ASCA-CHEK - TechLab

PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS DE SÉRUM ET PRÉPARATION DE DILUTIONS
REMARQUE : les échantillons sanguins doivent être prélevés par ponction veineuse et
leur coagulation doit être naturelle. Séparer le sérum du caillot. Conserver les
échantillons non dilués à -20°C si le test ne peut être réalisé dans un délai de 7 jours
après le prélèvement. Laisser décongeler les échantillons à température ambiante et
bien mélanger avant de préparer l’échantillon. Les échantillons dilués peuvent être
conservés entre 2° et 8°C pendant un maximum de 7 jours. Si possible, tester les
échantillons de sérum de moins de 7 jours. Bien mélanger (mixer) les
échantillons avant l’essai. Ceci inclut le mélange complet de l’échantillon
avant de le transférer sur le Diluant 1X ainsi que le mélange complet de
l’échantillon dilué avant de réaliser l’essai.
1. Préparer des échantillons dilués :
Pour les échantillons de sérum : préparer et étiqueter 3 tubes en plastique
pour chaque échantillon de sérum à tester. Pour chaque échantillon, ajouter 450 µl
de Diluant 1X dans chacun des trois tubes. Utiliser une pipette de transfert pour
ajouter 50 µl (élément évasé) de l’échantillon de sérum dans le premier tube
contenant du Diluant 1X pour une dilution au 1/10 et bien mélanger en utilisant un
agitateur vortex.
2. Ensuite, transférer 50 µl (élément évasé) de la dilution au 1/10 dans le deuxième
tube contenant le Diluant pour une dilution au 1/100 et bien mélanger à l’aide d’un
agitateur vortex.
3. Ensuite, transférer 50 µl du tube contenant la dilution au 1/100 dans le deuxième
tube avec le diluant pour obtenir une dilution au 1/1000 et bien mélanger à l’aide
d’un agitateur vortex.
Agiter les tubes pendant 10 secondes et les conserver à une température
comprise entre 2° et 8°C jusqu’à réalisation du test. Agiter une fois de plus avant de
transférer l’échantillon dilué vers le micropuits. Cette opération garantit un bon
mélange de l’échantillon.
PROCÉDURE DE TEST
Matériel fourni
2 Films adhésifs plastiques
100 pipettes de transfert évasées (élément évasé = 50 µl)
Pipette de transfert:
Ballon 300 µL 200 µL 100 µL 50 µL Embout évasé
FOR INFORMATIONAL USE
ONLY
Matériel et équipement nécessaires mais non fournis
Pulvérisateur pour Solution de lavage 1X
Agitateur vortex
Tubes de dilution de l’échantillon
Réfrigérateur de stockage
Réceptacle à déchets/Papier absorbant
Eau déionisée ou distillée
Bouteille de Diluant 1X Incubateur à 37°C
Lecteur ELISA capable d’effectuer une lecture à 450 nm ou à 450/620 nm
1. Déterminer le nombre de micropuits à utiliser. Ajouter 1 goutte de Contrôle Positif
(capsule noire) au micropuits de contrôle positif. Ajouter 50 µl (élément évasé) de
Diluant 1X dans un puits de contrôle négatif. Ajouter 100 µl (premier repère après
la partie évasée) d’échantillon dilué dans un micropuits.
2. Incuber les micropuits à 37°C ± 2°C pendant 30 minutes.
3. Secouer le contenu hors des micropuits dans un réceptacle à déchets.
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