HYPERTONIA ÉS NEPHROLOGIA - eLitMed.hu

2002; 6 (1):50–54. A VÖRÖSVÉRTEST MEMBRÁNTRANSZPORTEREK VIZSGÁLATA... 51
BEVEZETÉS A vesében a kalcium visszaszívódása a
tubulus egész hosszában történik. A glomerulusfiltratumból a
kalcium-visszaszívás elsõsorban a tubulusok proximalis szakaszán
megy végbe, míg a distalisabb szakaszon kisebb hányad
reabszorbeálódik. A proximalis szakaszon a kalcium nagyobb
része passzív módon paracellulárisan szívódik vissza,
elsõsorban az osmoticus viszonyok hatására. Ezen a szakaszon
aktív transzporttal a filtrált Ca 2+ -nak csak kb. 15–20 százaléka
szívódik vissza (1).
A distalis nephronszakaszon a visszaszívás szinte kizárólagosan
aktív transzport útján történik. Ide a glomerulusfiltratumban
lévõ kalciumnak megközelítõleg csak 10%-a jut el.
A kalcium a filtratumból az epithelialis sejtjek apicalis felszínén
lévõ kalciumcsatornákon keresztül passzív transzport révén
kerül a tubulussejtbe, míg a basa lis részen a Ca 2+ -ATPáz
aktív transzport révén és a Na + /Ca 2+ antiporter a Na + /K + -
ATPáz révén fenntartott transzmembrán Na + -gradiens energiája
segítségével juttatja ki a sejtekbõl az iont (2). A transzportfehérjék
csökkent mûködése miatt csökkenhet a filtratumból a
kalcium visszaszívása, és így nõhet a vizelettel ürített kalcium
mennyisége.
Hypercalciuriában nõ a vizelettel ürített kalcium mennyisége.
Az esetek jelentõs hányadában ennek okát nem sikerül
megállapítani. Az idiopathiás hypercalciuria családi halmozódása
felveti, hogy a jelenség hátterében genetikai eltérések
fordulhatnak elõ (3, 4). Ezek a genetikai eltérésen alapuló változások
feltételezhetõen a szervezet más sejtjeiben is megjelennek.
Bianchi és mtsai 1989-ben végzet vizsgálatukban azt
találták, hogy felnõtt hypercalciuriásokban a vörösvértestmembrán
Ca 2+ -ATPáz enzim mûködése megváltozik (5).
Adatok arra vonatkozóan azonban még nincsenek, vajon
idiopathiás hypercalciuriában szenvedõ gyermekekben is változik-e
a Ca 2+ -ATPáz enzim mûködése. Az sem ismert, hogy a
Na + -Ca 2+ -antiporter aktivitását meghatározó Na + /K + -ATPáz
mûködésében van-e változás.
Célkitûzésünk volt, hogy megvizsgáljuk: az idiopathiás
hypercalciuriában szenvedõ gyermekekben eltér-e a vörösvérsejt-membránban
a Ca 2+ -ATPáz aktivitása egészséges gyermekekhez
viszonyítva és hogyan változik a betegségben a
Na + /K + -ATPáz aktivitása.
BETEGEK ÉS MÓDSZEREK
BETEGEK Vizsgálatunkba a Semmelweis Egyetem I. sz
Gyermekklinika Nefrológiai járóbeteg-rendelésén gondozott
idiopathiás hypercalciuriában szenvedõ gyermekeket vontuk
be. A vizsgálatba olyan, idiopathiás hypercalciuriás betegek
kerültek (n=24; életkor: 10,64,8 év), akiknek a vizeletében a
vizsgálatok idején a kalcium/kreatinin hányados meghaladta a
0,6 mmol/mmol-t (átlagos kalciumürítés 0,85±0,2 mmol/
mmol). Ezeknél a betegeknél a hypercalciuria mellett nem diagnosztizáltak
olyan kóros állapotot, mely befolyásolta volna
a vizelettel ürített kalcium értékét.
A betegek a vizsgálatot megelõzõen kerülték a magas diétás
kalcium- és fehérjebevitelt és a túlzott konyhasófogyasztást.
A betegek a vizsgálatot megelõzõen nem szedtek kalciumháztartást
befolyásoló gyógyszert.
A kontrollcsoportot kisebb sebészeti beavatkozás miatt felvételre
került, egyébként egészséges és nem hypercalciuriás
gyermekek alkották (n=30, átlag életkor: 10,06,3 év, átlagos
kalciumürítés 0,350,05 mmol/mmol Ca 2+ /kreatinin). A vizsgálathoz
szükséges mintát a rutin laboratóriumi vizsgálathoz
levett vérbõl vettük ki.
MÓDSZEREK
Ca 2+ -ATPáz enzim aktivitás vizsgálat. A 200 l alvadasgátolt
vérbõl tisztított vörösvérsejtmembrán-preparátumot készítettünk
(6). A preparátumok fehérjetartalmát bovin szérum
albuminra vonatkoztatva adtuk meg (7). A mintákat a mérésekig
–80 °C-on tároltuk.
A vörösvértestmembrán-preparátumból spektrofotometriás
módszerrel határoztuk meg a Ca 2+ -ATPáz enzimaktivitását.
Kalmodulin stimulálta Ca 2+ -ATPáz aktivitás meghatározása
tisztított vörösvértest-membránban. Az enzimaktivitást
kalcium és kalmodulin jelenlétében, illetve hiányában észlelt
ATP-bomlás alapján határoztuk meg kapcsolt reakcióval
Hitachi 704 klinikai kémiai automatán (8).
A Ca 2+ -ATPáz aktivitást 2 mmol/l CaCl2 és 1 mg/l
kalmodulin (Boehringer, Mannheim, Germany, egyéb vegyszerek:
Sigma, St. Louis, LA ) jelenlétében, illetve hiányában
mért NADH-oxidáció különbség alapján határoztuk meg.
Na + /K + -ATPáz aktivitás meghatározása detergenssel elõkezelt
vörösvértest-membránban.ANa + /K + -ATPáz aktivitást
detergenssel elõkezelt vörösvértesteken határoztuk meg
Kazennov és mtsai módszerével határoztuk meg, melyhez
Boerhinger UV Phosphor kitet használtunk (9). A mérés
Hitachi 704-es klinikai kémiai automata segítségével történt.
Statisztikai analízis. Az egyes csoportok közötti különbséget
kétmintás t-próbával elemeztük. Az egyes változók közötti
összefüggés mértékét lineáris regresszióval vizsgáltuk. Adatainkat
átlag ± szórás formájában adtuk meg. A p