3. Arsenico - Giornale Italiano di Medicina del Lavoro ed Ergonomia ...

20 G Ital Med Lav Erg 2009; 31:1
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INTERFERENTI ENDOCRINI SCHEDE MONOGRAFICHE 3. ARSENICO
ottenuto da un soggetto volontario dopo aggiunta standard
di 50 µg/l e hanno evidenziato occasionalmente
che in campioni conservati sino a 8 mesi questa forma
chimica subiva una parziale biotrasformazione compresa
tra il 2% e il 6%.
Secondo quanto riportato da Chen (2005) l’analisi delle
forme arsenicali in campioni di urina ottenuti da soggetti
volontari (pH 5,5-7,0) e analizzando il NIST 2670 (pH 4,4)
hanno confermato la stabilità degli analiti sino a 6 mesi
se i campioni biologici erano conservati a -20 o C. Le
forme oggetto di valutazione erano As III , As V , acido monometilarsonico,
acido dimetilarsinico e arsenobetaina.
Gli stessi autori hanno effettuato ulteriori valutazioni delle
perdite di As (diverse forme chimiche) sia durante la centrifugazione
del campione, sia per effetto della filtrazione
dell’urina. Nel primo caso è stata raccolto il sedimento
ottenuto da 50 ml di urina che è stato quindi solubilizzato
in HNO 3 70% e quindi trasferito in forno a microonde. La
quantità di As nel sedimento è stata analizzata mediante
HG-AAS. Per quanto riguarda la filtrazione dell’urina 10
ml di campione (urina tale e quale, urina con aggiunta
standard) sono stati suddivisi in 2 aliquote la prima delle
quali non è stata sottoposta a trattamento mentre la seconda
è stata filtrata su substrato di porosità pari a 0,45
µm. Le conclusioni dello studio di Ching Chen sono state
le seguenti: a) le perdite di As insolubile riferibili al sedimento
sono risultate inferiori al 5%; b) la perdita di As
dopo centrifugazione era compresa tra il 6% e il 50% a
conferma del fatto che l’As insolubile rimosso durante la
centrifugazione poteva determinare una sottostima della
reale esposizione. Il commento finale è che negli studi di
conservazione e di pretrattamento del campione di urina
intervengono numerose variabili, per cui una comparazione
tra i dati riportati in letteratura non appare del tutto
convincente se non addirittura contraddittoria. Si evidenzia
quindi la necessità di predisporre un protocollo
dettagliato che tenga conto dei fattori preanalitici, del pH
dei campioni di urina all’inizio e al termine della conservazione
(momento di effettuazione dell’analisi), della tecnica
strumentale utilizzata, del LOD, del grado di incertezza
delle misure, in quanto alcune variabili possono
rappresentare dei fattori di confondimento.
Va peraltro osservato che per quanto riguarda materiali
biologici come capelli e unghie la stabilità delle forme
chimiche è sicuramente maggiore. Per l’analisi dell’arsenico
totale, come per i metodi di speciazione, questi campioni
sono preparati generalmente secondo la procedura
dell’Agenzia Internazionale per l’Energia Atomica (IAEA).
Dopo accurato lavaggio, per eliminare l’As esogeno che
deriva dalla contaminazione dell’aria, 100 mg di campione
di capelli sono posti in un contenitore di Teflon,
trattati con acetone e quindi lavati con acqua ultrapura.
Le unghie sono trattate similmente ai capelli dopo spazzolatura.
I campioni sono pesati prima dell’analisi
(Mandal, 2003). In procedure di lavaggio più rigorose per
la rimozione completa della contaminazione superficiale,
le unghie sono incubate per 20 minuti in Triton-X100 1%
(v/v) prima dell’analisi. Resta da verificare comunque se
le condizioni di preparazione possono modificare la concentrazione
iniziale delle varie forme chimiche ma in
questo caso la verifica risulta notevolmente difficoltosa in
quanto non sono possibili aggiunte standard alla matrice.
15. Arsenico e biomarcatori
Nel caso dell’esposizione ambientale e occupazionale
ad As è stata oggetto di maggiore utilizzazione l’analisi
dell’urina e in misura minore del sangue. Nella fase iniziali
di impiego di questi indicatori biologici si è privilegiata
la determinazione del contenuto totale di As e solo
successivamente, con l’evoluzione tecnico strumentale
si è fatto ricorso al riconoscimento delle diverse forme
arsenicali nei fluidi biologici considerati. Al riguardo ulteriori
approfondimenti e ricerche si rendono necessarie
per l’identificazione di ulteriori forme metaboliche
(arsenozuccheri) in quanto l’alimentazione può rappresentare
un significativo fattore di confondimento nell’interpretazione
del dato finale.
L’arsenico urinario è un biomarcatore che può essere impiegato,
tenuto conto delle premesse sopra riportate, sia
per studi su gruppi di popolazione generale sia per il monitoraggio
di soggetti professionalmente esposti ad As
(Hughes, 2006). Trattandosi di un biomarcatore di esposizione
recente è evidente che l’utilizzo dell’As in urina
può risultare estremamente utile nel caso in cui l’esposizione
sia continuativa, come ad esempio si verifica in alcune
popolazioni asiatiche dove la contaminazione dell’acqua
destinata al consumo umano rappresenta una
fonte costante di intake di arsenico inorganico, con evidenti
riflessi sulla dose quotidianamente assunta con gli
alimenti. Viceversa, risultano evidenti i limiti di utilizzazione
dell’As urinario nel caso di soggetti professionalmente
esposti, se la durata dell’esposizione inalatoria ad
As non è continuativa. Tale considerazione vale, in misura
anche maggiore, per il contenuto di As nel sangue o nel
plasma, in quanto in questo compartimento la concentrazione
di As e delle eventuali forme chimiche presenti,
tende a decrescere ancora più rapidamente.
Una tipologia di indicatori biologici, per certi versi più
accessibile, è rappresentata dall’analisi dei capelli e
delle unghie che possono venir considerati come biomarcatori
a medio e lungo termine. Al riguardo si fa
presente che la velocità di crescita del capello è stimata
pari a 1 cm/mese per cui dalla sua analisi si possono ottenere
informazioni su un periodo medio lungo di esposizione
o limitandosi ai segmenti più recenti (vicini alla
cute) si può arrivare a definire una sorta di calendario
dell’esposizione più recente (Karagas, 1996 e 2000).
Tuttavia la preparazione dei campioni, come in prece-