7° Congresso Internazionale SOI

Semina e trasporto del prelievo
Dopo aver eseguito il prelievo è bene inoculare subito il materiale
in un mezzo solido. Inoculare d’abitudine sia in agar sangue che in
agar-cioccolato così come in ogni altro mezzo di coltura indicato.
Si rotola l’applicatore (spatola o cotton fioc) sulla superficie della
piastra, evitando di rompere la superficie del terreno ed inoculare
profondamente. Per evitare l’affollamento delle proliferazioni e
quindi le difficoltà interpretative è bene usare una piastra di agar
per ogni occhio in caso di infezioni bilaterali. Quando le piastre non
sono disponibili, si può usare un terreno di trasporto. Il mezzo di
trasporto più comunemente utilizzato è una provetta di vetro con
tappo a vite contenente un brodo di coltura (tioglicollato, triptosio).
In questo caso si toglie il tappo, si pone la punta dell’applicatore
nella provetta di brodo fino a immergerla nel terreno, quindi
si richiude chiude il tappo strettamente. Esistono kit per il trasporto
di prelievi per colture preparati commercialmente (Amies,
Stuard o altri). Sono facilmente disponibili e consistono di un cotton
fioc sterile confezionato con un contenitore cilindrico contenente
il terreno di trasporto che evita il disseccamento e deterioramento
del campione (Figura 6). Si usa il cotton fioc per il prelievo
che viene poi fatto scivolare indietro nel contenitore in modo che
la sua estremità arrivi a livello del terreno contenuto sul fondo della
provetta costituito da una colonnina di agar gel o da un mezzo
liquido, che consente il mantenimento di organismi aerobi o anaerobi
facoltativi. Il tampone viene inserito sterilmente in una colonna
di agar gel oppure si spreme la fiala sul fondo della provetta
rompendo il sigillo e permettendo al mezzo liquido di circondare
la punta dell’applicatore. Si richiude il contenitore e si invia al laboratorio.
Qualsiasi terreno utilizzato (piastre o terreni liquidi) deve essere
conservato a temperatura ambiente fino all’invio in laboratorio e in
nessun caso refrigerato.
È bene etichettare il campione con il nome del paziente e del medico
che ha effettuato il prelievo, data ed ora del prelievo, occhio
destro o sinistro, farmaci antibiotici usati e se sono stati interrotti 8 .
Interpretazione degli esami microbiologici
Gli studi di laboratorio fanno perno su due esami principali: esame
batterioscopico ed esame microbiologico.
Mentre gli studi batterioscopici consentono l’identificazione di bat-
teri, funghi e protozoi per visualizzazione diretta mediante colorazioni
specifiche, le tecniche di coltura microbiologica sono utilizzate
per la crescita e l’isolamento di batteri e funghi. Gli studi colturali
sono quelli più comunemente eseguiti e consistono nella
semina su terreni di coltura di materiale proveniente dall’occhio
interessato dall’infezione. Dopo il prelievo, prima della semina in
un terreno solido, il materiale può essere posto per alcuni giorni in
un terreno liquido di trasporto liquido (brodo) per favorire la prolifera
microbica. Una piccola quantità di liquido viene stesa su piastre
che vengono riposte in incubatori a 35-37°C. Dopo alcuni
giorni le piastre vengono controllate per verificare la proliferazione
batterica. La formazione di colonie multiple o confluenti lungo le
linee di inoculazione su una piastra di agar indicano con molta probabilità
l’isolamento di un agente patogeno, soprattutto se i
microrganismi isolati presentano le stesse caratteristiche dei germi
osservati in batterioscopia. Qualsiasi sviluppo al di fuori delle striature
è considerato una contaminazione. Le caratteristiche di sviluppo
sono specifiche per ciascun microrganismo. Quando vengono
utilizzati dei mezzi liquidi le contaminazioni non possono essere
distinte dai patogeni. Per questo la crescita di batteri in un
brodo, in assenza di una conferma di crescita su un mezzo solido o
di una microscopia positiva, deve essere interpretato con cautela.
Dopo lo sviluppo e l’isolamento di ciascun microrganismo, vengono
descritte le caratteristiche di ciascun patogeno e studiata la sensibilità
dei microrganismi a specifici antibiotici per ricercare eventuali
antibiotico-resistenze (antibiogramma). È importante considerare
che i dischi di diffusione per testare la sensibilità all’antibiotico
contengono l’antibiotico in una concentrazione simile alla
concentrazione plasmatica considerata terapeutica per l’antibiotico
in esame, che risulta spesso molto inferiore alla concentrazione che
l’antibiotico raggiunge durante un trattamento topico intensivo 9 .
Occorrono da 48 a 72 ore prima che i risultati della coltura siano
pronti, tuttavia i risultati preliminari possono essere disponibili
entro 24 ore o prima se è stato eseguito un vetrino per la batterioscopia.
Terreni di coltura
Il kit per lo scraping corneale a disposizione nell’ambulatorio
di pronto soccorso, dovrebbe prevedere al minimo un vetrino
per la batterioscopia e una piastra di agar sangue o un brodo
Figura 6. Terreni di coltura solidi piastre agar e agar sangue (sinistra), terreni di coltura liquidi tioglicollato (centro), mezzo di trasporto con terreno di Amies (destra).
35