Déroulement des TP LV336, Outils de la Biologie ... - Page d'accueil

Annexes
Annexe 1 : Préparation d’un gel d’agarose.
Préparer dans une éprouvette 500 mL de tampon TBE 0,5X. Dans une fiole Erlenmeyer mettre la
quantité nécessaire en agarose et le tampon TBE 0.5X (par exemple un gel d’agarose de 0,8%
signifie : 0,8 g d’agarose pour 100 mL de tampon TBE 0,5X). Les volumes à préparer sont de
40mL (petit gel) ou 80 mL (grand gel). Faire fondre l’agarose en portant à ébullition le mélange
au four micro-ondes puis laisser refroidir le gel obtenu jusqu’à environ 55°C. Couler le gel dans le
support, mettre le peigne. La prise est obtenue après environ 20 à 30 min.
La préparation de gel d’agarose à des pourcentages différents est réalisée en ajustant la quantité
d’agarose.
Composition du tampon TBE 10X (Tris Borate EDTA) :
• 89 mM Tris HCl pH8
• 89 mM Acide Borique
• 2,5 mM EDTA
Annexe 2 : Migration électrophorétique et coloration d’un
gel d’agarose.
1. Faire migrer l’électrophorèse pendant 30 min ou 1 heure à 130 Volts.
2. La coloration du gel est réalisée par l’enseignant : après électrophorèse, le gel est incubé
10 min dans un bain de tampon TBE 0,5X contenant 20 µg/mL de Bromure d’Ethidium, puis
rincé à l’eau distillée.
3. La photo du gel est réalisée sur table UV en présence de l’enseignant.
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