LA TECNOLOGIA del DNA RICOMBINANTE
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Rappresentazione schematica <strong>del</strong> clonaggio (II) - estremità coesive<br />
reannealing<br />
annealing<br />
Gli appaiamenti (annealing-reannealing) sono transitori a causa <strong>del</strong>la debolezza dei legami a<br />
idrogeno tra il numero ridotto di basi a livello <strong>del</strong>le estremità coesive. Questi legami vengono<br />
stabilizzati grazie all’uso <strong>del</strong>l’enzima <strong>DNA</strong> LIGASI in un processo noto con il nome di ligazione.<br />
Enzima T4 <strong>DNA</strong> ligasi (isolato dal batteriofago T4) forma legami covalenti tra il gruppo fosfato 5’<br />
di una estremità e il gruppo 3’ OH <strong>del</strong>la catena adiacente. L’enzima lavora a 10°C e richiede ATP.
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