VARIABILIDAD GENÉTICA Y GRADO DE ENTRECRUZAMIENTO ...
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calidad del ADN obtenido. Se puede descartar con seguridad inconvenientes de reactivos,<br />
dados los excelentes resultados en las muestras de sangre. Con estas condiciones se<br />
amplificaron ll de los 13 microsatélites utilizados en el estudio. en las muestras de sangre.<br />
Tabla 3. Condiciones de PCR estandarizadas para las muestras de sangre.<br />
Reactivo<br />
Buffer<br />
BSA<br />
MgCh<br />
dNTPs<br />
Primer F<br />
Primer R<br />
Taq<br />
ADN<br />
Concentración final<br />
IX<br />
0.01%<br />
2mM<br />
100flM<br />
72Nm<br />
72nM<br />
3u<br />
15ng<br />
Tabla 4. Protocolo de corrida.<br />
Volumen a usar por<br />
individuo en )ll.<br />
2.5<br />
2.5<br />
2.5<br />
0.5<br />
0.18<br />
0.18<br />
0.084<br />
5<br />
Paso Tiempo<br />
194°C I min<br />
2 94()C 30 seg<br />
345°C 45 seg<br />
472°C 30 seg<br />
5 35 ciclos desde el paso 2<br />
6 72 Oc lO min<br />
En el caso de las muestras de heces se dehe considerar que el ADN que se ohtiene a partir<br />
de estas corresponde a células que ya se encuentran en Ull proccso de deterioro (Avers 1991 l.<br />
Este proceso no se puede revertir. sumado a que en proporción la cantidad de estas células es<br />
mínima en una matriz que contiene microorganismos y tejido vegetal ahundante. De estos<br />
últimos también se extrae su ADN y hace parte del total utilizado para las amplificaciones. No<br />
Informe proyecto variabilidad genética del mono aullador, julio 31 de 2005 35
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