Cinética y capacidad neutralizante de los anticuerpos homólogos y ...

Fuente: Libro de Técnicas del Laboratorio de Arbovirus, IPK, 2007.
Clasificación serológica según esta técnica
Materiales y Métodos
Acorde al criterio previamente establecido (193), los sueros agudos y convalecientes con un
título de anticuerpos neutralizantes >=1/30 a un serotipo fueron considerados como casos
de infección primaria mientras que los que tenían anticuerpos a DEN-1 y DEN-2 fueron
considerados como casos con una infección secundaria.
3.2.3. Estudios Virológicos y Moleculares
El aislamiento e identificación de virus DEN y la detección del genoma en las vísceras y
sueros de fallecidos por FHD/SCD se realizó siguiendo los protocolos que a continuación
se exponen.
3.2.3.1. Aislamiento Viral en las muestras de suero y vísceras de los fallecidos
Células empleadas
Para el desarrollo de este objetivo, se emplearon las células C6/36 HT.
C6/36 HT: La línea celular C6/36 HT (Aedes albopictus), obtenida por Kuno y Oliver en
1989 a partir de la línea celular C6/36 (Igarashi, 1979) y donada al laboratorio de Arbovirus
del IPK por el Dr. Javier Díaz del Laboratorio Departamental de Medellín, Colombia fue
utilizada para el aislamiento del virus DEN a partir del suero de los pacientes colectados
durante la fase aguda de la enfermedad. Las células se mantuvieron mediante pases
semanales a una razón de pase de 1:6 utilizando como medio de crecimiento Medio
Esencial Mínimo (MEM), suplementado con 1% de aminoácidos no esenciales (100X),
2mM de glutamina, antibióticos (penicilina 100 UI/mL y estreptomicina 100 mg/mL) y
10% de suero fetal bovino inactivado (SFBI) por calor (30 minutos a 56 0 C). Para el
aislamiento viral, las células fueron sembradas en placas plásticas estériles de 24 pozos.
Las mismas se incubaron a 33ºC en atmósfera de CO2 al 5%, empleando el mismo medio
de crecimiento y se utilizaron cuando la monocapa fue confluente.
Metodología empleada para el aislamiento.
En dependencia del estudio, el aislamiento viral se realizó en tubos plásticos o en placas
plásticas de 24 pocillos.
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