eisenaufnahme in astroglia-reichen primärkulturen - E-LIB ...

ERGEBNISSE
3.3 Untersuchung zur Bildung von eisenhaltigen Niederschlägen
3.3.1 Zeit- und Konzentrationsabhängigkeit
Eine notwendige Vorraussetzung für die Eisenaufnahme durch Endocytose ist das Auftreten
von Eisenpartikeln aus FAC-haltigen Lösungen. Dies erscheint aufgrund der guten
Löslichkeit von FAC in wässrigen Lösungen zunächst unwahrscheinlich. Zur Untersuchung
möglicher Präzipitatbildung wurden 100 µM FAC gelöst in Ip-Hepes für bis zu 1 h bei 37 °C
inkubiert und zu den angegebenen Zeitpunkten je 1.0 ml Probe entnommen, welche nach
Zentrifugation bei 12500xg für 15 min auf die Bildung eisenhaltiger Niederschläge untersucht
wurden. Abbildung 3.3.1 zeigt, dass eisenhaltige Präzipitate nachgewiesen wurden, deren
Anteil mit zunehmender Inkubationszeit auf bis zu 90 % der initialen Eisenmenge anstieg.
Eisengehalt (nmol/ml)
100
80
60
40
20
0
Niederschlag
Medium
SD Medium
0 10 20 30 40 50 60
Inkubationszeit (min)
Abb. 3.3.1: Zeitabhängigkeit der Eisenpräzipitation
Ip-Hepes mit 100 µM FAC wurde für bis zu 60 min bei 37 °C inkubiert. Bestimmt wurde der
Eisengehalt in der Ausgangslösung (Medium) sowie der Eisengehalt im Niederschlag von 1.0 ml
Probe nach Inkubation und anschließender Zentrifugation bei 12500xg für 15 min.
Um zu untersuchen, ob ein Zusammenhang zwischen der eingesetzten FAC-Konzentration
und dem Auftreten von Eisenpräzipitaten festzustellen ist, wurde Ip-Hepes mit FAC-
Konzentrationen bis zu 1000 µM für 1 h bei 37 °C inkubiert und der Eisengehalt im
Niederschlag nach Zentrifugation bestimmt.
Abbildung 3.3.2 A zeigt, dass in Abhängigkeit zur eingesetzten FAC-Konzentration
unterschiedliche Eisengehalte im Präzipitat auftraten und nur in Ansätzen mit einer FAC-
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