Manual de laboratorio

diversidad de clonas (TG y PY, en este caso) y a partir de ellas obtener los géneros esperados
(tabla 1, anexo 2).
Preparación de diluciones (ver fig. 1)
(todo el procedimiento se realiza en la campana de flujo laminar)
Procedimiento para agua.
1. En una gradilla, coloca 5 tubos de ensaye y adiciona exactamente 9.9ml de solución salina al
0.8%. Enumera los tubos del 1 al 5.
2. Toma 100 microlitros de agua colectada y viértelos en el tubo No.1 así tendrás en él una
dilución 1:100 respecto del original, agita este tubo en el vórtex, toma 100 microlitros y
agrégalos en el tubo No.2; ahora tienes una dilución de 1:10,000 con respecto al original;
repite esta operación hasta el tubo No.5, el cual estará a una dilución de 1 x 10 -10 respecto al
original.
3. En una caja de medio TG (preparadas en la práctica 1) inocula 100 microlitros del tubo No.3
(dilución 1x10 6 ). En otras cajas de medio, repite la operación para las diluciones de los tubos
4 y 5.
4. Rotula cada caja de cultivo indicando el factor de dilución, el tipo de muestra a que
corresponde, equipo y grupo.
5. En cada caja agrega de 10 a 12 perlas de vidrio, ciérralas y colócalas una sobre otra. Agita las
cajas de forma rotatoria hasta que el inóculo se distribuya perfectamente sobre el medio (por
lo regular es suficiente con 5 minutos). Elimina las perlas de vidrio en un baso de precipitados
que contenga alcohol al 70%.
6. Incuba a 36°C durante 40-48hrs.
Nota: Si es posible, se recomienda inocular 3 cajas de cada dilución a partir de la dilución del
tubo 3. Sin embargo, cuando se desea obtener colonias de bacterias de aguas potables, es
recomendable hacer cultivos a partir de la primera dilución.
Procedimiento para suelo:
1. En una gradilla, coloca 6 tubos de ensaye y adiciona exactamente 9.9ml de solución salina al
0.8%. (ver anexo 1). Enumera los tubos del 1 al 5.
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