.3.6 Filtration der Eisenpräzipitate ............................................................................. 86
3.4 Eisenakkumulation in phosphatfreiem Inkubationspuffer................................ 86
3.4.1 Zeit- und Konzentrationsabhängigkeit ................................................................ 86
3.4.2 Temperaturabhängigkeit....................................................................................... 89
3.4.3 pH-Wert-Abhängigkeit.......................................................................................... 91
3.4.4 Einfluss von Plasmaproteinen............................................................................... 92
3.4.5 Einfluss von Ascorbat ............................................................................................ 93
3.4.6 Effekt von Eisenchelatoren.................................................................................... 94
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