in hiposmotic test with semen freezability of Nelore bulls) L.F. Martins 1 , R.O. Pinho 1 , R.M. Paraizo 1 , R.R. Oliveira 2 , J.D. Guimarães 1 , E.F. Castilho 1 , J.G.S. Neves 1 , P.T. Silva 1 Departamento <strong>de</strong> medicina veterinária da Universida<strong>de</strong> Fe<strong>de</strong>ral <strong>de</strong> Viçosa 1 ; Departamento <strong>de</strong> Zootecnia da Universida<strong>de</strong> Fe<strong>de</strong>ral <strong>de</strong> Viçosa 2 . E-mail: leonardofmpr@yahoo.com.br Introdução A integrida<strong>de</strong> funcional da membrana plasmática medida pelo teste hiposmótico é uma importante ferramenta para predizer a capacida<strong>de</strong> <strong>de</strong> fertilização do sêmen bovino in natura e congelado/<strong>de</strong>scongelado. Mas ainda não se enten<strong>de</strong> completamente os resultados obtidos e não existe uma padronização da técnica para sêmen <strong>de</strong> touros zebuínos. O objetivo <strong>de</strong>ste trabalho foi estudar diferentes osmolarida<strong>de</strong>s e tempos <strong>de</strong> incubação ao se realizar o teste hipoosmótico e suas relações com a congelabilida<strong>de</strong> do sêmen <strong>de</strong> touros zebuínos. Material e Métodos Foram utilizados 30 ejaculados <strong>de</strong> 6 touros adultos da raça Nelore. No sêmen in natura foi feita avaliação física e morfológica, a coloração supravital e o teste hiposmótico. Para o teste hiposmótico foram utilizadas soluções <strong>de</strong> citrato <strong>de</strong> sódio e frutose com osmolarida<strong>de</strong>s <strong>de</strong> 60, 100, 150mOsm/kg e água <strong>de</strong>stilada com 15, 30 e 60 minutos <strong>de</strong> período <strong>de</strong> incubação a 37ºC. Após a criopreservação, as amostras foram <strong>de</strong>scongeladas e foram realizados os testes hipoosmótico, coloração supravital, teste <strong>de</strong> termo-resistência lento e a coloração fluorescente. Resultados e Discussão Os valores médios e <strong>de</strong>svios padrões do percentual <strong>de</strong> espermatozói<strong>de</strong>s reativos em sêmen in natura e congelado/<strong>de</strong>scongelado foram 60,3±21,6 e 30,8±11,8, respectivamente. Não foram <strong>de</strong>tectadas interações entre os tempos e as osmolarida<strong>de</strong>s (P>0,05), apenas a água <strong>de</strong>stilada apresentou diferença em relação aos valores médios obtidos no teste hiposmótico realizado no sêmen in natura (P0,05). Não se <strong>de</strong>tectou diferenças entre os tempos <strong>de</strong> incubação tanto no sêmen in natura e congelado/<strong>de</strong>scongelado (P>0,05). O teste hiposmótico se correlacionou com as principais características <strong>de</strong> qualida<strong>de</strong> seminal e os valores obtidos nos testes complementares (P
Resultados e Discussão Os resultados médios <strong>de</strong> motilida<strong>de</strong> <strong>de</strong> 44±2, 38±4, 42±1 e 42±1%, respectivamente para os tratamentos a) caixa sem forro metálico e rampa fixa, b) caixa com forro metálico e rampa móvel, c) caixa com forro metálico e rampa fixa e d) caixa sem forro metálico e rampa móvel, não apresentaram significância estatística (P>0,05). As médias <strong>de</strong> vigor variaram <strong>de</strong> 2,8 a 3,8 para os quatro tratamentos, não sendo significativas as diferenças. Quanto à avaliação dos diluidores tris e lactose, também não houve diferenças significativas sobre as médias <strong>de</strong> motilida<strong>de</strong> (41±1 e 38±7%), vigor (3±1 e 4±1) pós-<strong>de</strong>scongelação, bem como nas médias <strong>de</strong> motilida<strong>de</strong> TTR (16±1 e 19±1%) e no HOST (39±1 e 30±9%). Estes resultados estão <strong>de</strong> acordo com os padrões adotados pelo CBRA (1998) para o sêmen bovino congelado (30% <strong>de</strong> motilida<strong>de</strong> e 3 <strong>de</strong> vigor), e em concordância com os encontrados por Gonzalez (2004). A opção para a utilização <strong>de</strong> tipos <strong>de</strong> caixas, rampas e diluidores estarão na <strong>de</strong>pendência da avaliação dos custos incluídos na aquisição dos diferentes equipamentos. Referências bibliográficas Colégio Brasileiro <strong>de</strong> Reprodução Animal. Manual para Exame Andrológico e Avaliação <strong>de</strong> Sêmen Animal. 2 ed, n. 21, Belo Horizonte: CBRA, 49p., 1998. Gonzalez, R. A. F. Efeito da criopreservação usando diferentes técnicas <strong>de</strong> congelação e crioprotetores sobre parâmetros espermáticos e a integrida<strong>de</strong> <strong>de</strong> membranas do espermatozói<strong>de</strong> bovino. 2004, Universida<strong>de</strong> <strong>de</strong> São Paulo – Pirassunuga/SP. (Tese <strong>de</strong> doutorado). Mies Filho, A. Reprodução dos animais e IA. 5 ed. Porto Alegre, 783p, 1982. Palavras-chave: Criopreservação do sêmen. Caixas e rampas <strong>de</strong> congelação. Diluidores. Keywords: Sêmen cryopreservation. Boxes and freezing ramps. Dilutors. 049 Qualida<strong>de</strong> do sêmen <strong>de</strong> touros do grupo genético Pantaneiro estocado no Banco Brasileiro <strong>de</strong> Germoplasma Animal (Semen quality of Pantaneiro bulls storaged in the Brazilian Bank of Animal Germoplasm) A.F. Ramos 1 , N.V. Nascimento 1, A.V.R. Silva 1,2* , H.C.A. Teixeira 1,2** , A.A. Egito 1 , M.S.M. Albuquerque 1 , S.R. Paiva 1 , S.T.R. Castro 1 , A.S. Mariante 1 1 2 Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia; UnB – Universida<strong>de</strong> <strong>de</strong> Brasília. E-mail: aleframos@cenargen.embrapa.br Introdução A raça Pantaneira, <strong>de</strong>scen<strong>de</strong>nte provavelmente <strong>de</strong> bovinos europeus, é formada por animais <strong>de</strong> pequeno porte e gran<strong>de</strong> rusticida<strong>de</strong>. Muitas <strong>de</strong>stas características se <strong>de</strong>vem a adaptação <strong>de</strong>ste grupo genético ao distinto ecossistema do Pantanal, caracterizado por áreas inundadas na maior parte do ano. Esses animais <strong>de</strong>sempenharam papel prepon<strong>de</strong>rante na economia <strong>de</strong>sta região e atualmente encontram-se ameaçados <strong>de</strong> extinção. A Embrapa conduz um programa <strong>de</strong> conservação <strong>de</strong>sta e <strong>de</strong> outras raças naturalizadas brasileiras cuja uma das ativida<strong>de</strong>s é manter e enriquecer um Banco <strong>de</strong> sêmen e embriões. Desta forma, o objetivo <strong>de</strong>ste trabalho foi o <strong>de</strong> avaliar a qualida<strong>de</strong> do sêmen congelado armazenado ao longo <strong>de</strong> 24 anos <strong>de</strong> coletas, <strong>de</strong> reprodutores da raça Pantaneira, estocado no Banco Brasileiro <strong>de</strong> Germoplasma Animal. Material e Métodos Uma dose <strong>de</strong> cada uma das 80 partidas <strong>de</strong> sêmen, equivalente a 6.650 doses <strong>de</strong> sêmen congeladas <strong>de</strong> 13 reprodutores Pantaneiros, foi <strong>de</strong>scongelada em banho-maria a 37ºC e avaliada quanto à motilida<strong>de</strong> progressiva MP (microscopia <strong>de</strong> luz), vigor (microscopia <strong>de</strong> luz), morfologia espermática (contraste <strong>de</strong> fase) e integrida<strong>de</strong> <strong>de</strong> acrossoma (trypan blue + giemsa). Resultados e Discussão Todas 80 partidas foram avaliadas e 31,2% (25/80) foram consi<strong>de</strong>radas excelentes, apresentando 42,0±3,2% <strong>de</strong> motilida<strong>de</strong> progressiva (MP), 3,3±0,4 <strong>de</strong> vigor, 86,1±6,5% <strong>de</strong> espermatozói<strong>de</strong>s normais (EN), 4,9±1,7% <strong>de</strong> <strong>de</strong>feitos maiores (DMa), 9,0±5,6% <strong>de</strong> <strong>de</strong>feitos menores (DMn), 51,6±10,2% <strong>de</strong> espermatozói<strong>de</strong>s vivos com acrossoma íntegro (EVAI) e 3,7±1,7% <strong>de</strong> espermatozói<strong>de</strong>s com acrossoma reagido (EAR). Além <strong>de</strong>ssas, 43,8% (35/80) alcançaram os padrões mínimos exigidos pelo CBRA apresentando 32,1±2,5% <strong>de</strong> MP, 3,0±0,5 <strong>de</strong> vigor, 83,1±6,7% <strong>de</strong> EN, 7,9±3,8% <strong>de</strong> DMa, 9,0±3,9% <strong>de</strong> DMn, 54,1±12,8% <strong>de</strong> EVAI e 4,1±1,8% <strong>de</strong> EAR. Foram consi<strong>de</strong>rados questionáveis 25% (20/80) das partidas, apresentando 17,2±6,8% <strong>de</strong> MP, 2,4±0,5 <strong>de</strong> vigor, 83,6±8,7% <strong>de</strong> EN, 6,8±4,0% <strong>de</strong> DMa, 9,6±5,1% <strong>de</strong> DMn, 37,9±17,6% <strong>de</strong> EVAI e 4,6±2,6% <strong>de</strong> EAR. Oitenta por cento do sêmen <strong>de</strong> reprodutores da raça Pantaneira estocado no BBGA apresentou os critérios mínimos <strong>de</strong> qualida<strong>de</strong> para uso em programas <strong>de</strong> reprodução assistida. Este material genético po<strong>de</strong>rá ser utilizado, por exemplo, tanto em programas <strong>de</strong> recuperação do efetivo populacional da raça bem como em experimentos <strong>de</strong> cruzamentos com raças comerciais que visem avaliar características <strong>de</strong> rusticida<strong>de</strong> e adaptação ao ambiente em sistemas <strong>de</strong> produção. Por se tratar <strong>de</strong> um material genético <strong>de</strong> valor estratégico, o sêmen consi<strong>de</strong>rado questionável continuará estocado no BBGA e po<strong>de</strong>rá ser utilizado associado a outras biotécnicas reprodutivas que permitam a otimização dos resultados. Palavras-chave: bovino; conservação ex situ; criopreservação; raça naturalizada Keywords: bovine, cryopreservation; ex situ conservation, local adapted breed *Bolsista do CNPq - processo n° 552397/2005-9 **Bolsista CAPES/UnB
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