Mitogen-stimulated DAT: a new method for the ... - Blood Transfusion

W Barcellini et al.MS-DAT in the clinical follow up of AIHAMS-DAT was performed in 6 AIHA regularlyfollowed at the out-patient department. The test wasperformed at each medical examination, together withblood counts and haemolytic parameters. Two typicalcases are shown in Figure 1.The first case (left panel) was a 70 years old manwith an acute onset of typical warm AIHA,subsequently treated with steroid. The therapyinduced a progressive increase of haemoglobin levels(from 5.8 to 15.3 g/dL in 7 months), normalisation ofthe haptoglobin levels (from 200 to 1,370 mg/L),together with a decrease of MS-DAT values (from 4,121to 374 IgG ng/mL).The second case (right panel) was a 50 years oldwoman with AIHA in clinical remission (Hb 13.6 g/dL)on low-dose steroid therapy. During the follow-up ahaemolytic relapse occurred, with decrease ofhaemoglobin (from 13.6 to 10 g/dL) and haptoglobin(from 590 to 200 mg/L) levels. Interestingly, MS-DATshowed an increased positivity which preceded theclinical worsening (from 41 to 176 IgG ng/mL) and wasclearly positive at the time of overt anaemia (355 and528 IgG ng/mL).The mild haemolytic relapse was promptly controlledby steroid therapy which induced a normalisation ofhaemoglobin (from 10 to 13.4 g/dL) and haptoglobin(from 200 to 430 mg/L) levels and a decrease of MS-DAT values (from 528 to 166 IgG ng/mL).DiscussionResults presented in this paper showed that MS-DAT was positive in DAT-negative patients with ahistory of AIHA, who were in clinical and laboratoryremission and, more interestingly, in patientstentatively diagnosed as DAT-negative AIHA on thebasis of exclusion of other causes of haemolysis andof the clinical response to steroid therapy. Moreover,MS-DAT was positive in 1/3 of DAT-negative B-CLLpatients without haemolytic features, confirmingprevious findings 19 .Absolute values of IgG bound to RBC are greaterin mitogen-stimulated cultures, as compared tounstimulated ones, both in AIHA and in B-CLLpatients 17,19 .On the contrary, mitogen stimulation has no effectadese alle emazie sono maggiori nelle colture di sangue interostimolate con mitogeni se paragonati a quelli rilevabili incolture non stimolate, sia nei pazienti affetti da MEA che inquelli affetti da B-LLC 17,19 . Al contrario, la stimolazione conmitogeni non ha alcun effetto nei controlli, dove non visono linfociti B potenzialmente autoreattivi, così da esserestimolati in vitro a produrre anticorpi antieritrocitari. Nelloro insieme, questi risultati indicano che la stimolazionecon mitogeni sembra essere in grado di svelareun'autoimmunità antieritrocitaria latente, sia nella MEA inremissione clinica che nella B-LLC. Questo dato potrebbeessere utile per continuare il monitoraggio clinico elaboratoristico dei pazienti con MEA in remissione e perprogrammare un follow-up più intensivo nei pazienti B-LLC,soprattutto in quelli in trattamento con fludarabina 23-26 .Tuttavia, per accertare il valore predittivo del test, si rendenecessario un controllo clinico a distanza di tempo deipazienti affetti da B-LLC con MS-DAT positivo. Abbiamo,inoltre, individuato 7 pazienti con diagnosi di MEA TADnegativa,presuntivamente posta sulla base dell'esclusionedi altre cause di emolisi: tale diagnosi è stata confermatadalla positività di MS-DAT. È noto che tutti i metodi adisposizione per la diagnosi di MEA possono dare risultatifalsamente negativi e che è necessario disporre di una batteriadi test, piuttosto che di un singolo tipo di esame 2,10,16 . Diconseguenza, MS-DAT potrebbe essere proposto come testsupplementare per la diagnosi di MEA. La negatività delTAD eseguito con metodiche standard è spesso dovuta adnumero esiguo di molecole immunoglobuliniche presentisulla superficie eritrocitaria 8 . Così come si osserva nella MEAin remissione e nella B-LLC, la stimolazione con mitogenipuò provocare, anche nelle forme di MEA TAD-negative, laproduzione in vitro di anticorpi e la loro conseguenteadesione alle emazie autologhe presenti nella coltura,determinando la positività del TAD. Infine, MS-DAT è statoeseguito routinariamente nel corso dei follow-up di pazientiaffetti da MEA e i valori ottenuti sono risultati correlarecon il decorso clinico, con i parametri emolitici e con larisposta alla terapia. Un dato di particolare interesse è cheMS-DAT ha rivelato una aumentata positività cheprecedeva il peggioramento clinico, indicando, una voltadi più, che la stimolazione con mitogeni è in grado di svelareuna autoimmunità latente e agire da "cassa di risonanza"per l'individuazione di una risposta autoimmunitaria.ConclusioniIl test che abbiamo descritto in questo lavoro sembra ingrado di evidenziare un'autoimmunità antieritrocitaria latente,sia in MEA in fase di remissione clinica sia in corso di B-LLC.134Blood Transf 2003; 2: 127-36