Introdução Apesar dos avanços na criopreservação do sêmen bovino, persistem dúvidas sobre a função do tempo <strong>de</strong> equilíbrio na viabilida<strong>de</strong> espermática [1]. Testes <strong>de</strong> exaustão espermática têm sido <strong>de</strong>senvolvidos para se avaliar a habilida<strong>de</strong> <strong>de</strong> sobrevivência e manutenção da fertilida<strong>de</strong> do espermatozói<strong>de</strong> (sptz) por longos períodos a <strong>de</strong>terminada temperatura [2]. O objetivo <strong>de</strong>sse estudo foi avaliar o efeito do tempo <strong>de</strong> equilíbrio e do diluidor na longevida<strong>de</strong> espermática, em sêmen bovino criopreservado, utilizando-se o Teste <strong>de</strong> Termorresistência (TTR). Material e Métodos Amostras <strong>de</strong> sêmen <strong>de</strong> 12 touros Gir leiteiro, coletadas por eletroejaculação, foram avaliadas <strong>de</strong> acordo com CBRA [3]. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas, diluídas com diferentes diluidores (Bioxcell ou TRIS) a 34ºC (50x10 6 sptz/mL). O sêmen diluído foi resfriado até 25ºC, envasado em palhetas <strong>de</strong> 0,50 mL e transferidas para máquinas <strong>de</strong> congelamento automatizado (TK-3000). Utilizaram-se taxas <strong>de</strong> resfriamento (0,25°C/min.) e congelamento (20°C/min) para todos os seis tratamentos (2 diluidores e 3 tempos <strong>de</strong> equilíbrio a 5ºC- 0h(T0), 2h(T2) e 4h(T4)). Após <strong>de</strong>scongelamento (37ºC/30s.) as amostras foram submetidas ao TTR, a 45ºC/1h, e a motilida<strong>de</strong> avaliada por microscopia óptica. Resultados e Discussão Motilida<strong>de</strong> inicial com maiores valores foram registradas para T2 e T4 (P
Beletti, M.E.; Costa, L.F.; Guardieiro, M.M. Morphometric features and chromatin con<strong>de</strong>nsation abnormalities evaluated by toluidine blue staining in bull spermatozoa, Brazilian Journal of morphological Science, Campinas, v. 22, n.2, p. 85-90, 2005 Gry B, B.H.; Ian, D.M.; Annette,K.E.; Torben,G.; Preben,C. DNA integrity in sexed bull sperm assessed by neutral Comet assay and sperm chromatin structure assay. Theriogenology, Stoneham, v.63, p.1789-1802, 2005 Palavras-chave: Espermatozói<strong>de</strong>s, sexagem <strong>de</strong> sêmen, morfometria. Keywords: Spermatozoon, semen sexing, morphometry. Agra<strong>de</strong>cimento: Fundação <strong>de</strong> Amparo à Pesquisa do Estado <strong>de</strong> Minas Gerais – FAPEMIG. 061 Comparação <strong>de</strong> dois diluidores <strong>de</strong> sêmen bovino na fertilização in vitro (Comparison of two bovine semen exten<strong>de</strong>rs in the in vitro fertilization) R.B. Prado, M.B. Koivisto, H. Atique. Netto, M.B. Fernan<strong>de</strong>s, T.N. Lima, J.C. Torres UNESP-Campus Araçatuba / UNIRP. E-mail: rodolfo.fertvitro@unirp.edu.br Introdução O processo <strong>de</strong> criopreservação afeta a capacida<strong>de</strong> funcional dos espermatozói<strong>de</strong>s, diminuindo a fertilida<strong>de</strong>. A diluição do sêmen ajuda na preservação <strong>de</strong> sua viabilida<strong>de</strong>, protegendo-os contra o choque térmico. Os diluidores são compostos por substâncias iônicas e não-iônicas, crioprotetores, fonte <strong>de</strong> energia, enzimas e antibióticos. A gema <strong>de</strong> ovo é um dos principais crioprotetores utilizados, porém apresenta alguns inconvenientes, como o risco <strong>de</strong> contaminação por bactérias e difícil padronização. O uso <strong>de</strong> diluidores livres <strong>de</strong> proteína animal po<strong>de</strong> ser uma alternativa para a diluição do sêmen bovino. Material e Métodos O ejaculado <strong>de</strong> quatro touros foi dividido em duas partes iguais, uma <strong>de</strong>las foi subemtida ao diluidor Tris e gema <strong>de</strong> ovo (A) enquanto a outra, ao diluidor à base <strong>de</strong> lecitina <strong>de</strong> soja (Andromed®) (B). Após a diluição o sêmen foi congelado e armazenado em nitrogênio líquido. Uma palheta <strong>de</strong> cada amostra foi <strong>de</strong>scongelada e utilizada na fecundação in vitro (FIV), utilizando-se 25 oócitos provenientes <strong>de</strong> ovários <strong>de</strong> matadouro, realizando-se 8 repetições. A maturação, fecundação e cultivo in vitro foram realizados em estufa a 38,5°C, com 5% <strong>de</strong> CO2 em ar e umida<strong>de</strong> realtiva <strong>de</strong> 99%. Foram analizadas as taxas <strong>de</strong> clivagem, taxa <strong>de</strong> blastocistos e taxa <strong>de</strong> eclosão. Resultados e Discussão A taxa <strong>de</strong> clivagem para o diluidor A e B foi <strong>de</strong> 66,58% e 66,75%, respectivamente. A perecntagem média <strong>de</strong> blastocistos e blastocistos eclodidos para o diluidor A foi <strong>de</strong> 33,58% ; 76,15% e 33,17% ; 76,76% para o diluidor B, respectivamente. Os valores <strong>apresentados</strong> <strong>de</strong>monstram que não houve diferença significativa (p>0,05) entre os diluidores analisados. Assim, a lecitina <strong>de</strong> soja oferece uma alternativa para a congelação do sêmen bovino a ser utilizado na FIV, diminuindo a possibilida<strong>de</strong> <strong>de</strong> contaminação que os diluidores à base <strong>de</strong> proteína animal proporcionam, facilitando sua exportação. Referências bibliográficas Aires, V.A.; Hinsch, K.D.; Schloesser, F.M.; Bogner, K. Schloesser, S.M.; Hinsch, E. In vitro and in vivo comparison of egg yolk-based and soybean lecithin-based exten<strong>de</strong>rs for cryopreservation of bovine semen. Theriogenology, v.60, p.269- 279, 2003. Thun, R., Hurtado, M., Janett, F. Comparison of Biociphos-Plus ® and TRIS-egg yolk exten<strong>de</strong>r for cryopreservation of bull semen. Theriogenology, v.57, p.1087-1094, 2002. Palavras-chave: Sêmen, Gema <strong>de</strong> ovo, Lecitina <strong>de</strong> soja, Fecundação in vitro. Keywords: Semen, Egg Yolk, Soybean Lecithin, In vitro Fertilization. 062 Avaliação <strong>de</strong> diferentes sistemas <strong>de</strong> refrigeração na viabilida<strong>de</strong> espermática <strong>de</strong> sêmen bovino criopreservado (Assessment of bovine spermatozoa viability using different cooling protocols prior to cryopreservation) E.G. Becker, V.S. Truzzi, G.R. Pereira, L.C. Siqueira, C.K. Severo, J.F.C. Oliveira, P.B.D. Gonçalves Laboratório <strong>de</strong> Biotecnologia e Reprodução Animal - BioRep, Universida<strong>de</strong> Fe<strong>de</strong>ral <strong>de</strong> Santa Maria, 97105-900, Santa Maria, RS, Brasil. E-mail: bayard@ufsm.biorep.br Introdução A criopreservação <strong>de</strong> sêmen é uma importante ferramenta para conservação <strong>de</strong> sêmen bovino, entretanto, a utilização <strong>de</strong>sta técnica danifica as organelas e membranas do espermatozói<strong>de</strong>, induzindo também mudanças na capacitação espermática e reação acrossomal. Consequentemente, a utilização <strong>de</strong> protocolos <strong>de</strong> resfriamento visa minimizar esses efeitos <strong>de</strong>letérios nos espermatozói<strong>de</strong>s. O objetivo <strong>de</strong>ste estudo foi verificar os diferentes tipos <strong>de</strong> protocolos <strong>de</strong> resfriamento sobre a qualida<strong>de</strong> <strong>de</strong> espermatozói<strong>de</strong>s bovinos pré e pós <strong>de</strong>scongelamento. Material e Métodos Sêmen foi coletado <strong>de</strong> um touro da raça Jersey duas vezes por semana pelo método <strong>de</strong> vagina artificial, transportado para
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