Reprogrammation de cellules somatiques en cellules souches - M2 ...

5, après transduction rétrovirale des cellules HDF mais que le niveau d’expression de ces facteurs
dans les pseudo cellules souches obtenues était comparable à celui des HDF (Figures 7A),
suggérant une mise en silence du rétrovirus. Une RT-PCR utilisant des amorces spécifiques pour les
transcrits rétroviraux a en effet, confirmé une mise en silence des quatre rétrovirus. Les résultats
obtenus par Western Blot ont été vérifiés par RT-PCR et la présence de certains de ces marqueurs a
été observée par immunofluorescence. Des mesures enzymatiques ont également démontré
l’activité de la télomérase ainsi qu’un temps de doublement équivalent aux CSEh.
Une étude du profil global d’expression génique a été réalisée afin de déterminer les similitudes
entre les pseudo cellules souches, les cellules HDF et les CSEh. L’expérience consiste à hybrider la
totalité des ARN cellulaires transcrits sur une micropuce du génome humain complet (Whole
Human Genome Microarray, Agilent). L'expérience indique que les pseudo cellules souches ont un
profil d’expression génique plus ressemblant à celui des CSEh qu’à celui des cellules HDF (Figure
7).
A
B
Figure 7 : Les pseudo cellules souches obtenues présentent des marqueurs géniques de CSEh. (A) Analyse par
Western blot de gènes marqueurs de la pluripotence de pseudo cellules souches (iPS 201B) au jour 1, 2, 3, 6 et 7, de
cellules souches embryonnaires humaines (CSEh, ES sur la figure), de cellules de tératomes NTERA-2 et de
fibroblastes humain de peau (HDF). (B) Comparaison des profils d’expression génique des pseudo cellules souches
avec les cellules HDF et les CSEh (lignée H9) avec une puce à oligonucléotide. Les flèches indiquent le niveau
d’expression de Nanog, Sox-2 endogènes et Oct-4 endogènes. Les lignes rouges indiquent la diagonale et les variations
entre les échantillons.
III. Analyses épigénétiques des pseudo cellules souches.
Les modifications de l’ADN et des histones sont des mécanismes de régulation transcriptionnelle.
Les CSEh possèdent un état chromatinien spécifique déjà caractérisé (Pan et al., 2007) et très
différent des cellules différenciées. Le statut épigénétique des pseudo cellules souches a été
comparé au statut épigénétique des CSEh et des cellules HDF, à la suite d’une immunoprécipitation
de la chromatine. Les résultats obtenus montrent que les modifications épigénétiques
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