Reprogrammation de cellules somatiques en cellules souches - M2 ...

exogènes, d’activer ou de réprimer l'expression de gènes cibles tels leur équivalent génique
endogène et ainsi enclencher la boucle d’autorégulation nécessaire à l’état de pluripotence. En
outre, Klf4 semble fonctionner comme un cofacteur de Oct-4 et Sox2 (Nakatake et al., 2006).
Il est également supposé que Oct4 et Sox2 participent à l’expression et/ou au recrutement des
protéines PcG qui mettrait en silence les gènes des facteurs de différenciation. En effet, les
modifications de la chromatine H3K27me3 catalysées par PcG, absentes dans les MEFs, sont réétablies
dans les pseudo cellules souches (Maherali et al., 2007; Wernig et al., 2007).
Pour finir, d'autres auteurs ont observé que de nombreux cycles de réplication de l'ADN
pouvaient être nécessaires in vitro, à l'inversion de l'état de silence du promoteur Oct-4 et au réétablissement
de la boucle d'autorégulation interconnectée des facteurs Oct-4, Sox2 et Nanog (Loh
et al., 2007; Feldman et al., 2006).
B. RESULTATS : Reprogrammation de cellules somatiques humaines.
En 2006, Takahashi et Yamanaka ont réussi à obtenir des pseudo cellules souches par la
transduction de 4 facteurs de transcription dans des cellules fibroblastiques adultes de souris (K.
Takahashi and S. Yamanaka, 2006). Suite à la publication des ces résultats, ils ont transposé cette
technologie de reprogrammation aux cellules somatiques humaines. Les pseudo cellules souches
humaines obtenues se sont révélées similaires aux CSEh en terme de morphologie, de marqueurs,
d’expression génique et de statut épigénétique ainsi qu’au niveau des activités télomérases.
I. Obtention de pseudo cellules souches à partir de fibroblastes humains.
L’obtention de pseudo cellules souches chez la souris a montré que la transduction des cellules
somatiques nécessitait l’utilisation d’un rétrovirus de haute efficacité. Afin d’obtenir des résultats
similaires avec des cellules somatiques humaines, l’efficacité de la transduction a été évaluée par
l’expression de la GFP (Green Fluorescent Protein). Le gène codant la GFP a été introduit dans des
fibroblastes humains (HDF : Human Dermal Fibroblast) avec un rétrovirus amphotropique.
L’expérience contrôle a consisté à introduire le gène codant la GFP dans des fibroblastes
embryonnaires de souris (MEF : Mouse Embryonic Fibroblats) avec un rétrovirus écotropique
(Morita et al, 2000). L’expression de la GFP a ensuite été observée en microscopie à fluorescence et
quantifiée en cytométrie de flux. Ces expériences révèlent que plus de 80% des MEF expriment la
GFP alors que les cellules HDF ne l’expriment qu’à 20%, soit une efficacité de transduction 4 fois
plus faible dans les fibroblastes humains. En vue d’améliorer ce rapport, les auteurs ont fait
exprimer de manière stable des récepteurs de souris (Slc7a1), cibles des rétrovirus écotropique, dans
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