VARIABILIDAD GENÉTICA Y GRADO DE ENTRECRUZAMIENTO ...

observar si hayo no-amplificación. A la vez permite observar el tipo de ADN que se tiene (si es
vegetal o de otro tipo), usando un micro que este funcionando. Se realizó un PCR para ambas
pruebas con el micro globulata de Espeletia grandi» (Jasen Raucher) con control positivo. El
resultado de esta prueba es que las muestras contaminadas no amplificaron, con lo cual se
demuestra que el ADN que se tenía no era amplificable.
Posteriormente se inició la prueba de microsatélites. l.as condiciones de prueba inicial se
establecieron a partir de lo publicado por Goncalves el al. 2004 y las usadas por los diferentes
investigadores del laboratorio de biología molecular del Instituto von Humboldt. Con estas
condiciones, se obtuvieron las primeras bandas de micros. A partir de este punto fue necesario
estandarizar las condiciones y encontrar las más adecuadas para cada cebador, realizando varias
pruebas. Ya con las condiciones establecidas se realizaron los ensayos de amplificación. Sin
embargo, estos no fueron exitosos debido a factores de contaminación. Se corrieron 14 PCR
hasta evitar la contaminación en la amplificación. Una vez que se eliminó la contaminación, se
realizaron las siguientes consideraciones:
1. Hacer diluciones considerando una primera dilución 1:1. Así: 1:4, 1:3, 1:2, 1:I(original)
2. Correr un PCR para dos individuos de aullador y un negativo para los tres cebadores Ab12,
ab20, Ab06 con estas diluciones pero solo bajo el volumen que venia usando ósea 0.25,.11,para
20¡.t1de reacción.
3. En este PCR (uno por cada micro) sc usaron las Temperaturas de anidamiento (Tm). - Abl2
= 60°C,
- Ab06 = 50°C
- Ab20 = 65°('
Informe proyecto variabilidad genética del mono aullador. julio J 1 de 1005 40
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