Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...

Materiales y Métodos
3.2.2. Estudios Serológicos
Se determinó el título de anticuerpos IgG antidengue mediante un Elisa de Inhibición
(MEI) y la presencia de anticuerpos neutralizantes a los virus DEN-1 y DEN-2 mediante
NRNP siguiendo los protocolos descritos a continuación.
3.2.2.1. Determinación del título de anticuerpos IgG antidengue
La detección de anticuerpos IgG a virus dengue se realizó en todos los casos que fue
necesario siguiendo el protocolo de Técnicas del Laboratorio de Arbovirus según las
modificaciones realizadas por Vázquez y cols (192). Los criterios de positividad seguidos
fueron los siguientes:
Criterios empleados en la clasificación por esta técnica
Una muestra de suero obtenida entre 5-7 dia del comienzo de la fiebre con un titulo de
anticuerpos de IgG antidengue >=1/1280 mediante MEI fue considerada como un caso de
infección secundaria mientras que aquellas muestras con un titulo de anticuerpos < =20 se
consideraron como casos de infección primaria.
3.2.2.2. Detección de Anticuerpos neutralizantes a los virus DEN-1 y DEN-2 por la
técnica de NRNP.
Células empleadas
Para el desarrollo de este objetivo, se emplearon las células BHK21. La línea celular BHK-
21 clono 15 (riñón de Hámster) obtenida a partir de la línea BHK-21 clono 13 (ATCC
1992) y donada al laboratorio de Arbovirus por el Prof. S.B. Halstead (Director Científico
de la Iniciativa para la Vacuna Pediátrica de Dengue) fue empleada en la NRNP y en la
titulación de los lotes virales. Las células fueron crecidas a 37ºC en frascos plásticos
estériles de 75 cm 2 utilizando medio MEM suplementado con 1% de aminoácidos no
esenciales (100X) y 10% de SFBI, y pasadas semanalmente a una razón de pase de 1:8.
Para la realización de ambas técnicas se prepararon suspensiones celulares a una
concentración de 2 x 10 5 células/mL.
Cepas empleadas en la NRNP
La tabla 1 muestra las cepas virales de los 4 serotipos empleadas en los diferentes estudios.
Tabla 1. Historial de pases, lugar y año de aislamiento de las cepas utilizadas en la
NRNP
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