Reprogrammation de cellules somatiques en cellules souches - M2 ...

caractéristiques des CSEh sont retrouvées chez les pseudo cellules souches générées (triméthylation
de la lysine 4 de l’histone H3 et démethylation de la lysine 27 de l’histone H3 dans les régions
promotrices des gènes Oct-4, Sox-2 et Nanog). L’absence de méthylation de l’histone H3 au niveau
des promoteurs des facteurs clefs de la pluripotence est synonyme d’un état chromatinien
transcriptionnellement actif. Par ailleurs, le profil opposé a été retrouvé pour des gènes associés au
développement (Figure 8).
La similitude épigénétique des pseudo cellules souches aux CSEh a également été démontrée par
des analyses de séquençage génomique au bisulfite et des mesures de l’activité promotrices de
gènes spécifiques de la pluripotence.
Figure 8 : Analyse des régions promotrices des pseudo cellules souches humaines. L’immunoprécipitation de la
chromatine sur des cellules préalablement fixées est réalisée soit avec un anticorps dirigé contre la lysine 4 triméthylée
de l’histone H3, soit avec un anticorps dirigé contre la lysine 27 triméthylées de l’histone H3. L’éluat est utilisé en PCR
quantitative.
IV. Les pseudo cellules souches obtenues peuvent être différenciées in vitro
Après avoir montré que les pseudo cellules souches générées étaient similaires au niveau
morphologique et moléculaire, leur capacité à se différencier selon les mêmes protocoles utilisés
pour différencier les CSEh a été étudiée.
La différenciation des pseudo cellules souches en cellules cardiaques a été initiée par un
protocole qui utilise l’activine A et la protéine morphogénétique osseuse 4 (BMP) (Laflamme
2007). Douze jours après l’induction de la différenciation, des groupes de cellules ont commencés à
battre (Figure 9 ; vidéo). Des expériences de RT-PCR montrent que ces cellules expriment des
marqueurs spécifiques de cardiomyocytes, tel que la troponine T cardiaque de type 2 (TnTc). A
12