Reprogrammation de cellules somatiques en cellules souches - M2 ...

les cellules HDF. Ces cellules HDF-Slc7a1 ont ensuite été transduites par un rétrovirus écotropique
portant le transgène de la GFP. Cette stratégie a permis de multiplier par 3 le pourcentage de
cellules exprimant la GFP dans les cellules HDF-Slc7a1, passant de 20 à 60%.
Les pseudo cellules souches ont été générées selon le protocole schématisé en figure 6A. Des
rétrovirus codant les facteurs de transcription Oct4, Sox2, Klf4 et c-Myc ont été introduits dans des
cellules HDF-Slc7a1. Ces cellules sont cultivées environ un mois puis sont analysées. L’observation
des cultures a montré la formation de regroupements organisés typiques de colonies de CSE
(Figure 6B). Chacune de ces colonies a été prélevée pour pouvoir étaler les cellules sur une couche
de cellules nourricières en présence bFGF, un facteur classiquement utilisé pour maintenir l’état de
pluripotence des CSEh en culture. La morphologie de ces cellules, similaire aux CSEh, est
caractérisée par un large noyau et un petit cytoplasme. Par la suite, les analyses moléculaires de
l’état de pluripotence seront réalisées sur les cellules issues du clone 201B.
A
B
Figure 6 : Induction des pseudo cellules souches à partir de cellules HDF adultes. (A) Schéma temporel du
protocole d’induction des pseudo cellules souches. (B) Image d’une colonie obtenue qui se présente sous le même
aspect qu’un une colonie de CSEh. Barre = 200 µm.
II. Analyses de marqueurs spécifiques des CSEh.
Les analyses par Western Blot de protéines marqueurs des CSEh ont montré entre autre que le
niveau d’expression des trois facteurs clefs de la pluripotence, OCT4, SOX2, NANOG était
similaire dans les pseudo cellules souches et les CSEh (Figure 7A). De plus, les pseudo cellules
souches révèlent la présence de la télomérase, enzyme caractéristique de cellules « immortelles ».
Par ailleurs, il a été montré que le niveau d’expression de klf4 et de c-Myc augmentait d’un facteur
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