AMIBES ET FLAGELLÃS

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COLORATION AU M.I.F. Technique de Sapero, Lawless et Strome, 1951 et Sapero Lawless 1953. Le nom de cette technique vient de ses 3 réactifs principaux : - Merthiolate sous forme de teinture au 1/1000 - Iode sous forme de Lugol à 5 % - Formol du commerce Réactifs Se procurer la « teinture de merthiolate 1/1000 » Lilly, formule n ° 99®, ou une préparation équivalente, qui contient du merthiolate, de l'alcool, de l'acétone et de l'éosine. A partir de cette teinture, préparer 480 ml de solution mère M.F. : Solution mère « M.F. » Teinture de merthiolate 1/1000 Lilly®.......................................... 200 ml Formol du commerce ..................................................................... 25 ml Glycérine........................................................................................ 5 ml Eau distillée.................................................................................... 250 ml Cette solution est stable pendant quelques mois. A conserver en flacon brun. Lugol 5 % Iode en paillettes.................................... 0,5 g Iodure de potassium............................... 1 g Eau distillée........................................... 10 ml Pour la préparation du Lugol, voir pages 32 et 33. Solution stable pendant 3 à 4 semaines seulement. A conserver en flacon brun à l'abri de la lumière. On peut procéder de 2 façons pour la coloration, selon les besoins, entre lame et lamelle ou en tube. COLORATION ENTRE LAME <strong>ET</strong> LAMELLE Préparation du réactif Préparer le mélange suivant : Teinture de merthiolate de 1/1000 pure ... Lugol 5 % frais......................................... Formol du commerce ............................... 7,75 ml 1 ml 1,25 ml Ce mélange n'étant stable que pendant 6 à 8 heures, il faut donc le préparer au fur et à mesure des besoins. On peut diviser par dix par exemple les quantités de réactifs en fonction du volume nécessaire. Si la solution de Lugol n'est pas fraîche il faut en augmenter la dose aux dépens de celle de la teinture de merthiolate. 9 Cahier de Formation – Amibes et flagellés intestinaux 1998
Mode opératoire Sur une lame, faire une dilution de selles dans de l'eau physiologique comme pour un examen direct, mais un peu plus épaisse, en utilisant moitié moins d'eau par exemple. On dépose sur cette dilution une goutte de la solution qu'on vient de préparer. Mélanger soigneusement avec le coin d'une lamelle l'appliquer ensuite sur la préparation. Luter avec de la vaseline ou du vernis à ongle et laisser colorer 20 à 30 minutes. Examiner la préparation. Intérêt - Examen presque extemporané, directement sur lame. - Examen des glaires sanglantes contenant des amibes qui risquent d'être dispersées dans une coloration en tube, ou qui risquent de ne pas être prélevées. - Coloration d'une suspension en CINa 9p. mille dans laquelle on a vu préalablement des amibes et des kystes à identifier. - Mais la préparation n'est pas permanente et se dessèche vite. Photo n° 1 Coloration au M.I.F. Forme végétative allongée, d'E. histolytica / E. dispar fixée en mouvement. Obj. X 100. 10 Cahier de Formation – Amibes et flagellés intestinaux 1998
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