Première observation de la maladie de la galle du collet causée par Agrobacterium tumefaciens

Downloaded by [Mehdi El Arbi] at 03:23 12 February 2012
M. El Arbi et al. 460
Matériels et méthodes
Localisation de la parcelle
La parcelle cultivée en oliviers à huile, Olea europaea,
variété ‘Chemlali’ se trouve dans la zone d’Elkarma
de la région d’Elhouareb, délégation de Haffouz du
Gouvernorat de Kairouan (Fig. 1).
Isolement de la bactérie
Les échantillons végétaux ont été lavés à l’eau courante
afin d’enlever les particules de sol adhérentes aux galles,
puis les galles ont été désinfectées en surface à l’eau de
javel (0.5%) et lavées à l’eau distillée stérile. Des fragments
de tumeurs coupés aseptiquement ont été broyés
au mortier dans de l’eau distillée stérile. La suspension
obtenue a été laissée à la température ambiante pendant
30 min avant de procéder à l’isolement par étalement sur
du milieu Mannitol-Glutamate additionné de tellurite de
potassium comme préconisé par Mougel et al. (2001).
Après incubation à 28 ◦ C pendant 48 h, les colonies individualisées
et caractéristiques, circulaires, convexes et de
couleur noire ont été repiquées sur le même milieu pour
purification par épuisement.
Fig. 1. Localisation de la parcelle où a été détectée l’infection.
Identification des biovars
Les isolats ayant la forme et la consistance des agrobactéries
ont subit les tests biochimiques décrits par Moore
et al. (1988). Ces tests regroupent la coloration Gram, la
production d’uréase, l’hydrolyse de l’esculine et la production
de 3-cétolactose. L’observation microscopique
d’Agrobacterium tumefaciens révèle des bactéries en
bâtonnet à Gram négatif. Le virage de l’indicateur coloré
au rose suite à l’alcalinisation du milieu de Christensen
traduit un test d’uréase positif, un test positif d’hydrolyse
de l’esculine se manifeste par une coloration noire du
milieu de culture due à la libération du glucose et de
l’esculétine, responsable de cette teinte en présence de
sels de fer et la production du 3-cétolactose se traduit
par l’apparition d’un halo jaunâtre autour des colonies
d’Agrobacterium. Si les trois précédents tests biochimiques
sont positifs, la souche isolée fait alors partie du
biovar 1 (i.e. complexe A. tumefaciens).
Test du pouvoir pathogène des isolats sur Kalankoë et
olivier
Les tests du pouvoir pathogène ont été effectués avec
des jeunes plants de Kalankoë (Kalankoë daigremontiana)