Manual de laboratorio

TINCION DE GRAM
La tinción de Gram es un método que nos servirá para la observación de bacterias. Gracias a las
diferencias estructurales de la pared celular de las bacterias, con esta tinción se logran identificar dos
grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas. Para esto es necesario un microscopio de campo
claro, aceite de inmersión, cubreobjetos, portaobjetos, asas microbiológicas, mechero de Bunsen,
micropipetas, cultivos bacterianos (muestras de los medios selectivos). Los reactivos necesarios para
realizar la tinción son el colorante primario (cristal violeta al 1% en solución), solución alcalinizante,
lugol, agente decolorante (alcohol al 95%), colorante de contraste (safranina al 1% en solución).
Material:
· Microscopio de campo claro
· Aceite de inmersión
· Portaobjetos
· Cubreobjetos
· Asas microbiológicas
· Mechero
· Cultivos bacterianos
· Reactivos para tinción de Gram:
- Colorante primario (cristal violeta al 1% en solución).
- Solución alcalinizante (opcional).
- Lugol.
- Agente decolorante (alcohol al 95%).
- Colorante de contraste (safranina al 1% en solución).
Método:
Para poder observar, primero se preparan frotis fijos de cada uno de los cultivos
bacterianos a observarse, para esto se I. esteriliza un asa bacteriológica y posteriormente se toma una
pequeña muestra de los medios selectivos y se coloca en los portaobjetos limpios (foto I); II. se flamean
los frotis para secar la muestra y fijarla (evitando que se queme o humée), III. se cubren los frotis con
una o dos gotas de la solución primaria junto con una o dos gotas de solución alcalinizante dejando
actuar la mezcla por un periodo de 20 a 25 segundos, IV. se lavan los frotis con agua corriente,
tratando de que el chorro de agua no sea violento y deslave el frotis. V. se retira el exceso de agua y